1 拼音
zǒng RNA tí qǔ
2 注解
Trizol Reagent处理法
3 原理
分离纯净、完整的RNA分子对于分子克隆的实验是很重要的，而且是进行基因表达分析的基础。在总RNA中，75-85%为rRNA（主要是28S-26S/23S和18S/16S rRNA），其余的由分子量大小和核苷酸序列各不相同的mRNA和小分子RNA如tRNA、snRNA及snoRNA等组成。
为了获得高质量的RNA，必须要控制RNA酶的活性，也就是要避免RNA酶的污染。RNA酶很稳定，而且反应不需要辅助因子，因而在RNA的制备过程中只要存在少量的RNA酶就会导致实验的失败。为避免RNA酶的污染，实验中所用到的全部溶液、玻璃器皿、塑料制品等都需要特别处理。
RNA酶的抑制剂主要有异硫氰酸胍、焦碳酸二乙酯（DEPC，使用浓度为0.05%-0.1%）、钒氧核糖核苷复合物（10mmol/L）、蛋白质抑制剂RNasin。实验中采用DEPC对所用到的溶液、玻璃器皿和塑料制品等进行处理。
4 仪器与试剂
仪器
烧杯（1000，500，100，50mL若干）；量筒（1000，500，250，50，20mL若干）；玻璃棒、药勺、试剂瓶、三角瓶、吸头（1000，200，20微升）、吸头盒、离心管（1.5mL，0.2mL）、冷冻高速离心机、紫外分光光度计等。
试剂
灭菌的DEPC水、氯仿：异戊醇（24：1）、异丙醇、75%乙醇、Trizol Reagent、
5 实验步骤
准备工作：用DEPC（1ml/L）水溶液处理枪头、离心管等24hr，然后高温灭菌2次，每次20min；研钵、剪刀等其他用具在180℃下烘3hr。
1、组织匀浆，在液氮中将组织研碎后，加入500μl Trizol后再充分研磨，用枪头将粉末转移到离心管中，加入500μl Trizol后用注射器抽打均匀，室温下放置5min；
2、加200μl氯仿，剧烈振荡15sec，颠倒几次，室温下放置15min；
3、4℃下12,000rpm离心15min；
4、转移上清液至一新的离心管（DEPC处理）中，加500μl异丙醇，振荡混匀，室温下放置5～10min；
5、4℃下12,000rpm离心8min；
6、弃上清液，加1ml 75%乙醇，漩涡混匀（或加无水乙醇以加快挥发）；
7、4℃下7,500rpm离心5min；
8、弃乙醇，空气风干3～5min，用DEPC处理过的水（先在55～60℃水浴10～15min）溶解,根据沉淀的量，一般加入30～50μl；
9、RNA质量的检测，取1μlRNA样品稀释100倍后测定RNA浓度及OD260/280；
10、RNA保存于-80℃冰箱。