呼吸道合胞病毒抗体

目录

1 拼音

hū xī dào hé bāo bìng dú kàng tǐ

2 英文参考

Respiratory syncytial virus antibody

3 概述

呼吸道合胞病毒(respiratory sycytial virus,RSV)是引起婴幼儿下呼吸道疾病的最常见的病毒。呼吸道合胞病毒是单股负链RNA病毒,呈球形,有双层脂质囊膜,囊膜上有刺突,即G和F蛋白。G对宿主细胞有吸附作用,F为融合蛋白。

4 别名

anti-RSV

5 呼吸道合胞病毒抗体的医学检查

5.1 检查名称

呼吸道合胞病毒抗体

5.2 分类

血清学检查 > 病毒的血清学检查

5.3 呼吸道合胞病毒抗体的测定原理

酶联免疫吸附试验(ELISA):以感染及未感染合胞病毒的细胞培养分别制备合胞病毒抗原及细胞对照抗原,分别包被于聚苯乙烯板上制成固相抗原,加入待检血清后,血清中如含有抗合胞病毒抗体,则可结合于包被的合胞病毒抗体(而对照抗原则不能结合),形成抗原-抗体复合物,再加入酶标记的抗人IgG(即抗抗体),则形成抗原-抗体-酶标记抗抗体复合物,当加入相应酶的底物,在酶的催化作用下使原来无色的底物水解,氧化,还原呈现颜色反应。通过观察颜色反应的强弱来了解抗体的存在及其滴度。

5.4 试剂

(1)聚苯乙烯微孔板。

(2)酶标检测仪。

(3)呼吸道合胞病毒抗原:用呼吸道合胞病毒Long株感染Vero细胞,当病变呈++++时收获,经100g/L去氧胆胆酸胆酸钠处理,低速离心,收集上清即为ELISA抗原,用同批正常细胞同法制备正常细胞抗原。亦可待细胞病变达+++时,倾去维持液,用灭菌去离子水洗2次,加入为原培养液半量的去离子水,冻化3次,10000r/min离心,30min,取上清56℃灭活30min,正常细胞抗原亦用同法制备。

(4)患者双份血清:急性期血清于发病3天内采取,恢复期血清于病后3周采取分离血清。

(5)辣根过氧化酶标记羊抗人IgG。

(6)包被液:即pH9.6碳酸缓冲液,其配制方法为称无水碳酸钠(Na2CO3)159mg,碳酸氢钠(NaH-CO3)293mg,溶解至总量为100ml的蒸馏水中。

(7)洗涤液:即0.5% Tween-20生理盐水(NS-T),其配法为100ml生理盐水中加入0.5ml Tween20。

(8)稀释液:即2%牛血清NS-T,其配制方法为100ml洗涤液中加入2ml小牛血清。用于稀释待测样品及酶结合物。

(9)底物液:先配基质液,其配方是称磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)18.4g,柠檬酸(C6H8O7H2O)5.1g,加蒸馏水至1000ml,配后分装保存于4℃。再配底物液,其配法为10ml基质液中加4mg邻苯二胺,加5ml双氧水(H2O2)。底物液应现用现配。

(10)终止液:即2mol/L,硫酸(H2SO4)。

5.5 操作方法

(1)用包被液将呼吸道合胞病毒抗原及正常细胞抗原作适当稀释,包被于聚苯乙烯板,每孔100μl,4℃过夜。

(2)将双份血清用稀释液分别作系列倍比稀释(急性期血清1∶100,恢复期血清1∶400稀释开始),每孔加入100μl,置37℃ 2h。双份血清应同时在同一板上测定。

(3)用稀释液将酶标记抗人IgG作适当稀释,每孔加入100μl,置37℃ 1h。

(以上每种试剂在作用完毕后甩去,用洗涤液洗3次后再加新的试剂)。

(4)加底物液,每孔100μl,37℃ 10~20min,并注意避光。

(5)加终止液以终止反应,每孔50μl,观察结果。

每批试验设固定的阳性血清、阴性血清及抗原对照等。

5.6 正常值

阴性。

5.7 化验结果临床意义

阳性:呼吸道病毒感染(合胞病毒性肺炎、合胞病毒性毛细支气管炎)。

5.8 附注

(1)酶联免疫吸附试验是一种敏感性较高的试验方法,影响因素较多。为了保证试验结果的稳定和重复性,对抗原、抗体以及酶结合物的浓度需进行预试验,选出合适的工作浓度,以便控制试验条件。

(2)注意设各种对照(包括抗原、抗体以及酶结合物对照等,以便判定结果时比较)。

(3)双份血清必须在同一酶标板上同时检测。

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