1 拼音
xuè qīng bái xì bāo jiè sù 3
2 英文参考
Serum interleukin-3
Serum IL-3
3 概述
白细胞介素3（IL-3），为多克隆刺激因子，调节造血功能，由丝裂原或抗原刺激激活的T细胞及一些细胞株产生，其主要功能为调节多能干细胞的生长及分化，使之产生各系骨髓细胞。
4 血清白细胞介素3的医学检查
4.1 检查名称
血清白细胞介素3
4.2 分类
免疫学检查 > 细胞免疫测定
4.3 取材
血液
4.4 血清白细胞介素3的测定原理
以IL-3特异的单克隆抗体包被酶标板，而后予以封闭，由试剂盒提供（96孔可移动酶标孔）。每孔加入样品，如果其中含有IL-3则可与已包被于板上的抗体结合。洗去样品中未结合的蛋白后，每孔加入酶标IL-3多克隆抗体，则可与最初孵育中所结合的IL-3相作用。而后洗去未结合的酶标抗体，每孔加入底物液，显色。颜色深浅与第一步所结合的IL-3的量成正比。
测定样品的同时，可同时作不同浓度标准IL-3的系列孔，而后作IL-3浓度对光密度值的标准曲线，由样品孔的光密度值在标准曲线上可找到未知样品中相应的IL-3浓度。
4.5 试剂
（1）IL-3酶标：板包被有鼠抗人IL-3单克隆抗体，并已封闭的96孔聚苯乙烯酶标板（12条，8孔/条）。
（2）辣根过氧化物酶（HRP）标记的IL-3多克隆抗体。
（3）IL-3标准品 经透析的重组IL-3（10ng），保存于蛋白保存缓冲液中。
（4）检测稀释液RD1 6ml蛋白保存缓冲液，用于样品为血清或血浆的检测。
（5）校正稀释液RD5 21ml蛋白保存缓冲液。
（6）校正稀释液RD6 21m1动物血清保存缓冲液。用于样品为血清或血浆检测。
（7）洗液：25倍浓度的母液21ml。
（8）显色剂A：12.5ml稳定的过氧化化氢。
（9）显色剂B：12.5ml稳定的色原（四甲基联苯胺盐）。
（10）终止液：2mol/L的硫酸6ml。
11.酶标板盖。
4.6 操作方法
（1）样品的采集：
①组织培养上清离心，去除颗粒性物质，贮存于－20℃。避免反复冻融。
②血清：用血清分离管（SST），离心获得。分装血清，贮存于－20℃。避免反复冻融。
③血浆：收集血浆，以EDTA作为抗凝剂。离心去除颗粒，贮存于－20℃。避免反复冻融。
（2）试剂的准备：
①洗液：将母液稀释25倍，得500ml应用洗液。贮存于2～8℃，可保存30天。注意稀释前须将母液中的沉淀溶解。
②底物液：显色剂A和B等量混合，15min内应用。应用时，每孔加入200μl该混合液。
③标准IL-3：标准IL-3的稀释程度及跨度的选择十分重要，需要能够反映待测样品中IL-3的含量。如果可能，最好用与待测样品相同的稀释度；如果不能，则需用稀释液。校正稀释液RD5可用于许多方面，包括大部分组织培养液中IL-3的测定。校正释液RD6可用于待测血清或血浆样品。
具体方法：将标准IL-3中加入5ml校正稀释液RD5（用于组织培养液）、校正稀释液RD6（血清或血浆样品）或用能反映待测样品中IL-3含量的稀释度。这样则配成2000pg/ml的母液。以该母液倍比稀释（如下述），使此法IL-3的检测范围为10pg～2000pg/ml。
建议标准：IL-3所用的稀释度为2000pg/ml，1000pg/ml，500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml，31.3pg/ml以及0pg/ml。
方法：
A.将上述各稀释度分别标记于6个试管或小瓶，每管加入2ml稀释液。
B.在1000pg/ml管中加入2ml标准IL-3，混匀。
C.从1000pg/ml管中取2ml加入500pg/ml的管中，混匀。
D.连续重复该过程，完成倍比稀释。
E.以未稀释的标准IL-3作为标准曲线的最高浓度（2000pg/ml）。以合适的稀释度作为零浓度（0pg/ml）。
冻于－20℃，可保存30天。避免反复冻融。
（3）步骤：
①对于血清或血浆样品，在加入样品及标准之前，每一个样品及标准需加入50μl检测稀释液RD1。注：非血清或血浆样品不需要加此试剂。
②每孔加入200μl的标准或样品，室温孵育2h。
③吸干，每孔加入400μl洗液，洗4次。残余液以干净的吸水纸吸干。
④每孔加入HRP标记的IL-3多克隆抗体200μl，室温孵育2h。
⑤重复③洗板。
⑥每孔加入底物液200μl，室温孵育20min。
⑦每孔加入终止液50μl，混匀。
⑧30min内在分光光度仪上测定每孔的吸光度A450nm。如果不需要波长校正，设于540nm或570nm。如果需要波长较正，则需用540nm或570nm）的A值减去450nm处的A值。
（4）结果计算：平行孔取平均值，并将样品的A值减去零标准A值。
以各标准IL-3浓度对其相应的A值作图。将数据在Log/Log坐标纸上线性化并回归分析。
4.7 正常值
生物学活性测定，ELISA（酶联免疫吸附试验）：10～2000pg/ml （分子质量30～40kU）。
4.8 化验结果临床意义
（1）刺激肥大细胞系增殖。
（2）刺激从分离的造血祖细胞形成中性粒细胞、巨噬细胞、巨核细胞、嗜碱性细胞、嗜酸性细胞、Mast细胞。
（3）促进人T细胞特定亚群的生长。
（4）增强嗜酸性细胞、嗜碱性细胞、单核细胞的活性。
（5）协同干细胞因子诱导人CD34＋细胞形成嗜碱性细胞和肥大细胞。
4.9 附注
（1）此方法可直接测定人IL-3（存在于组织培养上清、血清、血浆及其它体液中）。
（2）敏感性：血清样品中，可检测IL-3的最小值为8.9pg/ml。非血清样品中，可检测IL-3的最小值为7.4pg/ml。95%正常人血清中IL-3的含量在检测范围内（10～2000pg/ml）。
（3）特异性：此方法可检测天然或在大肠杆菌中重组的人IL-3。与16种不同的细胞因子或生长因子（hrIL-6、hrTNF、hrGM-CSF、hTGF、pTGF、pPDGF、bFGF）无交叉反应，不能检测鼠IL-3。
（4）标准曲线上IL-3稀释度的选择应与待测样品一致。
如果所测样品值高于标准IL-3的最高值，则需要稀释样品并重新测定。