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血清补体溶解免疫复合物活性

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1 拼音

xuè qīng bǔ tǐ róng jiě miǎn yì fù hé wù huó xìng

2 概述

补体的CRA中,旁路激活途径(AP)起主导作用传统激活途径仅为促进作用。补体CRA的机制是,在补体与IC相互作用时,AP的C3转化酶大量裂解C3,形成的大量C3b嵌入抗原抗体的格子状结构中并牢固与抗体结合,使部分抗原抗体的结合键断裂,较大的IC凝聚物变为较小的凝聚物,从而溶解于液相中。

3 血清补体溶解免疫复合物活性的医学检查

3.1 检查名称

血清补体溶解免疫复合物活性

3.2 分类

免疫学检查 > 细胞免疫测定

3.3 取材

血液

3.4 血清补体溶解免疫复合物活性的测定原理

(1)酶-抗酶法:于HRP-抗HRP复合物中加待测新鲜血清(补体)孵育后,可使HRP抗HRP裂解而溶于液相中,离心后未裂解的HRP-抗HRP沉淀于管底,因此,取上法加酶底物反应而测定其溶解活性。

(2)放射免疫法:待测血清(补体)加于125I-BSA-抗BSA复合物中,孵育后离心去上清,测沉淀未被溶解的125I-BSA-抗BSA复合物,求出溶解率。

3.5 试剂

(1)酶-抗酶法:

①HRP-抗HRP复合物:HRP加适量羊或兔抗HRP(IgG组分),37℃水浴1h后转入4℃过夜,离心获取沉淀,用PBS洗净后,加压通过注射器针头使变成细微颗粒,用0.03mol/L pH 7.5PB配成1μl/ml。

②底物溶液:2.0g/L5-氨基水杨酸0.4ml,含最终浓度为0.016%的H2O2

(2)放射免疫法:

①兔抗BSA血清的制备及其IgG组分的提取用纯化的牛血白蛋白(BSA)按常规方法免疫家兔,用QAE-Sephadex A50柱提取兔抗BSA血清的IgG组分,浓缩,分装,置-20℃保存

125I标记BSA:用氯胺T法标记。标记的BSA约为8×105cpm/μg蛋白,分装,置-20℃保存。

125I BSA-抗BSA复合物的制备:以一定量的125I和BSA和不同量的兔抗BSA IgG组分互相混合,分别制备抗原过量等价点、抗体过量的复合物,置37℃ 60min,4℃过夜,1800r/min离心20min,沉淀用pH7.2 0.015mol/L的PBS洗1遍,再悬浮于一定体积的PBS中。等价点形成的IC蛋白含量约为0.26mg/ml。

3.6 操作方法

(1)酶-抗酶法:

①取HRP-抗HRP复合物0.2ml,加待测血清0.1ml,置尖底离心管,于37℃水浴1h,时时摇动混匀。

②加入PBS 1ml,3000r/min,离心15min。

③取上清0.5ml加底物溶液0.4ml,37℃ 1h呈色。加1mol/L NaOH 0.1ml终止反应,再加入PBS 3ml,测450nm吸光度。

④用PBS 0.1ml代替待测血清作为对照管调零。

(2)放射免疫法:

①试验组:

A.用含Ca2Mg2明胶巴比妥缓冲液1∶3稀释待测血清45μ1,125I BSA-抗BSA复合物悬液5μl 37℃ 15min加冷PBS(pH7.2 0.15mol/L)1ml。

B.1800r/min离心20min,弃上清,用γ-闪烁计数仪测沉淀cpm。

②对照组:自然溶解,正常人混合血清56℃灭活30min取45μl。

正常溶解:正常人混合新鲜血清,取45μl。对照组所加其他试剂同实验组。

3.7 正常值

(1)酶-抗酶法:正常人CRA(±SD)为0.38±0.12,正常参考范围可以为±2SD即0.14~0.62。

(2)放射免疫法:成人溶解率正常值为66.0±7.4%。

3.8 化验结果临床意义

自身免疫病系统性红斑狼疮类风湿性关节炎、慢性活动性肝炎、肾小球肾炎等,补体裂解复合物的能力低下。补体系统正常可防止病理性IC的出现或使IC激活补体引起的炎症损伤减轻。而补体的先天或后天缺陷及补体系统的激活受阻可能是病理性IC出现的重要原因。

3.9 附注

酶-抗酶法:

(1)补体并非对所有抗原抗体复合物都溶解,只能溶解可溶性抗原(多糖、蛋白、半抗原等)形成的IC。

(2)其他注意事项同酶免疫技术节。

3.10 相关疾病

系统性红斑狼疮、红斑狼疮、类风湿性关节炎

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开放分类:化验及医学检查免疫学检查细胞免疫测定
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  • 评论总管
    2019/8/20 3:03:39 | #0
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本页最后修订于 2013年2月24日 星期日 11:24:04 (GMT+08:00)
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