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血清补体C3

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1 拼音

xuè qīng bǔ tǐ C3

2 英文参考

Serum C3

3 概述

C3主要是由巨噬细胞单核细胞淋巴组织骨髓腹膜和肝脏等合成的一种β球蛋白。C3在C3裂解酶的作用下进一步裂解,参与所有补体的激活。

4 血清补体C3的医学检查

4.1 检查名称

血清补体C3

4.2 分类

免疫学检查 > 血清补体测定

4.3 取材

血液

4.4 血清补体C3的测定原理

(1)单向免疫扩散法:将含有抗补体抗体琼脂铺在玻璃板上,然后打孔,加抗原(补体)。在合适的温度、湿度环境中,经过一定时间扩散,抗原与混匀在琼脂中的抗体在比例合适处可形成清晰的沉淀环。沉淀环直径大小与抗原的浓度在一定范围内成正比。用标准抗原制成标准曲线,可查出被测抗原的含量。

(2)火箭免疫电泳法:同单向火箭免疫电泳

4.5 试剂

(1)单向免疫扩散法:

①0.1mol/L pH8.6巴比妥缓冲生理盐水:巴比妥3.68g,巴比妥钠,20.6g,加蒸馏水至1000ml。临用时与生理盐水等量混合,调pH8.6,按1/2000加入NaN3防腐

②15.0g/L琼脂:称取优质琼脂粉15g,加入蒸馏水500ml水浴煮沸,使琼脂溶解。然后再加入预先温热的0.1mol/L pH8.6巴比妥缓冲生理盐水500ml,混匀后分装小瓶,4℃冰箱保存备用。

(2)火箭免疫电泳法

①pH8.6,0.075mol/L巴比妥缓冲液

②巴比妥-Tris-甘氨酸缓冲液:

A.巴比妥钠6.5g,巴比妥1.035g溶于500ml蒸馏水中。

B.甘氨酸28.1g,Tris22.6g,溶于500ml蒸馏水中。

临用前取A、B液等量混合后加7倍体积混合即成。

③8.0g/L琼脂糖:用巴比妥-Tris-甘氨酸缓冲液配制。含40.0g/L聚乙二醇

④0.01mol/L戊二醛溶液:取25%戊二醛0.4ml加蒸馏水100ml。

4.6 操作方法

(1)单向免疫扩散法:

①稀释抗C3血清及制备含抗C3血清的琼脂板:先按要求的稀释度计算出稀释液的用量,其中的半量采用缓冲液。抗C3血清用缓冲液稀释后放56℃水浴预温。然后再加等量的、已预温的15.0g/L琼脂,使抗血清的最终稀释度达到要求。按单向免疫扩散法常规浇制含抗C3血清的琼脂板,冷却凝固后打孔(孔径3mm),孔距1.5cm以上。

②标准曲线绘制:将冷冻干燥的C3参考血清,按规定加入准确量的蒸馏水,充分混匀后,再用0.1g/L硫柳汞生理盐水稀释至500μg/ml,然后按表1作一系列稀释。

一般用1∶25,1∶50,1∶75,1∶100四个稀释度抗C3血清制板后,用微量注射器在孔中分别加入上述不同浓度的C3参考血清(每孔中加10μl),经37℃48h保温后,测得沉淀环直径。以沉淀环直径为纵坐标,相应的C3含量的对数为横坐标,初步绘制标准曲线。一般以沉淀环直径在4~8mm所绘制的标准曲线较佳。

③正式试验:先将受检血清用0.1g/L硫柳汞生理盐水稀释5倍,按序加入琼脂板相应孔中(每块板应同时作5个以上不同浓度的C3参考血清作对照)将琼脂板放湿盒内,置37℃48h后测量结果。所得C3参考血清沉淀环直径与原先绘制的标准曲线上相应值相比,最低浓度C3参考血清的沉淀环不应比原先大0.1mm,最高浓度不大于0.3mm,其他3个浓度不大于0.2mm,否则应重新测定。

(2)火箭免疫电泳法:

①取融化的琼脂糖15.6ml,待冷至56℃时加入1∶10稀释的C3抗血清0.4ml,混匀,立即浇板(13cm×8cm)。

②在琼脂糖胶板距边缘2cm处打一排孔,孔径3mm,孔距2mm。

③取血清0.01ml,加0.01mol/L戊二醛液0.39ml混匀。将参考标准物用0.01mol/L戊二醛液稀释成1∶25,1∶40,1∶50,1∶100,1∶160,用4管或6管作标准曲线均可。醛化30min即用微量注射器依次加样,每孔加10μl。

④电泳用2mA/cm,电泳4.5h。

⑤取出琼脂糖胶板放入自来水中浸泡1h左右,再用自来水冲洗一下,放上数层滤纸稍加压力吸干水份。放温箱中,片刻即干。用5.0g/L考马斯亮蓝染液染10~15min,再用20%醋酸溶液洗几次,自来水冲一下,置温箱干后测量峰高。

⑥量取参考标准物各浓度的沉淀峰,绘制标准曲线,再按每个血清标本的峰高,查标准曲线并计算结果。

4.7 正常值

(1)单向免疫扩散法:0.80~1.20g/L。

(2)火箭免疫电泳法:正常人血清87份(男56人、女31人),±SD=1.2219±0.234g/L,范围0.9879~1.4559g/L。

4.8 化验结果临床意义

补体动态变化在临床上越来越受到重视。抗原-抗体复合物引起的胃炎病人血清总补体和C3均明显下降。大多数全身性红斑狼疮患者血清补体的降低和病情恶化有关。活动性全身性红斑狼疮患者血清中C1、C4、C2和C3降低,病情缓解时血清补体水平恢复正常。传染病及组织损伤急性炎症时,C2、C3、C4均增加,总补体活性正常或升高。但晚期则降低。肿瘤患者补体量升高,特别是肝癌,C3升高最为明显,具有诊断意义。也有报道胰腺癌晚期与隐性淋巴细胞白血病患者C3降低。肝脏疾病患者C3多为降低,肾移植病人C3的水平不稳定,C3在排异反应开始时升高,然后下降到正常以下。

4.9 附注

(1)单向免疫扩散法:

①浇琼脂板时注意避免产生气泡。

②稀释血清、抗血清所使用的吸量管必须固定。稀释参考血清和患者血清皆用统一校正过的吸管,否则要用同一根吸管。其他器材也最好统一。

③所用琼脂浓度一定要严格控制,分装后防止干燥,不要反复溶解。溶解时不要煮沸时间过长,以防水份蒸发。56℃温度要严格,太热会破坏血清,太冷易凝固。混合要迅速、充分。

④加好血清后放的位置一定要保持水平,以防扩散圈变形

⑤受检者血清须新鲜。如条件不许可,可将血清冰冻保存或稀释后保存,数天之内影响不大,时间久后易使C3值增高。

(2)火箭免疫电泳法:

①试验前首先要找出合适的抗血清浓度,使沉淀峰高度适中,峰形清晰。做法是用参考标准物稀释几个浓度做实验,使峰高确定在一定范围(2~5cm)。以满意的峰高峰形将抗血清浓度确定下来。在此基础上,再用参考标准物稀释各种浓度作为抗原进行测定,以选择出最适血清标本稀释度,即选出其测定结果基本上与参考标准物含量一致的稀释度,作为血清标本的最适稀释度。

②测定补体蛋白时,血清分离后应立即使用。

③抗原用戊二醛醛化,在C3电泳中可促进负离子的泳动。

PEG抑制免疫复合物解离,促进免疫复合物进一步聚合成更大的凝聚物而被沉淀,有助于提高试验的灵敏度

⑤本法灵敏度为5.65μg/ml,CV为1%。

⑥其他同单向火箭免疫电泳。

4.10 相关疾病

红斑狼疮、胰腺癌

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开放分类:化验及医学检查免疫学检查血清补体测定
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  • 评论总管
    2019/2/17 8:16:52 | #0
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本页最后修订于 2013年2月24日 星期日 11:37:21 (GMT+08:00)
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