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脱氧核糖核酸染色

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1 拼音

tuō yǎng hé táng hé suān rǎn sè

2 英文参考

Deoxyribonucleic Acid Stain

3 概述

脱氧核糖核酸是组成细胞核的成分,与特殊染液作用,被染成浅红色或紫红色。

4 检查名称

脱氧核糖核酸染色

5 化验类别

血细胞化学染色、血液检查 > 血液检查

6 取材

血液

7 脱氧核糖核酸染色的原理

末端脱氧核糖核酸转移酶(terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT)是一种细胞内酶,催化细胞的脱氧核苷酸,使其转移到低聚核苷酸或多聚核苷酸的3'-OH端而无需模板指导。兔抗牛TdT抗体能和人细胞的TdT产生交叉反应,可采用免疫荧光技术或酶标免疫细胞化学技术用辣根过氧化酶-抗酶复合物(PAP immunocomplex)在细胞涂片或组织切片上定位显示细胞内的TdT。

采用PAP免疫细胞化学技术得到的结果与免疫荧光法相一致,该法更加灵敏,阳性率增高,可精确的定位TdT。

8 试剂

(1)正常兔血IgG

(2)免抗牛TdT抗体1∶8稀释。

(3)羊抗兔IgG 1∶10稀释。

(4)PAP免疫复合物(PAP immunocomplex from rabbit)1∶20稀释。

(5)二氨基联苯胺(3,3'-diaminobenzidine,DAB)溶液0.05mol/L Tris-HCl-9g/L NaCl液(pH7.4)100ml,含过氧化氢(V/V)为0.03%,4℃保存,用前加入30mg DAB,溶解过滤,立即避光使用。

(6)过氧化氢-甲醇固定液:甲醇液中含过氧化氢浓度为0.03%(V/V),4℃保存。

(7)0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.2)。

9 操作方法

(1)新鲜抗凝血标本,用比重1.077的淋巴细胞分离液作密度梯度分离,取淋巴细胞层细胞离心涂片,空气干燥。或不作细胞分离,直接涂片。

(2)涂片用过氧化氢-甲醇液于4℃下固定20~30min,以阻断细胞的内源性过氧化酶。

(3)涂片在0.1mol/L磷酸盐缓冲液中浸泡15min,滴加正常兔血清,以减少抗体非特异性结合。

(4)滴加兔抗牛TdT抗体,37℃保温30min。

(5)滴加羊抗兔IgG抗体,37℃保温30min。

(6)滴加PAP免疫复合物,37℃保温30min。

(7)将涂片浸入DAB溶液,室温作用5~10min。

(8)水洗5min,干后镜检,或用哈氏苏木素染液复染胞核10min。

10 正常值

幼稚血细胞脱氧核糖核酸颗粒堆积、聚集、染色深、成熟血细胞脱氧核糖核酸颗粒分布均匀,细小,染色浅。

11 临床意义

1.鉴别细胞的成熟程度,如小原粒细胞与成熟淋巴细胞的区别,小原粒细胞染色浅、核仁明显;淋巴细胞染色深。

2.鉴别急性白血病的类型,原淋巴细胞反应较强,染色质染成粗颗粒;原粒细胞核反应减弱,染色质呈较淡的细颗粒状;原单核细胞反应最弱,染色质呈纤细网状,染色较浅。

(1)急性淋巴细胞白血病DNA颗粒粗、色深、核仁小而少)。

(2)急性粒细胞白血病 (DNA颗粒细、色淡、核仁多而大)。

(3)急性单核细胞白血病(DNA颗粒细、色淡、分布疏散)。

3.鉴别巨幼红细胞与正常红细胞,巨幼红细胞核染色淡呈细网状,正常红细胞核染色深呈粗颗粒至块状。

12 附注

操作中4~6每次均需用0.1mol/L磷酸盐缓冲液冲洗2次,以免沉渣出现。浸入DAB溶液作用应避光操作。DAB为致癌剂应注意皮肤防护。

相关文献

开放分类:血液检查化验及医学检查血细胞化学染色、血液检查
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  • 评论总管
    2019/2/21 4:20:03 | #0
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本页最后修订于 2013年3月3日 星期日 17:00:29 (GMT+08:00)
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