细胞色素C活力测定法

目录

1 拼音

xì bāo sè sù C huó lì cè dìng fǎ

2 注解

2.1 试剂

(1) 磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)

取磷酸氢二钠71.64g,加水使溶解成1000ml,作为甲液。另取磷酸二氢钠27.60g,加水使溶解成1000ml,作为乙液。取甲液81ml与乙液19ml,混匀,调节pH值至7.3。

(2) 磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)

取磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)500ml,加水稀释成1000ml,调节pH值至7.3。

(3) 磷酸盐缓冲液(0.02mol/L)

取磷酸盐缓冲液 (0.2mol/L) 100ml,加水稀释成1000ml,调节pH值至7.3。

(4) 琥珀酸盐溶液

取琥珀酸与氢氧化钾各4.72g,加水使溶解成100ml,调节pH值至7.3。

(5) 氰化钾溶液 取氰化钾0.65g,加水使溶解成100ml后,用稀硫酸调节pH值至7.3。

(6) 去细胞色素C的心悬浮液

取新鲜猪(牛)心2只,除去脂肪与结缔组织,切成条,用绞肉机绞碎,置纱布兜中,用常水冲洗约2小时(经常搅动,挤出血色素),挤干,用水洗数次,挤干,置磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)中浸泡约1小时,挤干,重复浸泡1次,用水洗数次,挤干,置组织捣碎机内,加磷酸盐缓冲液(0.02mol/L)适量恰使猪(牛)心浸没,捣成匀浆,离心10分钟(普通离心机),取上层混悬液,加冰块少量,迅速用稀醋酸调节pH值至约5.5,立即离心15分钟,取沉淀,加等体积的磷酸盐缓冲液(0.1mol/L),用玻璃匀浆器磨匀后,贮存于冰箱中;临用时取1.0ml,加磷酸盐缓冲液(0.1mol/L)稀释成10ml.

2.2 供试品溶液的制备

取供试品,加水制成每1ml中含细胞色素C约3mg的溶液。

2.3 测定法

取磷酸盐缓冲液(0.2mol/L)5ml、 琥珀酸盐溶液1.0ml与供试品溶液0.5ml(如系还原型制剂,应加入0.01mol/L铁氰化钾溶液0.05ml),置25ml具塞比色管中,加去细胞色素C的心悬浮液0.5ml与氰化钾溶液1.0ml,加水稀释至10ml,摇匀,以同样的试剂作空白,照分光光度法,在550nm的波长处附近,间隔0.5nm找出最大吸收波长,并测定吸收度,直至吸收度不再增大为止,作为酶还原吸收度;然后各加连二亚硫酸钠约5mg,摇匀,放置约10分钟,在上述同一波长处测定吸收度,直至吸收度不再增大为止,作为化学还原吸收度;按下式计算。

酶还原吸收度

细胞色素C活力=───────────×100%

化学还原吸收度

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