DNA克隆化

生物学 DNA

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1 注解

将特定的DNA片断结合于自我增殖的载体上,再纳入寄主细胞使DNA片断增殖,这一过程称为DNA纯系化。如果以特定的基因为对象时,则称为基因纯系化(基因克隆化gene cloning)。大肠菌K12株及其质粒噬菌体的EK系是其代表性的系统。在从各种生物所具有的巨大数目的基因中选出特定的基因DNA,一般多用下述方法

把从某种生物中提取的全部DNA,通过限制性内切酶等使之成为片断,对此片断不分级而直接进行克隆化的实验称为霰弹枪式实验。即此时先将各DNA片断无差别地进行克隆化,然后将所要求的片断选取出来,除根据其基因表现型进行选择和测定外,还可使用集落杂交法(或噬菌斑杂交法)。与此相反,作为目标的基因从特异出现的组织中将信使RNA(m-RNR)分提,通过反转录酶合成与mRNA互补的DNA(cDNA),将此DNA与载体结合而进行克隆化,这是最常用的方法。在这种情况下,可直接获得所需要遗传信息的DNA克隆,但在cDNA由于基因内区部分缺失,而与原来基因结构上不同。不过cDNA的这种性质,根据实验目的多具有利之点,同时可利用被克隆化的cDNA从基因组DNA中找出原来的基因而再进行克隆化也是可能的。此外,对巳知氨基酸序列的蛋白质,认为在遗传密码表中有其相反对应的DNA碱基序列,据此也可被用于人工合成的DNA克隆化方法中。

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