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血氨

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1 拼音

xuè ān

2 英文参考

blood ammonia

3 概述

人体内的氨是蛋白质代谢过程中通过氨基酸氨基肾脏使谷氨酰胺分解肠道细菌作用而生成。大部分氨在肝内通过鸟氨酸循环合成尿素。一部分被用于酮酸的氨基化,合成谷氨酰胺,在肾内形成铵盐从尿中排出。血氨在诊断治疗肝昏迷肝性脑病中占重要地位,尿中氨测定是估价体内酸碱平衡紊乱的指标之一,血氨的测定方法离子交换树脂法、直接法、电极法及酶法,其中酶法以其简单、特异性高而被广泛应用。

4 血氨的医学检查

4.1 检查名称

血氨

4.2 分类

血液生化检查 > 氨基酸、氮化物、有机酸测定

4.3 取材

血液

4.4 取材

血液

4.5 血氨的测定原理

血浆氨的酶法测定基于下列反应

在过量α-酮戊二酸、NAD(P)H和足量谷氨酸脱氢脱氢酶(GLDH)条件下,酶促反应的速率,即NAD(P)H转变成NAD(P)使340nm吸光度的下降速率与反应体系中氨的浓度呈正比关系。

4.6 试剂

全部试剂必须用去氨水制备。去氨水用蒸馏水经氢型阳离子交换树脂处理获得。

(1)66.7mmol/L KH2PO4溶液:取9.12g KH2PO4溶入去氨水中,定溶到1L,4℃保存

(2)66.7mmol/L Na2HPO4溶液:取9.51g Na2HPO4溶解并加去氨水到1L,4℃保存。

(3)pH8.0(±0.05),66.7mmol/L磷酸缓冲液(PB):取5ml“1”液及95ml“2”液,混合,4℃保存,稳定3周。

(4)310mmol/L α-酮戊二酸:取0.45gα-酮戊二酸,溶于5ml去氨水中,用3mol/L氢氧化钠调pH至接近5.0时,改用0.1mol/L氢氧化钠调pH至6.8(±0.01),切勿调得过碱,因高pH可破坏α-酮戊二酸,以去氨水稀释到10ml,4℃稳定10天;

(5)NADPH贮存液:称约10mgN-ADPH(-20℃、干燥器保存)溶于1mlPB中取出50μl,以PB稀释到5ml为工作液,以PB调零,1cm光径,在340nm波长读NADPH工作液的吸光度,计算NADPH贮存液中实际浓度:

6.22为NADPH的毫摩尔吸光系数,据上式计算结果确定制备GLDH工作液中加入NADPH贮存液的量,使达到149μmol/L。

(6)GLDH工作液:根据GLDH酶制品(-20℃干燥器中保存)的比活,称出酶活力为992U的相应量(如比活为50U/mg蛋白,则称20mg),如GLDH在甘油中,可按U/ml吸出992U的相应体积,置50ml量瓶中,称入ADP(-20℃,干燥器中保存)15mg,吸入计算量的NADPH贮存液,以PB稀释到50ml,4℃保存可稳定7天;

(7)氨标准贮存液,100mmol/L:称取(NH42SO4 660.7mg,溶于去氨水定容到100ml,4℃保存;

(8)氨标准应用液:用去氨水分别稀释贮存液成25、50、100、及150μmol/L。

4.7 操作方法

所用分光光度计需配有37℃恒温比色系统及340nm波长。如用自动分析仪,可根据本法反应条件自行设计,样品及试剂用量按比例减少。

操作见表1,按B、S、U管先后顺序进行。

混匀,于10s时读A10s于70s时读A70s,求各管的△A,即△A=A10s-A70s

4.8 正常值

18~72μmol/L。

4.9 化验结果临床意义

正常情况下,氨在肝脏中转变为尿素。严重肝脏疾病时,氨不能从循环中清除,引起血氨增高。高血氨有神经毒,引起肝性脑病(肝昏迷)。故成人血氨测定主要用于肝昏迷的监测和处理。

此外,血氨测定对儿科诊断Reye综合征非常有用。该征有严重低血糖、大块肝坏死、急性肝衰,并伴有肝脂肪变性,在肝酶谱增高前,即见血氨增高。对诊断某些先天代谢紊乱,如鸟氨酸循环的氨基酸代谢缺陷(高血氨)也很重要。

4.10 附注

(1)各试剂成分的终浓度:磷酸盐540mmol/L,α-酮戊二酸10mmol/L,NAD-

PH 120μmol/L,ADP0.5mmol/L,GLDH16U/ml。

(2)酶法测定血浆氨具有特异、简便、快速等优点,且可上自动分析仪。腺苷二磷酸(ADP)可稳定GLDH,增强反应速率。NADPH作辅酶较NADH可缩短反应时间,但前者价格更贵。

(3)血浆中LDH、AST等也可利用NAD(P)H而产生内源性的消耗,直接影响血浆氨测定结果,起动剂α-酮戊二酸加入前37℃加温10min为NAD(P)H内源性消

耗反应时间。

(4)血浆氨测定的准确性在很大程度上取决于标本收集是否符合要求。用EDTA·Na2抗凝,静脉采血抗凝剂充分混匀后立即置冰水中,尽快分离血浆,加塞置2~4℃保存,在2~3h内分析;-20℃可稳定24h,显著溶血者不能用,因红细胞中氨浓度为血浆的2.8倍。

(5)线性范围0~150μmol/L,日常工作中可仅用100μmol/L标准应用液。

(6)如测定值超出线性范围,可用去氨水稀释血浆后重作。

(7)血氨含量甚微,要防止环境及所用各种器皿中氨的影响。

(8)国内已有血浆氨酶法测定试剂盒,请按说明书操作。如中生公司的试剂盒,用三乙醇胺缓冲液,NADPH作辅酶,NADPH内源性消耗反应在室温中需反应20min。

4.11 相关疾病

昏迷、肝性脑病、低血糖

相关文献

开放分类:血液生化检查氨基酸、氮化物、有机酸测定化验及医学检查
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参与讨论
  • 评论总管
    2019/8/22 22:15:04 | #0
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本页最后修订于 2013年2月24日 星期日 16:03:07 (GMT+08:00)
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