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血清脂蛋白电泳

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1 拼音

xuè qīng zhī dàn bái hé xuè qīng zhī dàn bái diàn yǒng

2 英文参考

Serum lipoprotein electrophoresis

3 概述

蛋白电泳主要用于高脂蛋白血症分型,也有助于了解冠心病的血脂状态,更好地指导临床诊疗工作。

4 英文名

Serum lipoprotein electrophoresis

5 血清脂蛋白和血清脂蛋白电泳医学检查

5.1 分类

血液生化检查、脂类测定

5.2 原理

脂蛋白是在碱性pH条件下,以琼脂凝胶醋酸纤维条带作为载体,从阳性方向来进行分离的。形成的蛋白区带可以用脂肪染料如苏丹黑或者油红染色,它们只用于脂蛋白染色。在琼脂中可能会有附加的聚阴离子和二价阳离子沉淀。脂蛋白沉淀带用光密度计可立即定量分析。脂蛋白区带也可以被切开后重溶解,对各区带进行胆固醇浓度的直接酶法检测。另外,有报道在用薄层琼脂糖凝胶上进行电泳分离后,可直接检测各脂蛋白组分中的胆固醇含量的方法

5.3 试剂

(1)巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH 8.6±0.1、μ=0.06):以巴比妥2.21g、巴比妥钠12.36g于500ml蒸馏水中,加热溶解,待冷却至室温后加蒸馏水至1000ml。

(2)染色液:

①丽春红S染色液:丽春红9.04g、三氯醋酸6g,用蒸馏水溶解,并稀释至100ml。

氨基黑10B染色液:氨基黑10B 0.1g,溶于无水乙醇20ml中,加冰醋酸5ml,甘油0.5ml使溶解。然后将磺柳酸2.5g,溶于少量蒸馏水中,加入前液,再以蒸馏水补足至100ml。

(3)漂洗液:

①30ml/L醋酸溶液:用于丽春红染色的漂洗。

甲醇45m,冰醋酸5ml和蒸馏水50ml混匀。用于氨基黑10B染色的漂洗。

(4)透明液:柠檬酸(C6H5Na3O7·2H2O)21g和N-甲基-吡咯烷酮150g,用蒸馏水溶解,并稀释到500ml。亦可选用氢萘或液体石蜡透明。

(5)0.4mol/L氢氧化钠溶液或0.1mol/L氢氧化钠溶液。

5.4 操作方法

(1)将缓冲液加入电泳槽内,调节两侧槽内的缓冲液,使其处于同一平面。

(2)醋酸纤维素薄膜的准备:取醋酸纤维素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(负极侧)1.5cm处用铅笔轻划一横线,做点样标记。编号,并标明正、负极后,将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中浸泡,待充分浸透后(一般为20min)取出,夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。

(3)将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取无溶血血清3~5μl于横线处沿横线加样,样品应与薄膜的边缘保持一定的距离,以免电泳图谱中的蛋白区带变形,待血清渗入薄膜后,反转薄膜,使光面朝上,平直地贴于电泳槽支架上,用双层滤纸或四层纱布将薄膜的两端与缓冲液连通,稍待片刻。

(4)接通电源,注意醋酸纤维素薄膜上的正、负极,切勿接错。电压90~150V,电流0.4~0.6mA/cm(不同的电泳仪所需电压,电流可能不同,应灵活掌握),夏季通电45min,冬季通电时间稍长,约为60min,电泳区带展开约25~35mm即可。

(5)染色:通电完毕,取下薄膜直接浸于丽春红S染液或氨基黑10B染色液中,染色5~10min(以白蛋白区带染透为止),然后在漂洗液中漂去剩余染料,直至背景无色为止。

(6)定量:

比色法:将漂洗的薄膜吸干,剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中,在白蛋白管中加0.4mol/L氢氧化钠6ml(计算时吸光度乘以2),其余各管加3ml,振摇数次,置37℃水箱20min使其色泽浸出。氨基黑10B染色用分光光度计在620nm处读取各管吸光度,然后计算出各管的含量(同时做空白管对照)。

丽春红S染色时浸出液用0.1mol/L氢氧化钠,加入量同上法。10min后,白蛋白管内加400ml/L醋酸0.6ml(计算吸光度时乘以2),其余各管加0.3ml,以中和部分氢氧化钠,使色泽加深,必要时离心,取上清液用分光光度计在520nm处读取各管的吸光度(同时作空白对照),然后计算各自的含量。

②光密度计扫描法:A.透明:吸去薄膜上的漂洗液(为防止透明液被稀释影响透明结果),将薄膜浸入透明液中2~3min,然后取出,以滚动的方式平贴于洁净无划痕的载物玻璃片上(切勿产生气泡),将此玻片竖立片刻,除去多余透明液后,置于恒温90~100℃的烘箱内,烘烤10~15min,取出冷却至室温,用此法透明的各蛋白区带鲜明,薄膜平整,可供直接扫描和永久保存(用氢萘或液体石蜡透明,应将漂洗过的薄膜烘干后进行透明,此法透明的薄膜不能存久,且易发生皱折)。②扫描定量:将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内,进行扫描分析

附注:

样本:可用新鲜、未冷冻的血清分离脂蛋白。血浆不适合用来做脂蛋白电泳,因为会出现一条纤维蛋白原区带。

带有清晰的分离组分的脂蛋白图形是进行准确解释的先决条件。如果能够很好地满足这些条件,在脂蛋白电泳和参考方法(超速离心法)之间就可以相当一致。各组分的精密度不同,用变异系数表示,估计一般都在5%以下。

偶尔α-脂蛋白会消失和(或)出现一条舌状的窄的α-脂蛋白区带。这是因为游离脂肪酸在。α-脂蛋白上积聚,造成了这些微粒带有电荷相等。由于α-区带密度增大,从而导致结果偏高。和沉淀技术相比,定量脂蛋白电泳的耗资较高。

5.5 正常值

醋酸纤维薄膜电泳法

乳糜微粒:     0g/L              (0mg/dl)

极低密度脂蛋白:0.06~0.3g/L     (6~30mg/dl)

低密度脂蛋白:  <7g/L           (<700mg/dl)

高密度脂蛋白:  男:0.52±0.11g/L(43±18mg/dl)

女:0.55±0.13g/L(47±2mg/dl)

5.6 临床意义

(1)原发性高脂血症的分型与原因见表1。

(2)继发性高脂蛋白血症低脂蛋白血症的原因见表2。

5.7 相关疾病

高脂血症     继发性高脂蛋白血症

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  • 评论总管
    2021/1/20 2:59:36 | #0
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本页最后修订于 2012年3月7日 星期三 10:40:02 (GMT+08:00)
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