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血管紧张素转换酶

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1 概述

血管紧张素转化酶(ACE)又称激肽酶Ⅱ或肽基-羧基肽酶,系统命名为肽基-二肽水解酶。属血管内皮细胞膜结合酶,由肽的C端将氨基酸切为两段变换而来,可使肽链C端二肽残基水解。ACE可催化血管紧张素Ⅰ(十肽)水解成八肽的血管紧张素Ⅱ,使血管进一步收缩,血压升高。也可作用肾上腺皮质,促进醛固酮的分泌。因此,ACE是肾素-血管紧张素-醛固酮的重要成分。ACE还催化具有降压作用的缓激肽水解而失去活性。ACE广泛分布人体组织,以附睾睾丸及肺的含量较丰富,其中肺毛细血管内皮细胞ACE活性最高。肾、脑垂体等组织酶活性较低。ACE测定方法主要有比色法、酶偶联法等。

2 血管紧张素转换酶的别名

血管紧张素转化酶

3 血管紧张素转换酶医学检查

3.1 检查名称

血管紧张素转换酶

3.2 分类

血液生化检查 > 酶类测定

3.3 取材

血液

3.4 血管紧张素转换酶的测定原理

(1)三硝基苯磺酸钠(INBS)显色法:底物马尿酰-甘氨酰-甘氨酸(Hip-Gly-Gly)在ACE作用下,释放出甘氨酰-甘氨酸(Gly-Gly),后者与三硝基苯磺酸(TNBS)作用,生成黄色的三硝基苯-甘氨酰-甘氨酸(TNP-Gly-Gly),其含量与ACE活性呈正相关

(2)酶偶联法:ACE使底物马尿酸双甘肽(Hip-Gly-Gly)水解成马尿酸(Hip)和双甘肽(Gly-Gly),后者与L-γ-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺(GGCN)和γ-谷氨酰基转移酶(GGT)偶联,形成3-羧基-4-硝基苯胺,在340nm处测其吸光度,以反映ACE活性。

3.5 试剂

(1)三硝基苯磺酸钠(INBS)显色法:

①底物液:用5mmol/L的Tris溶液配制30mmol/L HGG溶液,此液中含0.4mol/L Na2SO4、0.3mol/L NaCl,调pH7.3。

②0.1mol/L硼酸缓冲液(pH9.0)。

③100g/L钨酸钠(含2个水)溶液。

④0.33mol/L NaSO4

⑤60mmol/L TNBS溶液。

⑥40mmol/L Gly-Gly。

(2)酶偶联法:

①50mmol/L HEPES缓冲液:称羟、乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)1.191g,加双蒸馏水100ml溶解,用于配制GGT、CGCN和基质缓冲液。

②20kU/L GGT贮存液:取HEPES缓冲液5ml,加入GGT 100U,混匀后分装小瓶,-20℃保存

③6.7kU/L GGT应用液:将上述贮存液用二倍量的HEPES稀释配制。

④0.1mmol/L GGCN溶液:称GGCN 20mg,加入50mmol/L HEPES 60ml,溶解后4℃保存。

⑤基质缓冲液:称HEPES 1.191g,NaCl 1.755g,Na2SO4 5.68g,用双蒸馏水溶解后,用NaOH调pH至8.0,再补充双蒸馏水至100ml,4℃保存。

⑥基质液:由Hip-Gly-Gly 89.5mg加基质缓冲液10ml溶解混合而成。此液各试剂终浓度为:HEPES 50mmol/L,NaCl 30mmol/L,Na2SO4 400mmol/L,Hip-Gly-Gly 30mmol/L。

⑦10mmol/L双甘肽标准液:称Gly-Gly 52.9mg加双蒸馏水溶解,并稀释至100ml,此为贮存液(40mmol/L)。1份贮存液和3份双蒸馏水混合即为应用液。

3.6 操作方法

(1)三硝基苯磺酸钠(INBS)显色法:取试管2支,标明空白管(B)和测定管(U),各加血清0.01ml,B管加试剂(1)、(3)、(4),U管加底物0.1ml,置37℃水浴30min;U管加试剂(3)、(4)各0.1ml,然后B、U管各加蒸馏水1.0ml,混匀;1500g离心10min,各取上清液0.75ml,分别加入试剂(2)1.0ml及TNBS 0.05ml,室温30min或37℃ 15min,用5mm比色杯,在420nm处,B管调零,读取U管吸光度。

(2)酶偶联法:取小试管4支,分别标明测定管(U),标准管(S),血清空白管(SB),试剂空白管(RB)。按表1操作。

混匀,以双蒸馏水调零点,410nm波长比色,记录各管2min吸光度△A值。

3.7 正常值

(1)三硝基苯磺酸钠(INBS)显色法:26.1~56.7kU/L。

(2)酶偶联法:289±83U/L。

3.8 化验结果临床意义

血清ACE测定主要同于肺部疾病的诊断,对其他系统疾病的诊疗也有一定

价值。

(1)肺部疾病:绝大多数结节病患者血清ACE活力升高,其阳性率及幅度与病情活动与否和病变累及的范围有关。肺结核也可升高,而哮喘发作、急性心原性肺水肿、慢性阻塞性肺疾患、自发性气胸、肺纤维化、成人呼吸窘迫综合征等血清ACE均有不同程度下降。

(2)肝脏疾病:多数肝脏病患者ACE活性升高,升高幅度依次为肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎。脂肪肝则正常。

(3)甲状腺疾病:甲亢患者ACE活性明显高于其他甲状腺疾病,且酶活力高低与T3、T4含量呈正相关。

(4)其他:糖尿病、虹膜炎、免疫母细胞肉瘤等,血清ACE升高;高血压结肠炎等则降低。

3.9 附注

(1)三硝基苯磺酸钠(INBS)显色法:

标本在室温或冰箱存放1周,酶活力无明显变化,-15℃保存3周酶活性稳定

胆红素对ACE有明显抑制作用,故重度黄疸可使测定结果偏低。EDTA是ACE的强抑制剂,NaCl和Na2SO4对ACE有明显的活化作用,溶血、脂血对结果无影响。

③本法与紫外分光光度法酶活力单位一致,但其测得值为紫外法的9倍。

(2)酶偶联法:

①当底物pH 8.0,GGCN 1.0mmol/L,GGT6.7ku/L时,ACE活性与吸光度值有良好线性。线性范围大,即使ACE在1500U/L,不用稀释也可获得理想结果。

②GGCN浓度选择:本反应体系中GGCN既是测定酶ACE的受体,又是指示酶GGT的供体。以1.0mmol/L的GGCN最理想,在此浓度下GGCN与吸光度保持良好的线性。

③GGT对测定的影响:本反应利用GGT将双甘肽与GGCN偶联,生成黄色的3-羧基-4-硝基苯胺,其加入量可直接影响测定结果。GGT高浓度可使底物过度消耗,使吸光度偏离曲线;低浓度GGT又使吸光度偏低,灵敏度不高。每次加入0.335 U GGT,可获得理想吸光度与线性。在此浓度下,酶基质液的空白管吸光度<0.1A。

3.10 相关疾病

结节病、肺结核、肺水肿、自发性气胸、气胸、肝硬化、脂肪肝、糖尿病、肉瘤、黄疸

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开放分类:血液生化检查化验及医学检查酶类测定
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参与讨论
  • 蓝宝石
    2016/5/5 15:19:23 | #1
    我在4月23日化验在尿酸中的一项血管紧张素转化酶结果是100.7,而且参考值12-68,高出不少,不知是什么原因,请您指教
  • 小李
    2016/5/5 15:16:13 | #2
    我在4月23日化验在尿酸中的一项血管紧张素转化酶结果是100.7,而且参考值12-68,高出不少,不知是什么原因,请您指教
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本页最后修订于 2013年2月24日 星期日 15:57:51 (GMT+08:00)
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