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血清乳酸脱氢酶

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1 拼音

xuè qīng rǔ suān tuō qīng méi

2 英文参考

Lactic Dehydrogenase

3 概述

乳酸脱氢酶(LDH或LD)是糖无氧酵解及糖异生的重要酶系之一,可催化丙酮酸与L-乳酸之间的还原与氧化反应,也可催化相关的α-酮酸。LDH广泛存在于人体组织中,以心、肾、骨骼肌含量最高,肝、脾、胰和肺组织次之,各组织的细胞浆内该酶活力血清的500~1000倍,红细胞酶活性为血清的100倍。LDH测定方法主要有比色法和连续监测法。

4 血清乳酸脱氢酶医学检查

4.1 分类

血液生化检查 > 酶类测定

4.2 取材

血液

4.3 原理

(1)比色法:LDH以NAD作氢的受体,催化乳酸脱氢,生成丙酮酸,后者与2,4-二硝基苯作用,生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液呈红色,根据颜色深浅求出酶活性。

(2)连续监测法:LDH可催化L-乳酸生成丙酮酸,同时NAD还原成NADH,在340nm处吸光度的增高速率与酶活力成正比。

4.4 试剂

(1)比色法:

①底物缓冲液(含0.3mol/L乳酸锂,pH8.8):取乳酸锂2.88g,二乙醇胺2.1g,加蒸馏水约80ml溶解,以1mol/L HCl调pH8.8,加水至100ml。

②11.3mmol/L辅酶Ⅰ(NAD)溶液:称氧化型辅酶Ⅰ 15mg,溶于20ml蒸馏水中,冰箱保存可用2周。

③1mmol/L 2,4-二硝基苯肼(DNPH)溶液:称取DNPH 200mg,加10mol/L HCl 100ml,溶后加水至1000ml,置棕色瓶内室温保存。

④0.4mol/L NaOH溶液。

⑤1mmol/L丙酮酸标准液:称取丙酮酸钠(AR级)11.0mg,以底物缓冲液溶解并稀释至100ml,临用前配制。

(2)连续监测法:

①55mmol/L乳酸锂Tris缓冲液:称取乳酸锂5.28g,Tris 6.68g,溶于800ml蒸馏水中,在37℃水浴箱中用1mol/L HCl调pH至8.9(约需46ml),加水至1000ml,冰箱保存。

②12mmol/L NAD溶液:称取NAD 79.6mg,溶于10ml蒸馏水中,冰箱保存可用2周。

基质应用液(含NAD 6mmol/L):根据当天用量将上述NAD溶液和乳酸钾Tris缓冲液等量混合即可。商品试剂盒按其说明溶解,恢复至室温25℃使用。

4.5 操作方法

(1)比色法:按表1操作。

混匀,室温放置5min后,在440nm波长,比色杯光径1.0cm,蒸馏水调零点,读取各管吸光度,以AU-AC之差值查标准曲线,求出LDH活力单位。

附注:

①乳酸钾、乳酸钠也可作为LDH底物,但因其为水溶液,含量不够准确,且保存不当易产生酮酸类物质,抑制酶促反应。而乳酸锂为固体,稳定,易于称量。

②除二乙醇胺缓冲液外,也可用Tris或焦磷酸缓冲液,避免了原金氏法中甘氨酸缓冲液对LDH的抑制作用,提高了阳性检出率。

③比色应在5~15min内完成,否则吸光度降低。

④结果>2500U时,可用生理盐水稀释标本后再测,其结果乘以稀释倍数。

(2)连续监测法:各实验室可根据本室生化自动仪型号及说明书操作。主要参数为340nm波长,37℃,吸样量500μl,连续监测时间60s,标本与试剂体积之比为1∶50。

附注:

①标本勿溶血,当溶血达Hb 0.8g/L时,LDH活性可升高58%。

②标本于室温(25℃)保存,2天内酶活性稳定,冰箱保存酶活性降低,-20℃过夜LDH3、LDH4则全部失活。

③用血清或肝素凝血浆测定结果满意,草酸盐可抑制LDH活性。

④复溶后溶液变浊或初始吸光度>0.5应弃去。

⑤利用正逆双向反应均可测定乳酸脱氢酶活性,但因反应温度、底物和缓冲液浓度不同,其参考区间也有差异。以乳酸和NAD为底物,在340nm监测吸光度增高速率为正向反应,以LD-L表示;以丙酮酸和NADH为底物,监测340nm吸光度下降速率为逆向反应,以LD-P表示。正逆反应两法相比,LD-L法的主要优点是:A.正向反应底物液的稳定性比逆向反应的稳定性大,前者冰箱可保存6个月以上,而后者仅几天;B.速率反应的线性范围(吸光度对监测时间t作图)较宽;C.重复性比LD-P好。由于逆向反应速度比正向反应速度快,其参考值约为LD-L的2倍。

4.6 正常值

(1)比色法:150~450U/L。

(2)连续监测法:男80~280U/L

女100~230U/L

4.7 临床意义

LDH测定常用诊断心肌梗死肝病和某些恶性肿瘤

(1)心肌梗死:发病10~12h升高,24~48h达高峰,8~9天后恢复正常。与CK相比,虽然酶活性出现较迟,阳性率较低,但持续时间长,且活性增高的程度与心肌梗死的病情密切相关,梗死范围越大,其酶活性越高。若LDH增高后恢复迟缓,或在病程中再次增高,提示梗死范围扩大,预后不良。

(2)肝脏疾病:急性肝炎或慢性活动性肝炎LDH常显著或中度升高。其敏感度略低于ALT肝癌时LDH活性明显升高,尤其是转移性肝癌增高更显著。可达1000U/L。

(3)血液病白血病、巨幼红细胞贫血恶性淋巴瘤等LDH活性升高。

(4)其他:营养不良横纹损伤胰腺炎、肺梗塞等LDH活性也升高。

4.8 相关疾病

恶性淋巴瘤     肝癌     转移性肝癌

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参与讨论
  • apple
    2015/3/14 20:07:28 | #1
    LDH催化的逆向反应速度非常慢,基本看不到NADH吸光值的增加。为什么?
    其实这个酶的名称,名不副实。应该改名为丙酮酸还原酶。
    欢迎有一定酶学基础和生化基础的人员与本人交流LDH。
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本页最后修订于 2013年2月23日 星期六 17:40:29 (GMT+08:00)
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