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胰岛素原

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1 拼音

yí dǎo sù yuán

2 英文参考

proinsulin

3 概述

人胰岛素原(proinsulin)是胰岛素的前体物质,由胰岛素和C肽组成,具有双重免疫活性,既可与胰岛素抗抗体结合,又可与C肽抗体结合。胰岛素原由胰岛β细胞合成和分泌,主要在肾脏分解代谢。生理情况下,只有极少量的胰岛素原释放入血,在病理情况下,胰岛β细胞释放胰岛素原增多,血中胰岛素原水平升高。

4 胰岛素原的医学检查

4.1 检查名称

胰岛素原

4.2 分类

激素类测定 > 胰腺内分泌功能检查

4.3 胰岛素原的测定原理

将一定量的标记胰岛素、抗胰岛素抗抗抗体和各种已知量的胰岛素标准品血浆样品相混合,使之发生特异性结合。然后葡聚糖炭粉分离游离胰岛素和结合的胰岛素,测定葡聚糖炭粉的放射性。葡聚糖炭粉吸附的放射性随标本中胰岛素含量增加而增加。

4.4 试剂

(1)标记缓冲液(0.5mol/L磷酸钾缓冲液,pH值7.5)。

(2)测定缓冲液(0.05mol/L磷酸钾缓冲液,pH值7.5,含0.1%牛血白蛋白和0.1%叠氮钠)。

(3)柱饱和缓冲液(0.05mol/L磷酸钾缓冲液,pH值7.5,含2%牛血清白蛋白和0.1%叠氮钠)。

(4)0.25%氯胺T:氯胺T 25mg溶于标记缓冲液10ml。

(5)0.25%偏焦亚硫酸钠:偏焦亚硫酸钠25mg溶于0.05mol/L磷酸缓冲液10ml(pH值7.5)中。

(6)2%碘化钾溶液:碘化钾200mg溶于水10ml。

(7)100μg/L胰岛素溶液:以胰岛素1mg溶于0.01mol/L盐酸0.5ml中,使胰岛素溶解,然后以标记缓冲液补至10ml。每管20μl分装后,贮存于-20℃。

(8)胰岛素标准液:以100mIU/L倍比稀释,采用6个标准,即0,1.5625,3.125,6.25,12.5,25mIU/L。

(9)抗胰岛素血清:以上述胰岛素150μg悬浮手水0.5ml,然后加等量的福氏完全佐剂乳化,多点注射于豚鼠背部皮下,然后每隔1月加强免疫,共2~3次,每次75μg。每次注射后8~12天内可检测血清中抗体滴度。

(10)葡聚糖覆盖的炭粉悬浮液:活性炭5g悬浮于测定缓冲液100ml,葡聚糖(T-70,或者T-250)0.5g溶于测定缓冲液100ml,然后将两种溶液混和。

(11)Na 125I 北京原子能研究所供应。

(12)葡聚糖凝胶G-50柱(10×0.9cm):预先以柱饱和缓冲液浸洗过夜,然后以测定缓冲液平衡

4.5 操作方法

(1)胰岛素碘标记物制备和纯化:

①取Na 125I 3.7×107Bq置于含胰岛素2μg(20μl)的反应管内。

②加氯胺T溶液10μl。

③立即盖紧,轻敲小管使试剂快速混和。

④12~15s后,加偏焦亚硫酸钠溶液25μl(62.5μg)。

⑤把管内容物加至Sephadex G-50柱上,用测定缓冲液洗涤,每管0.5ml收集45管,再用γ计数器计数。第一峰为125I标记的活性胰岛素,第二峰是没有结合的放射性碘。

(2)标记激素的免疫反应性估价:取第一峰收集物,以测定缓冲液稀释至5000cpm/0.1ml,取0.1ml该标记物于小试管中,加入过量抗血清(0.1ml)及0.1ml测定缓冲液,在4℃温育24h,然后加1ml葡聚糖活性炭悬浮液,在适当搅拌后,试管在4℃静止15min,然后再离心15min,丢弃上清液,计数沉淀,沉淀计数应少于加入量的5%,如计数增加,指示125I-胰岛素破坏。

(3)抗血清滴定:将抗血清系列稀释,从1∶320000至1∶10 000测定时,在小试管中加0.1ml测定缓冲液,0.1ml稀释的抗血清,0.1ml稀释的标记胰岛素。在4℃温育20h,然后加1ml葡聚糖活性炭,适当搅拌后,在4℃温育15min后,再离心15min。丢弃上清液,测量沉淀物放射性计数,计数以加入量(F/T%)的35%~60%为合适的抗体稀释度。

(4)胰岛素测定:标准管与测定管做双份,具体操作如下表(表1):

4.6 正常值

各实验室依具体情况确定。

放射免疫法:<0.2μg/L。

4.7 化验结果临床意义

(1)糖尿病患者血浆胰岛胰岛素胰岛素原水平明显升高。1型糖尿病由于胰岛胰岛素合成和分泌极度下降,刚合成的胰岛素原在未转变为胰岛素的情况下即释放入血,造成血浆胰岛胰岛素胰岛素原升高。研究证明,部分表现为高胰岛素血症的2型糖尿病患者其实为高胰岛素原血症,是因为胰岛β细胞功能障碍,胰岛素原分泌增多所致。

(2)胰岛β细胞瘤、家族性高胰岛素血症患者血浆胰岛胰岛素胰岛素原水平明显升高。

(3)慢性肾功能不全时,胰岛素原的分解代谢降低,可致血浆胰岛胰岛素胰岛素原升高;甲亢时亦可出现血浆胰岛胰岛素胰岛素原水平升高。

4.8 附注

(1)在操作过程中加量务必精确。

(2)碘化钾、氯胺T及偏焦亚硫酸钠溶液在使用前几分钟配制。其他溶液可于-20℃贮存。

(3)加入葡聚糖活性炭后,在4℃静置15min,不要延长时间或升高温度,否则会导致沉淀计数增加。

(4)如市上有胰岛素放免试剂盒出售,可省略抗胰岛素抗血清制备,胰岛素标记等步骤,操作方法须严格按照试剂盒所附说明书进行。

4.9 相关疾病

糖尿病、1型糖尿病、2型糖尿病

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开放分类:化验及医学检查胰腺内分泌功能检查激素类测定
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  • 评论总管
    2019/8/23 6:52:21 | #0
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本页最后修订于 2013年2月22日 星期五 17:31:58 (GMT+08:00)
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