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血清三酰甘油

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1 概述

目前TG测定方法有酶法与化学法,酶法又有一步终点法与两步终点法,两步终点法其主要优点是能够去除游离甘油干扰。近年来,人们对高甘油三脂血症在动脉硬化中意义的认识正在加深。测定甘油三脂对了解血脂代谢、肝功能肝脏是合成甘油三脂器官之一)以及动脉粥样硬化引起的疾病的诊断都有帮助。

2 血清三酰甘油的别名

血清甘油三脂

3 血清三酰甘油医学检查

3.1 检查名称

血清三酰甘油

3.2 分类

血液生化检查 > 脂类测定

3.3 取材

血液

3.4 血清三酰甘油的测定原理

用高效的微生物脂蛋白脂肪酶(LPL)使血清中TG水解成甘油与脂肪酸,将生成的甘油用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷ATP磷酸化,以磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化3-磷酸甘油(G-3-P),然后过氧化物酶(POD)、4-氨基比林(4-AAP)与4-氯酚(三者合称PAP)显色,测定所生成的H2O2,故本法简称GPO-PAP法,反应如下:

目前国内外多数TG商品试剂根据上述原理配制,用一步终点法测定。此法的主要缺点是测定结果包括血清中的游离甘油(FG)。为了去除FG的干扰,有二种方法:①外空白法,即同时用不含LPL的酶试剂测定FG作为空白值,此法的缺点是需要作双份测定,试剂成本加倍,混浊的高TG标本会产生负干扰,优点是可以同时得出FG数据。②内空白法(两步法、双试剂法)即试剂分两步加入的预孵育法,将前述GPO-PAP试剂分成两部分,其中LPL和4-AAP组成试剂Ⅱ,其余部分组成试剂Ⅰ。血清加试剂Ⅰ,37℃孵育后,因无LPL存在,TG不被水解,FG在GK和GPO作用下反应生成H2O2,但因反应体系中不含4-AAP,不能完成显色反应,由此除去FG的干扰,再加入试剂Ⅱ,测出TG水解生成的甘油。此法不增加费用,手工操作多加一步试剂,并能输入绝大部分型号的自动生化分析仪。操作更简单,且精密度准确度均较好。

3.5 试剂

(1)一步法:单一试剂组成如下(卫生部老年医学研究所配方):

Tris-HCl缓冲液,pH7.6 150mmol/L

LPL(假单胞菌属) ≥3000U/L

GK(念珠菌属) ≥250U/L

ATP ≥0.5mmol/L

GPO(足球菌属) ≥3000U/L

POD(辣根) ≥1000U/L

胆酸钠 3.5mmol/L

MgSO4·7H2O 17.5mmol/L

4-AAP 1mmol/L

4-氯酚 3.5mmol/L

Tritonx-100 0.1g/L

除缓冲液外,其他为混合的干粉,也有配成液体的。

(2)两步法:双试剂组成如下(宁波市临床检验中心配方):

①Tris-HCl缓冲液,150mmol/L,pH7.6,每升中含MgSO4 10mmol,胆酸钠3.5mmol,ATP 1mmol,4氯酚2.5mmol,TritonX-100 0.1g;

②酶液Ⅰ:上述Tris缓冲液50ml中溶入GK500U,GPO 3000U,POD 1000U;

③酶液Ⅱ:上述Tris缓冲液50ml中溶入LPL 3000U,4-AAP 1mmol;

④手工法应用试剂Ⅰ:酶液Ⅰ 5ml与Tris缓冲液45ml混合;

⑤手工法应用试剂Ⅱ:酶液Ⅱ5ml与Tris缓冲液45ml混合。

用于自动分析时,试剂Ⅰ、Ⅱ的用量随仪器调整,但缓冲液与酶液Ⅰ和酶液Ⅱ的最终比例9∶0.5∶0.5不变。

(3)参考物(标准液):2mmol/L三油酸酯水溶液。精确称取三油酸酯(纯品)177mg(可直接称入100ml容量瓶中),加Triton X-100 5ml,摇动使成乳浊状,置56℃水浴约10min,澄清后加蒸馏水90ml,冷却至室温,再加蒸馏水至刻度,混匀。以2ml安瓿分装,4℃保存至少稳定2年,切勿冰冻。

目前不少一步法试剂盒以甘油(纯品)水溶液为参考物(甘油20.8mg/dl,相当于TG2.26mmol/L即200mg/dl),其缺点是未参加反应全过程,不适用于两步法。一步法中只要LPL能完全水解TG,用甘油或三油酸酯为标准结果一致。

3.6 操作方法

取血前两天内不要进食含大量脂肪的食品,早晨空腹(12h)取血。标本存放中会有少量TG水解,释出甘油,一般主张在4℃存放不宜超过3天。

(1)一步法:测定管、标准管与空白管中分别加入血清、标准液及蒸馏水各10μl,酶试剂各1.00ml,37℃,10min后用光度计测吸光度(A),波长500nm,颜色至少可稳定1h。

血清TG(mmol/L)=(测定管A/标准管A)×标准液TG浓度(mmol/L)

(2)两步法:测定管、标准管与空白管中分别加入血清、标准液及蒸馏水各10μl,各加应用试剂Ⅰ 0.5ml,混匀,37℃水浴5min,然后再各加应用试剂Ⅱ 0.5ml,混匀后37℃水浴10min,空白管校零,在波长500nm测吸光度(A),计算同一步法。

3.7 正常值

正常人TG水平高低受生活条件的影响,我国人低于欧美人,成年以后随年龄上升。TG水平的个体内与个体间差异都比TC大,人群调查的数据比较分散,呈明显正偏态分布营养良好的中、青年平均值以去除FG计约0.90~1.00mmol/L(80~90mg/dl),老年前期老年人平均超过1.13mmol/L(100mg/dl),95百分位数在中青年约为1.69mmol/L(150mg/dl),老年约为2.26mmol/L(200mg/dl)。

美国国家胆固醇教育计划对空腹TG水平划分界限的修订意见(1993)是:

TG正常:<2.3mmol/L(<200mg/dl);

TG增高的比缘:2.3~4.5mmol/L(200~400mg/dl);

高TG血症:>4.5mmol/L(>400mg/dl);

胰腺炎高危:>11.3mmol/L(>1000mg/dl)。

3.8 化验结果临床意义

高TG血症也有原发的与继发的两类,其中包括家族性高TG血症与家族性混合型高脂(蛋白)血症等。继发的见于糖尿病糖原累积病甲状腺功能不足、肾病综合征妊娠、口服避孕药、酗酒等,但不易分辨原发或继发。高血压脑血管病冠心病、糖尿病、肥胖高脂蛋白血症等往往有家族性集聚现象,其间可能有因果关系,但也可能仅仅是伴发现象;例如糖尿病患者胰岛素糖代谢异常可继发TG(或同时有TC)升高,但也可能同时有糖尿病与高TG两种遗传因素。冠心病患者TG偏高的比一般人群中多见,但这种患者LDL-C偏高与HDL-C偏低也多见。一般认为单独有高TG不是冠心病的独立危险因素,只有伴以高TC、高LDL-C、低HDL-C等情况时才有病理意义。

通常将高脂蛋白血症分为Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ等6型,除Ⅱa型以外都有高TG:①Ⅰ型是极为罕见的高CM血症,原因有二,一为家族性LPL缺乏症,一为遗传性的apoCⅡ缺乏症。②最常见的是Ⅳ型,其次是Ⅱb型,后者同时有TC与TG增高,即混合型高脂蛋白血症;Ⅳ型只有TG增高,反映VLDL增高,但是VLDL很高时也会有TC轻度升高,所以Ⅳ型与Ⅱb型有时难于区分,主要根据LDL-C水平作出判断。家族性高TG血症属于Ⅳ型。③Ⅲ型又称为异常β脂蛋白血症,TC与TG都高,其比例近于1∶1(以mg/dl计),但无乳糜微粒血症。诊断还有赖于:脂蛋白电泳示宽β带;血清在密度1.006g/ml下超速离心后,其顶部(VLDL)作电泳分析证明有漂浮的β脂蛋白或电泳迁移在β位的VLDL存在,化学分析VLDL-C/血清TG>0.3或VLDL-C/VLDL-TG>0.35;apoE分型多为E2/E2纯合子。④Ⅴ型为乳糜微粒和VLDL都增多,TG有高达10g/L以上的,这种情况可以发生在原有的家族性高TG血症的基础上,继发因素有糖尿病、妊娠、肾病综合征、巨球蛋白血症等,易引发胰腺炎。

3.9 附注

(1)上述两步酶法为中华医学会检验学会的推荐方法(见中华医学检验杂志,1995,18:249)。现阶段允许一步酶法与两步酶法并存,要求逐步过渡到统一采用两步法。在未统一方法前,实验室报告TG测定结果时应注明“去FG值”或“未去FG值”,这将有助于临床医生对结果的正确判断。

(2)正常人血清TG浓度平均约0.11mmol/L(10mg/dl),对于变动幅度较大的TG来说,由此引起的误差是可以忽略的,但有此标本中TG明显增高,以致影响对TG水平的判断,例如糖尿病、情绪应激、含甘油的药物静脉营养、取血标本时甘油污染等。此外,标本贮存与处理不当会使其中TG水解而产生TG。

(3)内源性TG很高的标本虽然不很多,为了避免可发生的差错,国外文献中的建议可供参考:临床实验室应备有可以去TG空白的试剂,供必要时采用;体检及门诊患者可以不做TG空白,但糖尿病或其他特殊门诊例外;TG>2.3mmol/L者最好作TG空白校正,对有些可疑情况,如高TG而血清不混浊者应排除高TG的可能。

3.10 相关疾病

糖尿病、肾病综合征、高脂蛋白血症、血浆脂蛋白

相关文献

开放分类:血液生化检查脂类测定化验及医学检查
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  • 评论总管
    2019/10/15 20:22:51 | #0
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本页最后修订于 2013年2月24日 星期日 11:03:08 (GMT+08:00)
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