鼠红细胞花环形成试验

目录

1 拼音

shǔ hóng xì bāo huā huán xíng chéng shì yàn

2 英文参考

Mouse erythrocyte rosette formation test

3 概述

B淋巴细胞与抗体合成有关,是体液免疫反应的效应细胞。B细胞表面带有膜表面免疫球蛋白(SmIg)、Fc受体及补体受体等。它可与抗原抗体复合物的Fc段牢固结合。选用鸡或羊红细胞,用相应的抗红细胞抗体致敏成EA复合物,B细胞的Fc受体能与EA结合形成花环,称EA花环。如果EA复合物再加上补体,与B细胞的补体受体结合,则形成EAC花环。B细胞表面有鼠RBC受体,能与小鼠RBC结合,形成鼠红细胞花环(M-RFC),主要结合于带有IgM受体的B细胞上,形成M-RFC的多为幼稚B细胞。本试验临床上主要用于检测B淋巴细胞的数量及判断体液免疫水平。

4 检查名称

鼠红细胞花环形成试验

5 分类

免疫学检查 > 细胞免疫测定

6 鼠红细胞花环形成试验的原理

人的B细胞有小鼠红细胞受体,故能与小鼠红细胞(MRBC)形成花环,测定MRBC花环形成细胞(MRFC),可作为B细胞计数的一种方法。

7 试剂

(1)淋巴细胞分层液。

(2)Hank液:含20%小牛血清(用小鼠红细胞吸收过)。

(3)2.0g/L美蓝溶液。

(4)Alsever液。

(5)肝素溶液(500u/ml)。

(6)小鼠红细胞悬液:选健康成年小鼠,每只小鼠经心脏穿刺取血约0.5ml,加等量Alsever液,4℃保存待用,可保存1周。

8 操作方法

(1)取1ml上述小鼠红细胞悬液,加3ml生理盐水混匀,1500r/min,离心10min,共洗3次,最后用生理盐水配成1%小鼠红细胞悬液(约1.4×108个细胞/ml)。

(2)取受检者1.5ml肝素抗凝血,用淋巴细胞分层液分离淋巴细胞,用含20%小牛血清Hank液调整细胞浓度为2×107/ml。

(3)取淋巴细胞悬液0.1ml,加等量1%小鼠红细胞悬液,混合后置37℃水浴10min,500r/min,离心10min,放4℃冰箱2~3h。

(4)用毛细管吸取0.05ml上清液,加1滴2g/L美蓝溶液,轻轻旋转使混匀,取1滴混合物放在玻片上,覆以盖玻片,待细胞下沉后,用高倍镜检查。

9 正常值

结果:镜下计数200个淋巴细胞,凡吸附3个或3个以上小鼠红细胞的淋巴细胞为B淋巴细胞,计算出小鼠细胞花环(ME花环)的百分率。正常人外周血ME花环百分率为5%~10%。

10 化验结果临床意义

慢性淋巴细胞白血病患者外周血液的ME花环百分率高达60%~80%,而无丙种球蛋白血症、严重联合型免疫缺陷等,ME花环百分率减低或缺如。

(1)升高:慢性淋巴细胞性白血病、系统性红斑狼疮。

(2)降低:急性非淋巴细胞性白血病、低丙球蛋白血症、选择性IgG、IgM、IgA缺乏症、淋巴瘤、肾病综合征、骨髓瘤、放射病、应用免疫抑制剂。

11 附注

(1)温育时间:ME花环百分率随温育时间延长而逐渐增加,温育1h,ME百分率为7.4±3.1%,而温育18h,增至18.3±3.8%,温育72h后,花环数又逐渐降至3.4±7.1%。

(2)培养液:以用Tc199培养液最为适宜,其结果及重复性均好。用Hepes缓冲的RPMl 1640培养液洗涤和重悬淋巴细胞和红细胞,导致细胞趋向聚集,而形成大块细胞,从而产生不可靠的结果。

(3)红细胞与淋巴细胞的最适比例约为35∶1,比例>60∶1,或比例<25∶1时,ME花环数可减低。

(4)保存MRBC的培养液:在Alsever液中,MRBC 4℃保存1周仍可产生稳定的花环数,而在PBS,生理盐水或Tc199培养液中保存的MRBC,随着保存时间延长,花环数逐渐下降,保存72h后,只能看到小数花环或无花环形成细胞。

12 相关疾病

慢性淋巴细胞白血病

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