1 拼音
zhòng zǔ rén yí dǎo sù
2 英文参考
rh-insulin[湘雅医学专业词典]
3 重组人胰岛素药典标准
3.1 品名
3.1.1 中文名
重组人胰岛素
3.1.2 汉语拼音
Chongzu Ren Yidaosu
3.1.3 英文名
Recombinant Human Insulin
3.2 结构式
3.3 分子式与分子量
C257H383N65O77S= 5807.69
3.4 来源(名称)、含量(效价)
本品为重组技术生产的由51个氨基酸残基组成的蛋白质。按干燥品计算,含重组人胰岛素(包括A21脱氨人胰岛素)应为95.0%~105.0%。
每1单位重组人胰岛素相当于0.0347mg。
3.5 性状
本品为白色或类白色的结晶性粉末。
本品在水、乙醇和乙醚中几乎不溶,在稀盐酸和稀氢氧化钠溶液中易溶。
3.6 鉴别
(1)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
(2)取本品适量,用0.1%三氟醋酸溶液制成每1ml中含10mg的溶液,取20μl,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液(pH 7.3)20μl、0.1% V8酶溶液20μl与水140μl,混匀,置37℃水浴中2小时后,加磷酸3μl,作为供试品溶液;另取重组人胰岛素对照品适量,同法制备,作为对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件,以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(pH 2.3)-乙腈(90:10)为流动相A,乙腈-水(50:50)为流动相B,按下表进行梯度洗脱。取对照品溶液和供试品溶液各25μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致。
时间(分) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 90 | 10 |
5 | 80 | 20 |
45 | 40 | 60 |
50 | 40 | 60 |
3.7 检查
3.7.1 有关物质
取本品适量,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中含3.5mg的溶液,作为供试品溶液。照含量测定项下的色谱条件,以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(pH 2.3)-乙腈(82:18)为流动相A,乙腈-水(50:50)为流动相B,按下表进行梯度洗脱。调节流动相比例使重组人胰岛素主峰的保留时间约为25分钟,系统适用性试验应符合含量测定项下的规定。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,按峰面积归一化法计算,含A21脱氨人胰岛素不得大于1.5%,其他杂质峰面积之和不得大于2.0%。
时间(分) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0 | 78 | 22 |
36 | 78 | 22 |
61 | 33 | 67 |
67 | 33 | 67 |
3.7.2 高分子蛋白质
取本品适量,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中约含4mg的溶液,作为供试品溶液。照分子排阻色谱法(2010年版药典二部附录Ⅴ H)试验。以亲水改性硅胶为填充剂(5~10μm);冰醋酸-乙腈-0.1%精氨酸溶液(15:20:65)为流动相;流速为每分钟0.5ml;检测波长为276nm。取重组人胰岛素单体-二聚体对照品,用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含4mg的溶液;取100μl注入液相色谱仪,重组人胰岛素单体峰与二聚体峰的分离度应符合要求。取供试品溶液100μl,注入液相色谱仪,记录色谱图,扣除保留时间大于人胰岛素主峰的其他峰面积,按峰面积归一化法计算,保留时间小于人胰岛素主峰的所有峰面积之和不得大于1.0%。
3.7.3 干燥失重
取本品0.2g,在105℃干燥至恒重,减失重量不得过10.0%(2010年版药典二部附录Ⅷ L)。
3.7.4 炽灼残渣
取本品约0.2g,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅷ N),遗留残渣不得过2.0%。
3.7.5 锌
精密称取本品适量,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液。另精密量取锌单元素标准溶液(每1ml中含Zn 1000μg)适量,用0.01mol/L盐酸溶液分别定量稀释成每1ml中含锌0.20μg、0.40μg、0.60μg、0.80μg、1.00μg与1.20μg的锌标准溶液。照原子吸收分光光度法(2010年版药典二部附录Ⅳ D第一法),在213.9nm的波长处测定吸光度,按干燥品计,含锌(Zn)量不得大于1.0%。
(根据《中华人民共和国药典》(2010年版 第一增补本)删除原【检查】无菌项[1])。
3.7.6 微生物限度
取本品0.2g,依法检查(2010年版药典二部附录XI J ),每lg中含细菌数不得过300cfu。[1]
3.7.7 细菌内毒素
取本品,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅺ E),每1mg重组人胰岛素中含内毒素的量应小于10EU。
3.7.8 菌体蛋白残留量
取本品适量,依法检查(2010年版药典三部附录Ⅸ C),每1mg重组人胰岛素中菌体蛋白残留量不得过10ng。外源性DNA残留量 取本品适量,依法检查(2010年版药典三部附录Ⅸ B),每1剂量重组人胰岛素中宿主DNA不得过10ng。
3.7.9 生物活性
取本品适量,照胰岛素生物测定法(2010年版药典二部附录Ⅻ G),每组的实验动物数可减半,实验采用随机设计,照生物检定统计法(2010年版药典二部附录Ⅺ V)中量反应平行线测定随机设计法计算效价,每1mg的效价不得少于15单位。
3.8 含量测定
照高效液相色谱法(2010年版药典二部附录Ⅴ D)测定。
3.8.1 色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(5~10μm);0.2mol/L硫酸盐缓冲液(取无水硫酸钠28.4g,加水溶解后,加磷酸2.7ml、水800ml,用乙醇胺调节pH值至2.3,加水至1000ml)-乙腈(74:26)为流动相;流速为每分钟1ml;柱温为40℃;检测波长为214nm。取系统适用性试验溶液(取重组人胰岛素对照品,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中含1mg的溶液,室温放置至少24小时)20μl,注入液相色谱仪,人胰岛素峰与A21脱氨人胰岛素峰(与人胰岛素峰的相对保留时间约为1.3)的分离度不小于1.8,拖尾因子不大于1.8。
3.8.2 测定法
取本品适量,精密称定,加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.35mg(约10单位)的溶液(临用新配)。精密量取20μl注入液相色谱仪,记录色谱图;另取重组人胰岛素对照品适量,同法测定。按外标法以人胰岛素峰与A21脱氨人胰岛素峰面积之和计算,即得。
3.9 类别
降血糖药。
3.10 贮藏
遮光,密闭,在-15℃以下保存。
3.11 制剂
(1)重组人胰岛素注射液 (2)精蛋白重组人胰岛素注射液
3.12 版本
《中华人民共和国药典》2010年版
4 参考资料
- ^ [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版:第一增补本[M].北京:中国医药科技出版社,2010.