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中性粒细胞趋化试验

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1 拼音

zhōng xìng lì xì bāo qū huà shì yàn

2 检查名称

中性粒细胞趋化试验

3 分类

免疫学检查/细胞免疫测定

4 概述

中性粒细胞病原体的吞噬大致包括趋化、调理、吞噬和杀菌几个步骤,是一个非常复杂的过程。中性粒细胞在趋化因子的作用下,定向移动走向细菌周围,经过调理素作用的细菌易黏附在中性粒细胞上,使中性粒细胞膜内陷,通过胞饮作用将细菌吞入形成吞噬小包,与细胞内的溶酶体融合成噬溶酶体,将细菌杀伤。但如果机体的趋化因子减少或吞噬细胞本身对正常趋化因子无反应时,即可导致吞噬细胞吞噬减弱,使机体容易感染

5 原理

中性粒细胞趋化试验的原理是在趋化因子招引下,中性粒细胞向趋化因子作定向移动。根据其在琼脂糖膜板下移动的距离,即可判定其趋化功能

6 试剂

(1)琼脂糖平皿的制备:称取琼脂糖100mg,加蒸馏水9ml,加热灭菌融化,待冷至47℃左右,迅速加入等容积两倍浓缩的Tc199培养液(内含青霉素链霉素)1ml和灭活的小牛血清1ml,混匀后分别倾注于2个5~6cm的平皿内,放置水平处待凝。

(2)白细胞悬液的制备:取受检者肝素凝血,用37℃自然沉降法收集细胞,经洗涤后,用Tc199培养液配成(2.5~5)×107/ml细胞悬液。

7 操作方法

(1)平皿打孔加样:将配制好的上述琼脂平皿,用2.4mm内径的打孔器打孔,孔距为2~4mm。每一平皿可同时检测6份标本。每一行三孔,测定一份标本。中孔加白细胞悬液5μl,外孔加大肠杆菌24h液体培养物的过滤液5μl,内孔加Tc199培养液5μl作为对照。

(2)保温:将上述平皿加样后,加入湿盒内37℃,温育2~3h。

(3)固定染色:每一平皿加甲醇3ml,处理30min。继加47%中性福尔马林溶液3ml,固定30min。剥除琼脂糖层,黏附固定在平皿底层的细胞用瑞氏染色,水洗干燥

8 正常值

新生儿移动指数为2.0~2.5左右;成人为3.0~3.5左右。实验条件不同,差别很大,故正常对照很重要。

9 化验结果临床意义

人体内有许多天然趋化因子,当人体内趋化因子减少或吞噬细胞本身对正常趋化因子缺乏反应时,可导致吞噬细胞趋化运动减弱,使机体容易感染。中性粒细胞趋化性试验常可作为临床上某些疾病患者中性粒细胞运动功能的检测指标。中性粒细胞趋化性降低,主要提示血中缺乏补体C3,常见于反复感染、齿龈炎、中耳炎及外周血中中性粒细胞减少症等。中性粒细胞趋化功能缺陷还见于che-diak-Higashi综合征、迟钝性白细胞综合征、肌动蛋白功能不全症、膜糖蛋白缺陷症、高IgE综合征等。

10 附注

(1)配制琼脂糖平皿也可用Eagle培养液、RP-MI-1640培养液,但必须添加血清AB型正常人血清或小牛血清均可),最终浓度为10%~20%。如无血清,则移行细胞数减少且分散,趋化移动减弱。

(2)受检中性粒细胞不能用葡聚糖沉降法收集,因其能抑制中性粒细胞移行的能力

(3)加入每孔的中性粒细胞数必须准确定量,其数量多少与趋化移动密切相关。细胞数过多,趋化指数降低,细胞数过少,趋化指数虽不降低,但因移行细胞数减少且分散,常难以正确测量细胞移行的距离。

(4)孔距以2.4mm较为理想,孔距过大,可使趋化因子在琼脂糖中扩散过大而稀释。

(5)培养时间2~3h,细胞移行即达高峰。在5% CO2环境中培养,能增进中性粒细胞趋化移动的能力。

11 相关疾病

中性粒细胞减少症

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开放分类:化验及医学检查免疫学检查细胞免疫测定
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  • 评论总管
    2020/11/27 11:44:43 | #0
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本页最后修订于 2013年2月21日 星期四 10:54:48 (GMT+08:00)
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