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胃液乳酸脱氢酶同工酶

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1 拼音

wèi yè rǔ suān tuō qīng méi tóng gōng méi

2 英文参考

Gastric juice lactate dehydrogenase isoenzyme

3 概述

乳酸脱氢酶有5种同工酶形式,即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5,可用电泳法进行分离人体心肌、肾、红细胞以LDH1和LDH2为最多。肝和横纹肌则以LDH4和LDH5为主。脾、胰、甲状腺肾上腺中LDH3较多。乳酸脱氢酶同工酶是观察心肌疾病、肝胆胃疾病等的指标之一。

4 胃液乳酸脱氢酶同工酶的医学检查

4.1 检查名称

胃液乳酸脱氢酶同工酶

4.2 分类

体液排泄物检查 > 胃液十二指肠引流液检查/胃液乳酸脱氢酶及同工酶

4.3 取材

胃液

4.4 胃液乳酸脱氢酶同工酶的测定原理

根据LDH各同工酶一级结构和等电点的不同,在一定的电泳条件下,使其在支持物上分离。以乳酸钠为底物,氧化型辅酶Ⅰ(NAD)作氢受体,LDH催化乳酸脱氢,生成丙酮酸,并使NAD还原为NADH。酚嗪二甲酯硫酸盐(PMS)将NADH的氢传递氯化碘代硝基四唑(INT),使其还原成紫红色甲化合物。因此,有LDH活性的区带即显紫红色,其颜色深浅与酶活性成正比。由阳极至阴极其区带依次为LDH1、LDH2、LDH3、LDH4及LDH5。因电渗作用,LDH5位于加样槽之阴极端。

4.5 试剂

(1)巴比妥缓冲液(pH8.6,μ=0.075):称取巴比妥钠15.458g,巴比妥2.768g,溶于蒸馏水中,加热助溶,冷后稀释至1L。电泳用。

(2)巴比妥-盐酸缓冲液(pH8.2,0.082mol/L):称取巴比妥钠17.0g,溶于蒸馏水中,加1mol/L盐酸24.6ml,蒸馏水稀释至1L。

(3)10mmol/L乙二胺四乙酸二钠:称取EDTA·Na2 372mg,溶于蒸馏水中,稀释至100ml。

(4)5g/L缓冲琼脂凝胶:称取琼脂糖0.5g,加入50ml pH8.2巴比妥-盐酸缓冲液中,再加入EDTA·Na2溶液1.2ml及蒸馏水48.8ml,隔水煮沸溶解,不时摇匀,趁热分装于大试管中,待冷后横置冰箱备用。

(5)8g/L缓冲琼脂糖凝胶:称取琼脂糖0.8g,加入50ml pH8.2巴比妥-盐酸缓冲液中,再加入EDTA·Na2溶液2ml及蒸馏水48ml,配法同上。

(6)底物-显色液:

DL-乳酸溶液:取85%乳酸(AR)2ml,用1mol/L氢氧化钠调至中性(约用1mol/L氢氧化钠23.6ml)。

①1g/L PMS:称取50mg PMS,加蒸镏水50ml溶解。

③10g/L AND:称取100mg AND溶于10ml新鲜蒸馏水中。

④1g/L INT:称取30mg INT,溶于30ml蒸馏水中。

以上试剂须贮棕色瓶中,置4℃冰箱保存。除10g/L NAD+外,均可保存3个月以上。

底物-显色液:临用前取上列各试剂按下列比例混合而成。

A.液4.5ml

B.液1.2ml

C.液4.5ml(或AND+45mg蒸馏水4.5ml)

D.液12.0ml

将以上4液混匀,共22.2ml。

(7)固定漂洗液:按乙醇∶水∶冰醋酸=14∶5∶1(V/V/V)的比例混合,或按95%乙醇∶冰醋酸=98∶2的比例混合。

4.6 操作方法

(1)制备凝胶玻片:取5g/L缓冲琼脂糖凝胶一管,置沸水浴中加热融化。吸取1.2ml融化的凝胶液,均匀地铺于拭净的7.5cm×2.5cm玻片上,待冷却凝固后,于凝胶板阴极端约1~1.5cm处挖槽,用滤纸吸去槽中水分。

(2)加样:用微量进样器加血清约40μl于槽内。

(3)电泳:电压75~100V,电流8~10mA/片,电泳30~40min,待血清白蛋白部分泳动3~4cm即可。

(4)显色:于电泳结束前5~10min,将底物显色液与沸水浴融化的8g/L缓冲琼脂糖凝胶按4∶5的比例混合,制成显色凝胶液,置热水(约50℃)中备用(注意避光)。

中止电泳后,取下凝胶玻片置铝盒内,立即用滴管吸取显色凝胶液约1.2ml,迅速滴于凝胶玻片上,使其自然铺展覆盖完全,待显色凝胶凝固后,加盖避光,置37℃水浴中,使铝盒浮于水面保温1h。

(5)固定和漂洗:取显色的凝胶玻片,浸入固定漂洗液中20~40min,至背景无黄色为止,再移至蒸馏水中漂洗多次,每次10~15min。

4.7 正常值

36~253U。

4.8 化验结果临床意义

(1)胃癌:LDH升高2~3倍,LDH5>LDH4>LDH3>LDH2>LDH1

(2)萎缩性胃炎(中度或重度)伴肠上皮化生:LDH4>LDH5>LDH3>LDH2>LDH1

4.9 附注

(1)同血清LDH。

(2)标本切忌溶血

4.10 相关疾病

胃癌

相关文献

开放分类:化验及医学检查体液和排泄物检查胃液和十二指肠引流液检查胃液乳酸脱氢酶及同工酶
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  • 评论总管
    2020/6/1 12:59:59 | #0
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本页最后修订于 2013年2月28日 星期四 14:57:08 (GMT+08:00)
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