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血浆游离皮质醇

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1 拼音

xuè jiāng yóu lí pí zhì chún

2 英文参考

Plasma free cortisol

3 概述

正常情况下,游离皮质醇含量仅占其总量的5%以下,但正是这极少部分皮质醇发挥着生作用血浆游离皮质游离皮质醇属生物活性部分。

4 血浆游离皮质醇的医学检查

4.1 检查名称

血浆游离皮质醇

4.2 分类

激素类测定 > 肾上腺素测定

4.3 取材

血液

4.4 血浆游离皮质醇的测定原理

皮质醇为肾上腺皮质所分泌的糖皮质激素,标记抗原样品中的抗原对特异抗体产生竞争抑制反应,当加入标记抗原和抗体的量恒定时,则带标记的结合物形成与抗原的含量成反比,根据标准曲线求出样品的含量。

4.5 试剂

(1)0.1mol/L pH7.0磷酸-氯化钠缓冲液(PBS)0.2mol/L NaH2PO4·2H2O100ml,0.2mol/L Na2HPO4·12H2O 400ml,NaCl 9g,加水至1000ml。

(2)1g/L明胶-磷酸缓冲液(W/V):简称1g/L GPS,贮于4℃。

(3)5g/L明胶-磷酸缓冲液(W/V)  简称5g/L GPS,贮于4℃。

(4)2.5g/L DCC溶液葡聚糖T70 250mg,溶于PBS 100ml,加活性炭NoritA2.5g,搅拌或振摇1h,贮于4℃,使用时再用PBS10倍稀释。

(5)闪烁液:对联三苯(TP)4g,1.4-双-2-(5-苯基噁唑基)苯(POPOP)125mg,醋酸乙酯250ml,二甲苯1000ml,室温避光保存

(6)抗体:皮质醇-C21-牛血白蛋白为抗原免疫家兔,抗体的工作液浓度为1∶3800,对皮质酮17-羟孕酮的交叉分别为10%和17%。

(7)氚标皮质醇:[1,2-3H]皮质醇,比活性(SA)=148×1016Bq/mmol(40Ci/mmol),放化纯度>95%,工作液用无水乙醇配成7000cpm/10μl,密封,贮存于4℃。

(8)皮质醇标准液:上海第九制药厂层析纯,工作液用无水乙醇配成2ng/100μl,密封,4℃保存。

4.6 操作方法

(1)血浆和尿样品测定:取0.1ml血浆或万分之一的24h混合尿,都用蒸馏水稀释至0.5ml,于10ml抽提管中,加二氯甲烷5ml和0.1mol/L NaOH0.2ml,抽提5min,静止片刻弃去上层液,下层二氯甲烷抽提液用水洗2次,每次1ml,摇1min,离心1500r/min 3min,弃去水层,取二氯甲烷提取液双份各1ml(复管),45℃压缩空气吹干,加3H-皮质醇7000cpm/10μl,45℃吹干,各管加0.2ml抗血清应用液(1∶3800用1g/L GPS稀释),摇匀置4℃过夜,以下步骤同标准管。

(2)标准曲线制作:0,0.1,0.3,0.6,1.0,2.0,4.0ng(各点做复管),各管加3H-皮质醇10ml,吹干,每管加抗体0.2ml,另取四管各加3H皮质醇10ml,分别加1g/L GPS 0.7和0.2ml其中二管作总脉冲测定管,另二管作非特异性测定(BN%)摇匀后,放4℃过夜。次日各管加5g/L GPS0.1ml摇匀,再加2.5g/L DCC0.5ml(总管T不加)。分离游离与结合物;摇匀4℃停放10min,3000r/min离心10min吸取上清液0.4ml,加到8ml闪烁液中,混旋1min,避光4h后,用液烁计数仪测量

4.7 正常值

放射免疫分析法RIA法):

上午(8:00):166.5~441.4nmol/L

下午(16:00):55.18~248.3nmol/L

午夜(0:00):63.4~129.6nmol/L

4.8 化验结果临床意义

(1)升高:库欣综合征(皮质醇增多增多症)、异位产生ACTH肿瘤燕麦肺癌胰腺癌甲状腺癌甲状旁腺癌、卵巢癌睾丸癌、大肠癌胆囊癌乳腺癌、纵膈瘤等)、垂体前叶功能亢进症。

(2)降低:肾上腺皮质功能低下、原发性肾上腺皮质功能减退症(艾迪生病)、西蒙病(Sinmond病)、希恩综合征(sheehan病)、先天性肾上腺皮质增生症、长期应用类固醇激素。

4.9 附注

(1)各管加入3H或标准必须吹干,然后加抗体,因为3H或标准是乙醇配制,否则会损害抗体。

(2)加定量的3H须根据实验情况而定(本文加7000cpm),在相应的范围内3H抗原加入量越少灵敏度就越高。

4.10 相关疾病

库欣综合征、肺癌、胰腺癌、甲状腺癌、大肠癌、胆囊癌、乳腺癌、原发性肾上腺皮质功能减退症、肾上腺皮质功能减退症、希恩综合征、先天性肾上腺皮质增生症

相关文献

开放分类:化验及医学检查肾上腺素测定激素类测定
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参与讨论
  • 评论总管
    2019/10/14 4:10:06 | #0
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本页最后修订于 2013年2月24日 星期日 13:11:08 (GMT+08:00)
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2019/10/14 4:10:06