FPA

目录

1 概述

纤维蛋白肽A(fibrinopepide-A,FPA)是在凝血酶作用下,纤维蛋白原α(A)链的精-16和甘-17之间的肽链裂解,释放出由1~16个氨基酸组成的纤维蛋白肽A。是反映体内凝血活性及纤维蛋白最终形成血栓的可靠指标。

2 别名

FPA

3 纤维蛋白肽A的医学检查

3.1 检查名称

纤维蛋白肽A

3.2 分类

临床血液检查 > 出血和凝血检查

3.3 取材

血液

3.4 纤维蛋白肽A的测定原理

纯化的人FPA包被于固相,液相中的待测FPA竞争抑制抗人FPA与固相FPA的结合,再以酶标记的二抗检测结合于固相的抗人FPA的量,从标准曲线计算标本中FPA的含量。

3.5 试剂

(1)纯人纤维蛋白肽A(FPA)。

(2)兔抗人FPA血清。

(3)辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG。

(4)皂土(bentonite)、邻苯二胺(OPD)、肝素、BSA等。

(5)抑肽酶(aprotinin)。

(6)包被缓冲液:0.05mol/L Na2CO3/NaHCO3缓冲液(pH9.5):配法是1.59g Na2CO3,2.93gNAHCO3与0.2gNaN3,溶于1000ml蒸馏水中,4℃保存1周内使用。

(7)洗板液:(PBSVTween20,pH7.4)8.0g NaCl,0.2g KH2PO4,2.98g Na2HPO4·12H2O,0.5mlTween20,0.2g NaN3溶于1000ml蒸馏水中。

(8)标本稀释缓冲液:在上述洗板液中加3mg/ml的明胶,临用前新鲜配制。

(9)皂土吸附缓冲液(pH18.95):584mg NaCl与605mg Tris共溶于90ml蒸馏水中。以浓HCl调PH8.95,加入BSA 100mg。

(10)底物缓冲液(pH5.0)由0.05mol/L柠檬酸与0.1mol/L Na2HPO4配成。临用前称取10mg邻苯二胺溶于25ml此液中,加入30%H2O210μl,混匀。

(11)40孔聚苯乙烯反应板。

(12)透析型酶标仪。

3.6 操作方法

(1)血浆标本的采集:用塑料注射器顺利取静脉血4.5ml(开始的2ml弃去),加入盛有0.5ml抗凝剂(肝素钠500u和aprotinin 5000u)的试管中,立即混匀。3000r/min离心20min,分离血浆,吸上层血浆至另一试管,立即作下一步处理或置-20℃保存。

(2)血浆标本的皂土吸附处理:目的是彻底除去纤维蛋白原。40mg皂土加入45ml的聚丙烯塑料离心管中,加入0.5ml吸附缓冲液,充分混匀,加入1ml血浆,在回旋混合器上震荡混匀,再缓慢震摇10min。5000r/min离心15min,吸取上清液至另一试管,再如上法以皂土吸附处理1次。然后吸取上清液1ml加到一预先盛有20g/LTween20溶液50μl的试管中,混匀。最终标本已稀释20倍。

(3)FPA包被:取1μg/ml的FPA溶于包被缓冲液中,加入聚苯乙烯反应板,200μl/孔,加盖,37℃过夜。次日弃孔内液。以洗涤液洗板5次,每次3min,甩干,备用。

(4)FPA标准品:以标本稀释缓冲液配成;25,12.5,6.25,3.12,1.56,0.78ng/ml等6个不同浓度。分别吸取0.9ml于一系列小试管中,再在各管中加入0.1ml的工作浓度的兔抗人FPA。经皂土吸附处理的待测血浆标本作原倍、1∶2、1∶4倍3个浓度如上操作。上述各管置37℃反应3h。

(4)从温育后的上述各管中分别吸取200μl加入已包被的FPA的反应板各孔中,置板于37℃保温2h,洗板5次,甩干。

(6)各孔加HRP-羊抗兔IgG(以标本稀释液稀释至工作浓度)200μl/孔,置板于37℃温育2h,洗板5次,甩干。

(7)各孔加新鲜配制的底物液200μl,37℃避光精确反应3min,各孔立即滴加3mol/L H2SO450μl以终止反应。在酶标上测定各孔的A值(492nm)。

3.7 正常值

1.2±0.8μg/L。RIA法<2μg>

3.8 化验结果临床意义

FPA是纤维蛋白原在凝血酶的作用下的降解产物,因此,它是血管内凝血酶生成的标志。通常将FPA>2μg/L作为血凝亢进的指标。FPA定量主要用于DIC的早期诊断和DIC抗凝治疗的监测试验。在DIC患者使用肝素开始后,如FPA下降,表明治疗有效。也是血栓性疾病、心肌梗塞、冠心病、白血病、肾脏病的诊断指标之一。因为FPA自肾排泄,故肾功能不良时也增多。FPA在体内的半衰期短,在抗凝疗法时其变动出现的也早,所以FPA测定可用于DIC抗凝疗法的监护检查。

血浆FPA含量增高反映凝血系统激活和凝血酶的生成。因此见于高凝状态和血栓性疾病,原发性和继发性纤溶的鉴别,抗凝治疗过程中的监测指标。

3.9 附注

(1)采血要顺利不应>45s,且开头2ml弃去,注射器要硅化或用塑料注射器。

(2)采血后立即注入盛有抗凝剂的试管中,并在冰水中迅速混合,若需保存则以经皂土吸附处理后-20℃较妥。

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