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GBZ/T 240.21—2011 化学品毒理学评价程序和试验方法 第21部分:致畸试验

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1 拼音

GBZ/T 240.21—2011 huà xué pǐn dú lǐ xué píng jià chéng xù hé shì yàn fāng fǎ dì 21bù fēn :zhì jī shì yàn

2 英文参考

Procedures and tests for toxicological evaluations of chemicals—Part 21:Teratogenicity test

ICS 13.100

C 52

中华人民共和国国家职业卫生标准 GBZ/T 240.21—2011《化学品毒理学评价程序和试验方法 第21部分:致畸试验》(Procedures and tests for toxicological evaluations of chemicals—Part 21:Teratogenicity test)由中华人民共和国卫生部于2011年08月19日发布,自2012年03月01日起实施。

3 前言

根据《中华人民共和国职业病防治法》制定本部分。GBZ/T 240《化学品毒理学评价程序和试验方法》现分为以下四十四部分:

——第1部分:总则;

——第2部分:急性经口毒性试验;

——第3部分:急性经皮毒性试验;

——第4部分:急性吸入毒性试验;

——第5部分:急性眼刺激性/腐蚀性试验;

——第6部分:急性皮肤刺激性/腐蚀性试验;

——第7部分:皮肤致敏试验;

——第8部分:鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验

——第9部分:体外哺乳动物细胞染色体畸变试验;

——第10部分:体外哺乳动物细胞基因突变试验;

——第11部分:体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验;

——第12部分:体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验;

——第13部分:哺乳动物精原细胞/初级精母细胞染色体畸变试验;

——第14部分:啮齿类动物显性致死试验

——第15部分:亚急性经口毒性试验;

——第16部分:亚急性经皮毒性试验;

——第17部分:亚急性吸入毒性试验;

——第18部分:亚慢性经口毒性试验;

——第19部分:亚慢性经皮毒性试验;

——第20部分:亚慢性吸入毒性试验;

——第21部分:致畸试验;

——第22部分:两代繁殖毒性试验

——第23部分:迟发性神经毒性试验;

——第24部分:慢性经口毒性试验;

——第25部分:慢性经皮毒性试验;

——第26部分:慢性吸入毒性试验;

——第27部分:致癌试验;

——第28部分:慢性毒性/致癌性联合试验;

——第29部分:毒物代谢动力学试验;

——第30部分:皮肤变态反应试验-局部淋巴结法;

——第31部分:大肠杆菌回复突变试验;

——第32部分:酵母菌基因突变试验;

——第33部分:果蝇伴性隐性致死试验;

——第34部分:枯草杆菌基因重组试验;

——第35部分:体外哺乳动物细胞程序外DNA合成(UDS)试验;

——第36部分:体内哺乳动物外周血细胞微核试验;

——第37部分:体外哺乳动物细胞姊妹染色单体交换;

——第38部分:体内哺乳动物骨髓细胞姊妹染色体交换;

——第39部分:精子畸形试验;

——第40部分:繁殖/生长发育毒性筛选试验;

——第41部分:亚急性毒性合并繁殖/发育毒性筛选试验;

——第42部分:一代繁殖试验;

——第43部分:神经毒性筛选组合试验;

——第44部分:免疫毒性试验。

本部分为GBZ/T 240的第21部分。

本部分由卫生部职业卫生标准专业委员会提出。本部分由中华人民共和国卫生部批准。

本部分起草单位:上海市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心职业卫生中毒控制所。本部分主要起草人:肖萍、孙金秀、薛春霄、林铮。

化学品毒理学评价程序和试验方法

第21部分:致畸试验

4 1 范围

GBZ/T 240的本部分规定了动物致畸试验的目的、试验概述、试验方法、数据处理与结果评价、评价报告和结果解释。

本部分适用于检测化学品的致畸性

5 2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GBZ/T 224 职业卫生名词术语

GBZ/T 240.1 化学品毒理学评价程序和试验方法 第1部分:总则

6 3 术语和定义

GBZ/T 240.1界定的术语和定义适用于本文件。

3.1

母体毒性 maternal toxicity

引起亲代雌性妊娠动物直接或间接的健康损害效应

7 4 试验目的

检测妊娠动物接触化学品后引起胎仔畸形的可能性。

8 5 试验概述

试验应设多个剂量组。选择处于胚胎发育器官形成期的妊娠动物进行染毒,并在胎仔出生前将妊娠动物处死,取出子宫检查吸收胎、死胎、活胎及胎仔的骨骼内脏畸形的情况。

9 6 试验方法

9.1 6.1 实验动物

首选健康、刚进入性成熟期、未经交配的雌性大鼠或家兔,按雌雄动物比例2:1或1:1交配。试验前的适应期至少为3d。

为了获得足够的胎仔数,正确地评价受试样品致畸的可能性,对于大鼠,每个剂量组和对照组至少应有15只妊娠动物,家兔至少为12只。

9.2 6.2 剂量设计

试验至少设3个剂量组、1个阴性对照组,必要时可设1个阳性对照组。阳性对照物可选用环磷酰胺阿司匹林维生素A。对照组动物除了不给予受试样品外,其他处理应与剂量组完全相同。试验可以先采用预试验,了解受试样品引起胚胎或胎仔死亡的剂量。在受试样品理化和生物特性允许的条件下,高剂量组剂量应使母体出现明显的毒性反应,如轻微的体重下降,但不能引起超过10%的母体死亡;低剂量应不引起动物任何可观察到的毒性反应;在低剂量和高剂量之间可按几何级数设置中间剂量。如果受试样品的毒性较低,1000 mg/kg体重的剂量对胚胎无明显毒性或致畸作用,则可以采用限量试验,即试验不需要设其他剂量组。若高剂量的预试验对母体确有一定的毒性作用,但对胚胎无不良影响,也可以采用限量试验。

9.3 6.3 试验步骤

9.3.1 6.3.1 染毒途径

通常为经口灌胃,也可以采用其他与人的接触方式相同的给样方式。每天的染毒应在同一时间进行。如果受试样品是通过灌胃染毒的,应按每只母体动物的体重来确定每日的染毒量。

9.3.2 6.3.2 交配及染毒期限

雄性和雌性动物按1:1或1:2的比例合笼交配。每天早晨应对雌性动物进行检查,查看阴道中是否有精子或阴栓。将检查到精子或阴栓的当天计为雌性动物妊娠的第0天。将妊娠动物随机分组后,于胚胎器官的形成期开始染毒(大鼠为孕后6 d~15 d,家兔为孕后6 d~18 d),每天一次。

9.3.3 6.3.3 观察期限及指标

6.3.3.1 每日至少对妊娠动物进行一次仔细的临床观察。发现虚弱或濒死的动物,应进行隔离或人道处死,对死亡的动物应进行尸检。如母体有流产早产症状者也应处死并作大体检查。

6.3.3.2 每日称取妊娠动物体重,每周记录摄食量,并观察其临床症状,包括皮肤、毛、眼睛、黏膜、呼吸系统循环系统神经系统四肢活动行为方式的改变。

6.3.3.3 及时记录任何毒性反应,包括出现的时间、程度和持续的时间。

9.3.4 6.3.4 观察指标

分娩前一天处死妊娠动物(大鼠为妊娠第20天,小鼠为妊娠第18天,家兔为妊娠后第29天),立即进行解剖检查。

9.3.4.1 6.3.4.1 子宫观察

取出子宫,分别称取子宫、胎盘和活胎的重量,记着床数、活胎数、死胎数及吸收胎数。

9.3.4.2 6.3.4.2 外观检查

逐一记录活胎仔的身长和尾长。检查外观有无异常,如头部:无脑脑膨出、露脑、头盖裂、脑积水、小头、颜面裂、小眼、无眼眼球突出、无耳、小耳、耳位低、无颚、小颚下颚、兔唇和下颌裂;躯干部:胸骨裂、胸部裂、脊椎裂、脊椎侧弯、脊椎前弯、脊椎后弯、脐疝尿道下裂、无肛门、短尾、卷尾、无尾腹裂;四肢:多肢、无肢、短肢、半肢、多趾、无趾、并趾、短趾和缺趾。胎鼠畸形检查方法见附录A。

9.3.4.3 6.3.4.3 骨骼检查

将每窝1/2的胎仔放入茜素红液(配制方法见附录B的B.1)中染色,进行骨骼检查。测量囟门大小,矢状缝的宽度,头顶间骨及后头骨缺损情况,然后检查脊柱骨的数目、融合、纵裂、部分裂开、骨化中心数、发育不全、缩窄、脱离形状骨盆的弓数目、骨化中心数、形状异常、融合、裂开、缩窄和脱离;四肢骨的形状和数目;腕骨的骨化中心数;掌骨、趾骨的形状;肋骨的数目、形状、融合、分叉、缺损和发育不全;胸骨的形状、完全缺失、胸骨节融合、裂开、形状异常和发育不良等情况。

9.3.4.4 6.3.4.4 内脏检查

将每窝另一半的胎仔放人Bouin's液(配制方法见附录B的B.2)中,固定两周后作脏器和软组织检查。检查有无异常,如头部:嗅球发育不良、侧脑室扩张、第三脑室扩张、角膜缺损等;胸部:右心位、房中隔缺损、室间隔缺损主动脉弓食道闭锁、气管狭窄、无肺、多肺、肺叶融合、膈疝气管食管瘘和内脏异位等;腹部:肝分叶异常、肾上腺缺失、多囊肾膀胱缺失、睾丸缺失、阴睾、卵巢缺失、卵巢异位、子宫缺失、子宫发育不全、肾积水、肾缺失和输尿管积水等。对于家兔每个胎仔都应解剖进行脏器检查和骨骼检查。

10 7 数据处理与结果评价

10.1 7.1 数据处理

数据可以用统一的表格进行统计,表中应显示每组的实验动物数、平均体重、受孕动物数、黄体数、着床数、吸收胎数、活胎数、死胎数及其百分率、胎仔的情况(体重、胎盘重、体长、尾长)、畸胎的类型(包括外观、骨骼和内脏)、数目及百分率。

数据可采用任何一种适当的统计方法进行处理。应将各剂量组的指标相应地与对照组进行显著性检验。其中,以畸胎率最为重要,主要有以下两种:

公式

注:凡每一活胎出现一种以上畸形时,均作一个畸胎计。

当出现的畸胎是以某一种或某几种畸形为主时,就应按畸形种类单独计算该畸形率。

公式

致畸指数=雌性动物LD50/最小致畸剂量

10.2 7.2 结果评价

7.2.1 评价时应结合所用动物品系的历史性的资料进行,包括自发畸变种类和频率

7.2.2 如果某剂量组的总畸胎率或某单项畸胎率与对照组相比明显增高,且差异有显著性,可表明该剂量有致畸作用。

7.2.3 试验结果应能得出受试样品是否有母体或胚胎毒性、致畸性,最好能得出无致畸剂量和最小致畸剂量。

11 8 评价报告

除GBZ/T 240.1规定的一般项目外,评价报告还应包括以下内容:

a) 给予受试样品的方法和期限;

b) 孕鼠体重增长和妊娠情况;

c) 受孕动物数、黄体数、着床数、吸收胎数、活胎数、死胎数及其百分率;

d) 胎仔的情况(体重、胎盘重、体长、尾长)、畸胎的类型(包括外观、骨骼和内脏)、数目及百分率。

12 9 结果解释

解释致畸试验结果时,应注意种属的差异。试验结果从动物外推到人存在着一定的局限性。

13 附录A(资料性附录)胎鼠畸形检查方法

13.1 A.1 胎鼠外观检查

对每只胎鼠先经肉眼检查,如果肉眼不能确定某种畸形时,将胎鼠放在解剖显微镜下迸一步确定并照相,胎鼠的检查顺序如下。

13.2 A.2 胎鼠的头部检查

有无露脑(无头盖骨),脑膜膨出,头部大小(大头可能脑积水、小头为头部发育不良)。眼睛的有无,眼所在部位,大小(小眼或大眼),突眼或开眼等。两耳、鼻和嘴外表是否正常和对称,上下颌有无唇裂

13.3 A.3 四肢的检查

四肢有无多趾(指)、并趾、少趾、无趾、足内外翻、短肢等畸形。

13.4 A.4 躯干的检查

有无脐疝、腹裂(内脏膨出),脊髓膨出、脊柱裂脊柱侧突等。

13.5 A.5 尾部检查

有无短尾、卷尾、无尾和尾分叉等。

13.6 A.6 标本的制作

将每窝1/2胎鼠放人Bouin's液固定,作为内脏检查,另1/2放入95%酒精中固定作为骨骼检查。

13.7 A.7 骨骼标本的制备

胎鼠放入1% KOH溶液中软化至能很清楚地看见骨骼为止,必要时中间可更换1次KOH溶液。

13.8 A.8 骨骼染色

将骨骼标本放入茜素红应用液中染色16 h,直至全部骨骼染成紫红色为止,中间可更换一次染液。

13.9 A.9 骨骼透明

染好色以后,用自来水冲净标本,倒掉染液,将标本置于50%甘油脱色3 d~5 d。

13.10 A.10 骨骼检查

A.10.1 头骨检查:颅骨是否完整,有无骨化不全,骨缝的宽窄,枕骨的形状。

胎鼠上枕骨骨化程度的分级标准如下:

——0级:上枕骨成片状或哑铃状,两侧骨化点完全融合,融合处宽度大于两侧的1/3。

——Ⅰ级:上枕骨两侧骨化点相连,相连处宽度小于两侧的1/3。

——Ⅱ级:上枕骨两侧骨化点不相连,但可清楚地见到两个较大的骨化点。

——Ⅲ级:上枕骨两侧的骨化点不相连,仅见小骨化点或仅见一侧骨化点。

——Ⅳ级:无上枕骨骨化点。

A.10.2 胸部骨骼:正常胸骨为6块,畸形时可有骨骼错位及骨化不全,注意观察第2胸骨和第5胸骨。小鼠正常肋骨为13对,观察有无多肋、少肋、肋骨分叉、融合、波状肋等畸形。

A.10.3 四肢骨:检查骨化程度、长短粗细、指趾骨的发育状况。

13.11 A.11 胎鼠内脏徒手切片检查

将胎鼠从Bouin's液中取出,自来水冲净。测量每只胎鼠身长及尾长。

13.12 A.12 头部切片

将胎鼠放在蜡板或木板上,第1刀由嘴开始经两耳切开,暴露舌、腭、上唇和下颌,检查舌有无异常,有无腭、唇裂。将头翻过来前背向上,切剩下的切片。第2刀从眼睛前面切下,暴露鼻中隔鼻窦,记录鼻腔是否通。第3刀平眼切下,暴露脑鼻叶,鼻中隔后区的大部分及鼻咽腔、眼组织、视网膜玻璃体、晶状体和角膜,检查这些组织结构有无异常。第4刀从眼后切开,暴露大脑半球和侧脑室,并注意有无畸形和扩张。第5刀横切大脑半球,暴露间脑的第Ⅲ脑室、侧脑室、脉络膜等检查这些部位有无异常。

13.13 A.13 内脏切片检查

沿胸腹壁中线和肋下沿水平线各切一刀,暴露胸腔与腹腔内脏,检查各脏器有无异常。

13.14 A.14 统计

应用适当的统计学软件对数据进行分析处理。各组母鼠平均体重,胎鼠体重、身长、尾长,计量资料以均数±标准差捕获.PNG±s)表示,数据采用F检验进行显著性分析。活胎、死胎、畸形、吸收胎等计数资料用百分率表示,数据采用x2检验进行显著性分析。

——活胎率=活胎数/胎鼠数×100%;

——死胎率=死胎数/胎鼠数×100%;

——吸收胎率=吸收胎数/着床数×100%;

——畸形率=畸形仔鼠数/受检胎鼠数×100%;

——孕鼠体重净增长=解剖前体重-受孕第6天体重-含胎子宫重。

14 附录B(资料性附录)茜素红液和Bouin's液配制方法

14.1 B.1 茜素红液配制方法

冰醋酸   5 mL

纯甘油   10 mL

1%水合氯醛   60 mL

临用时用1% KOH稀释成0.1%的应用液。

14.2 B.2 Bouin's液配制方法

苦味酸饱和液   75 mL

甲醛   25 mL

冰醋酸   5 mL

混合使用。

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开放分类:中华人民共和国国家职业卫生标准化学品毒理学评价程序和试验方法毒理学致畸
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  • 评论总管
    2021/1/23 6:47:50 | #0
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本页最后修订于 2015年8月12日 星期三 12:33:04 (GMT+08:00)
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