质粒

目录

1 拼音

zhì lì

2 英文参考

plasmid[2010年版药典三部]

3 注解

质粒(Plasmid)是一种能自主复制的环状额外染色体DNA元件。它通常携带一定数量的基因,其中有些基因可对不同抗生素产生抗性,该抗性常作为依据,以辨别是否含有此种质粒而识别生物体[1]

许多细菌除了染色体外,还有大量很小的环状DNA分子,这就是质粒(plasmid)。质粒上常有抗生素的抗性基因,例如,四环素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些质粒称为附加体(episome),这类质粒能够整合进细菌的染色体,也能从整合位置上切离下来成为游离于染色体外的DNA分子。

有些质粒能够整合进细菌的染色体,当细菌接合时将随同“雄性”细菌染色体而转移进入“雌性”细菌细胞,所以质粒也是细菌的一种可动遗传因子。但有些质粒不能整合进细菌染色体,因而在细菌接合时也就无法转移到另一个细胞中,这类质粒是不移动的遗传因子,这种质粒上所带的基因也无法转移。上面所说的是指天然状态下的情况,在基因工程的实验条件下,各种质粒都能转染经过处理的感受态细菌细胞(competent cell)而转移进细菌。质粒在宿主细胞中的拷贝数取决于质粒和宿主细胞的遗传组成。由此,质粒可分为两种类型:一种是松弛型质粒,它们可独立于宿主染色体的复制而自行增殖,一个宿主细胞中平均有10~200份拷贝;另一种是严紧型质粒,它们随宿主染色体同步复制,所以每个宿主细胞中只有一份或很少几份拷贝。

质粒是环状双链DNA分子,同线状DNA分子相比,围绕双螺旋主轴连续排列的核苷酸的旋转角度稍有变动,就更容易使DNA分子的构象发生改变,即出现超螺旋的(supercoiled)构象。这是比环状更为致密的一种构象,因此当离心沉降或电泳时,超螺旋构象的DNA分子的沉降速度和电泳速度都快于线性分子和环状分子。以前曾认为超螺旋构象是在实验条件下出现的一种现象,现在在细胞里也发现有超螺旋构象的DNA分子,而且发现超螺旋的程度是受拓扑异构酶(topoiso—merase)和旋转酶(gyrase)控制的,并和DNA调控蛋白与DNA链的接触有关。

细菌质粒是独立于细菌染色体的自主复制的环状双链DNA分子,只有酵母的杀伤质粒(killerplasmid)已知是RNA分子。环形双链DNA分子有三种构型。第一种是共价闭合环状DNA(covalently close circular DNA,ccc DNA),它的两条链都保持完整的环状结构,通常呈超螺旋构型。第二种是开环DNA(open circularDNA,oc DNA),它的双链中的一条保持完整的环状结构,另一条单链上有一到几个切口。第三种是线状DNA,这种质粒的双链断裂呈线状。这三种构型的同一种质粒在琼脂糖凝胶中电泳时,出现不同的迁移速率,走得最快的是超螺旋构型,其次是线性构型,最慢的是开环构型。

细菌细胞中质粒的数目有很大差异。多的每个细胞里可以达几十乃至几百份拷贝,少的则只有一到几份拷贝。高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed plasmid),独立于细菌细胞而自主复制;低拷贝数的质粒一般是严紧型质粒(stringent plasmid),它们的复制随细菌染色体的复制同步进行。

实验证明,同一个大肠杆菌细胞里一般不会同时有两种不同的质粒,这是质粒不相容性(plasmid incompatibility)。在细菌细胞增殖过程中,其中必有一种会被逐渐排斥。这样的两种质粒被称为不相容质粒。带有外源DNA的质粒载体转化到大肠杆菌细胞以后,会产生一系列生理效应,影响自身的稳定性。特别是表达型的质粒载体,外源基因的表达会使宿主细胞的生长速率下降,以及质粒载体的丢失等。这种质粒的不稳定性包括分离不稳定性(segregational instability)和结构不稳定性(structural instability),前者指细菌细胞分裂过程中,有一个子细胞没有得到质粒拷贝,最终使质粒丢失的细胞成为优势群体;后者主要是指由于转座和重组,使质粒DNA重排或缺失。

影响质粒载体稳定性的主要因素有:

①宿主细胞代谢负荷增加 质粒载体可使宿主细胞的代谢负荷加重,有的能延长其世代时间15%左右。质粒载体的大小同宿主细胞生长延缓的程度呈正相关,这可能是由于质粒载体相对分子质量大,则对宿主细胞DNA复制的负荷更大的缘故。同样,宿主细胞如维持质粒载体中外源基因的表达活性,势必在DNA转录和蛋白质翻译上承受更多的额外负担。

②细胞中所含质粒载体的拷贝数 细胞中所含质粒载体的拷贝数各不相同,也是影响质粒丢失的一个因素。拷贝数差别不大时,质粒载体相对地稳定;拷贝数相差悬殊,则很容易造成一些细胞丢失质粒,并逐渐发展为优势群体。

③宿主细胞DNA重组系统的作用 质粒载体之间发生重组会形成二聚体、三聚体,甚至四聚体等所谓的质粒寡聚体(plasmid oligomer),其稳定性比单体差。此外,质粒载体中外源DNA片段的大小同质粒寡聚化的程度也密切相关。

4 参考资料

  1. ^ [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版.三部[M].北京:中国医药科技出版社,2010.

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