1 拼音
nuè jí jiān jiē miǎn yì yíng guāng shì yàn
2 概述
疟疾的血清学诊断方法颇多,本文仅介绍常用的间接免疫荧光试验法。
3 检查名称
疟疾间接免疫荧光试验
4 分类
血清学检查 > 补体结合试验
5 疟疾间接免疫荧光试验的原理
受检血清中的抗疟原虫抗体与血片上的疟原虫抗原相结合,继加荧光标记的抗人IgG抗体,使与血片上的人IgG作用,而在抗原部位显现荧光。
6 试剂
(1)抗原血片采用食蟹猴疟原虫薄血膜片和恶性疟原虫薄血膜片。专业研究机构可供应。保存于4℃或低温冰箱中备用。
(2)荧光标记抗人IgG,国内有商品供应。
7 操作方法
(1)按常规方法采集血清或用口径1.2cm的玻(铁)管的管口在滤纸上压出圆形印迹。从受检者耳或手指取血并加满圆圈,其血量约为20μl(约相当血清10μl),编号后阴干,放入有干燥剂的密封塑料袋内,运送至实验室,4℃可保存半年,-20℃可保存2年。检测时将干血滴剪下后放入反应板凹孔中,加0.01mol/L磷酸盐缓冲液0.2ml(pH值7.2),4℃浸泡过夜即成相当于1∶20的血清稀释液。
(2)从冰箱中取出抗原血片,立即用电风扇吹干,用特种蜡笔将每张抗原片划分成若干小格,每小格试1个标本或1个滴度,每格加血清1滴。每批试验均需设阴、阳性参考血清和PBS空白对照。加血清后立即移入湿盒,37℃温育30min后,用0.01mol/L PBS(pH值7.2)缓慢冲洗后放入有PBS的缸内浸泡5~10min。
(3)逐格滴加用0.01mol/L PBS(pH值7.2)稀释成1∶10的抗人IgG荧光抗体,置湿盒内37℃30min,同法洗涤后,每小格中加甘油和PBS等量混合液或蒸馏水,覆以盖片,于荧光显微镜下镜检反应结果。
(4)结果判读:以裂殖体和大滋养体胞浆的荧光强度和结构清晰程度区分,无荧光为(-),荧光微弱、形态结构不清为(±),荧光较弱、形态结构尚清楚为(+),另外根据荧光明亮度和结构清晰度的增加依次分为(2+)~(4+)。
一般以1∶20血清稀释度时荧光强度(+)以上判为阳性。
8 正常值
阴性<1∶20。
9 化验结果临床意义
荧光抗体法的阳性检出率,一般均高于原虫检出率。对恶性疟疾患者抗体效价为1∶80或更高,可认为是带虫者或近期感染疟疾的标志。
10 附注
该技术高度敏感和特异,多以病原体为抗原,直观性强,可用于多种寄生虫病的诊断如疟疾。
11 相关疾病
疟疾