1 拼音
xuè hóng dàn bái cè dìng
2 方法
氰化高铁血红蛋白( HiCN)法[1]。
3 原理
血红蛋白(Hb)中的亚铁离子(Fe2+)被高铁氰化钾氧化成高铁离子(Fe3+)，血红蛋白转化成高铁血红蛋白。高铁血红蛋白与氰离子(CN-)结合，生成稳定的氰化高铁血红蛋白，在540 nm波长处有一个较宽的吸收峰，在该波长处测得的吸光度(A)与溶液中浓度成正比。以测得的样品吸光度值与氰化高铁血红蛋白标准液吸光度值比较，得出样品血红蛋白含量。[1]
4 器材
[1]
75%酒精，酒精棉球，消毒的干棉球，一次性无菌采血针，经标定合格的一次性微量血红蛋白吸管，一次性10 mL塑料试管，可见光分光光度比色计，光径1.0 cm比色杯。
采血针与微量血红蛋白吸管应一人一换，不得重复使用。医疗废物应按照卫生部颁布的《医疗卫生机构医疗废物管理办法》进行处理。
5 试剂
[1]
a) 四种浓度的氰化高铁血红蛋白标准液：50 g/L、100 g/L、150 g/L、200 g/L。
b) 市售氰化高铁血红蛋白试剂，用蒸馏水按比例要求稀释，贮存于棕色玻璃瓶中备用。
或配制氰化高铁血红蛋白试剂（HiCN试剂）：
氰化钾(KCN) 0.050 g
高铁氰化钾[K3Fe(CN)6] 0.200 g
无水磷酸二氢钾(KH2PO4) 0.140 g
非离子表面活性剂(Triton X-100，Saponic218等) 1.0 mL
上述成分分别溶于蒸馏水中，混合，置1L容量瓶内，再加蒸馏水至1000 mL混匀，储存于棕色玻璃瓶中，置4℃～10℃保存不超过1个月。试剂应为淡黄色透明溶液，pH值在7.0～7.4。若试剂出现混浊则不能使用。本试剂不吸收480nm以上的光波，因此读数与蒸馏水空白一致。
6 操作步骤
[1]
a) 血红蛋白测定仪器的校正：以HiCN试剂调零，以50 g/L、100 g/L、150 g/L、200 g/L四种浓度的氰化高铁血红蛋白标准液校正仪器，分别测定在540 nm波长的吸光度。在标准仪器条件下，波长540 nm各浓度吸光度值恒定。若四种浓度标准液吸光度读数误差在允许范围内（表3），血红蛋白含量与吸光度符合式(1)：
Hb (g/L) =A×K-A×367.7 …………………………(1)
式中： Hb-血红蛋白值，单位为克每升(g／L)；A-吸光度； K-常数，为367.7。
相应Hb真值 | 误差允许范围 | ||
A真值 | g/L | A | H b/(g/L) |
0.136 | 50 | 0.133～ 0.1399 | 49～51 |
0.272 | 100 | 0.267～0.277 | 98～102 |
0.408 | 150 | 0.400～0.416 | 147～153 |
0.544 | 200 | 0.533～0.554 | 196～204 |
氰化高铁血红蛋白标准液吸光度读数若超出表3误差范围，式(1)中的K需要按式(2)校正：
K校正=（∑吸光度真值／∑吸光度读数）×367.7
=（1.360/∑吸光度读数）×367.7 ………．(2)
b) 于10 mL试管中加入5 mL HiCN试剂。
c) 用酒精消毒左手无名指，待干后用一次性无菌采血针向指尖垂直方向穿刺，深约2 mm～3 mm。用一次性微量血红蛋白吸管吸取20 μL血样，管内不得有气泡，擦去管外血液。
d) 置吸管于HiCN试剂中，使管尖在液面下，轻轻自管中推出血液，反复吸取HiCN试剂（3次以上），将管内血液洗净，混匀，静置10 min以上。
e) 于540 nm波长处，以HiCN试剂为空白，测定样品吸光度。f)计算结果
样品血红蛋白值(g/L)=样品吸光度值×367.7（或K校正）…………………(3)
7 结果判断
遵照附录B的规定作出是否贫血的诊断。[1]
8 结果记录
记录血红蛋白测定值与贫血诊断结果。[1]
9 注意事项
[1]
a) 氰化钾是剧毒品，配置试剂与比色后应严格按剧毒品管理程序操作。
b) 用其他方法测定血红蛋白，应溯源至HiCN的结果。
10 参考资料
- ^ [1] GB/T 26343—2010, 学生健康检查技术规范[S]．