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麝香草酚浊度试验

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1 拼音

shè xiāng cǎo fēn zhuó dù shì yàn

2 英文参考

thymol turbidity test

3 概述

测定血浆蛋白的水平和分析其成分是肝脏疾病重要试验之一。有关这方面的测定在别外章节中已有详尽讨论,本节中主要叙述一些和蛋白质代谢有关的简单血清胶体稳定试验。

各种血清胶体稳定性试验的原理基本相同,但所用的试剂不同,促进和抑制絮浊的作用有差异,目前临床常用的有TTT试验。

4 检查名称

麝香草酚浊度试验

5 分类

血液生化检查 > 蛋白质测定

6 取材

血液

7 麝香草酚浊度试验的原理

肝脏疾病时,血清蛋白的质与量有所改变,当血清和麝香草酚巴比巴比妥液试剂作用时,麝香草酚可减低血清内脂类物质的分散力,而血清经低离子强度的巴比妥缓冲液稀释后,球蛋白的部分溶解度降低而产生沉淀,这种沉淀是球蛋白、脂类和麝香草酚复合体,使溶液变浊,其浑浊程度与沉淀的多少与肝病的严重程度有一定的关系。

8 试剂

麝香草酚缓冲液配制有两种常用方法

(1)麝香草酚-巴比妥缓冲液(pH7.55±0.05)精确称取巴比妥3.09g、巴比妥钠1.69g及麝香草酚6g,倒入经煮沸除去二氧化化碳的1000ml热蒸馏水中,继续加热使溶解。室温静置过夜,若显混浊,可加麝香草酚细末少许。并激烈振荡使结晶析出,过滤后得透明溶液。此液pH7.55±0.05,装瓶内塞紧贮室温备用。若发现混浊丢弃不用

(2)麝香草酚-Tris-HCl缓冲液的配制:

①0.5mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)缓冲液(pH7.7):称取Tris60.6g,加约800ml蒸馏水溶解,用10mol/L HCl(约加35ml)调节至pH7.7。

②100g/L麝香草酚乙醇溶液:重结晶麝香草酚10g,溶于95%乙醇中,并加乙醇至100ml。塞紧置冷处贮存。

③麝香草酚-Tris-HCl缓冲液:取蒸馏水约800ml,加热至40~50℃,加入0.5mol/L Tris-HCl缓冲液20ml,边摇边加入100g/L麝香草酚乙醇溶液10ml,最后加水至1000ml,充分混匀。室温中可至少保存3个月。

9 操作方法

取与标准比浊管口径相同的试管,加入新鲜血清0.05ml,再加入麝香草酚巴比巴比妥缓冲液3ml,混合,室温静置30min,再颠倒混合数次。目视比浊时,可背朝光,比浊管下衬有字白纸,辨认字迹清晰程度来判定浊度单位。与测定管浊度相同的标准比浊管的单位数,即为测定血清的单位数。如用分光光度计比浊时,以麝香草酚巴比巴比妥缓冲液校正“0”点,波长650nm,读取测定管的吸光度,查标准曲线求出浊度单位。

10 正常值

0~6u。

11 化验结果临床意义

各类血清胶体稳定性试验在不同的肝病或同一疾病的不同时期,其阳性率可有差异,各有其一定临床意义。

(1)急性肝炎的诊断:在急性肝炎和急性肝损害时,各类血清絮状、浊度试验均可出现阳性,总阳性率约80%~90%。TTT于发病一周开始升高,二周时达高峰,以后逐渐降至正常。这些改变可在黄疸前期即出现,故对急性肝炎有早期诊断意义,但不如转氨酶敏感,阳性率也比转氨酶低。出现阳性时期较转氨酶为迟,这是因为蛋白质的更新须有一定时间,如白蛋白的半寿期10~36天,因此肝脏疾病引起的蛋白质的变化常需一定时间才能表现出来。在无黄疸型肝炎病例,血清胶体稳定性试验常可作为诊断的敏感指标。如急性肝炎絮浊试验持续阳性,提示肝病有转入慢性化的趋势。

(2)肝炎与肝硬化病情的判断:在急性肝炎时,TTT的变化和血清脂质升降相平行,但随着病变的迁延化、慢性化、则与血清γ球蛋白呈正相关,故TTT持续阳性是肝病迁延化、慢性化的反映。

(3)阻塞性黄疸与肝炎的鉴别:当阻塞性黄疸患者尚无肝细胞损害时,各类血清絮浊试验多属阴性,与急性肝实质损害时不同,对于鉴别黄疸类型有一定价值。但在长期阻塞性黄疸或合并感染的病人,肝实质亦常有损害,此试验亦能呈阳性,但一般见于病程中、后期。在长期黄疸病例,如血清絮浊试验持续阴性,应考虑先天性黄疸的可能。

(4)严重妊娠恶阻妊娠合并肝炎的鉴别:妊娠恶阻时可出现中度的高胆红素血症和转氨酶升高,但血清絮浊试验几乎全都正常;相反,妊娠合并肝炎时则在90%以上病例血清絮浊试验均呈阳性反应

(5)脂肪肝时,TTT常升高。有人测定TTT/ZnTT比值,发现在脂肪肝时较慢性肝炎为高,认为可借此比值变化作为两者鉴别诊断的参考。在转移性肝癌时,TTT值较原发性肝癌时为低,因此对肝癌病例,此试验呈低值者宜先考虑转移性肝癌,呈高值者优先考虑原发性肝癌,但这仅有参考价值,主要还应根据临床。

血吸虫肝硬变时,血清絮浊试验常可阳性。

(6)肝外疾病:血清胶体稳定性试验对肝病并不具有特异性,在其他可发生白蛋白减少、球蛋白(γ或β球蛋白)或类脂质增加的疾病如疟疾、结缔组织疾病、黑热病、亚急性细菌性心内膜炎、多发性骨髓瘤等疾患时,亦可呈阳性反应。

12 附注

TTT是一个很简单的试验,但各试验室间出入往往不小。造成此差异因素很多;首先是虽然同称为TTT试验,但各个实验室在试剂配制,标准曲线绘制或标准管配制方法上并不相同。

(1)国内所报告的TTT单位为Shank(襄克)单位。1944年Maclagen(麦克莱根)首先建立TTT试验,当时以Kingsley(金斯莱)尿蛋白比浊管表示TTT浊度单位(相当于10mg/dl尿蛋白溶液加磺柳酸所显示的浊度为一个Maclagan单位)。后来,Shank和Hoagland改用BaSO4悬液作为浊度标准,由0.0962mol/L BaCl2加H2SO4所产生的浊度相当于Maclagan所应用的Kingsley标准。但在发表文章

时,误印为0.0962N BaCl2,因此测定结果为麦氏单位的二倍(1个麦氏单位=2个Shank单位)。

(2)血清要新鲜,应早晨空腹抽血。用分光光度计比浊法测定麝浊时,如血内脂质较多,可用生理盐水6ml代替缓冲液稀释血清,作空白管。

(3)麝香草酚-巴比妥缓冲液的pH应在7.50~7.60。pH增高,敏感度降低,可出现假阴性;pH降低,敏感度升高,可出现假阳性

(4)为了简化手续,不少实验室用100g/L麝香草酚乙醇溶液,直接加入巴比妥缓冲液中,省去结晶和过滤步骤,但此配方较原法多含1%乙醇,试验结果表明比原配方的浊度偏离约20%,絮状试验阳性率反而降低。

(5)麝香草酚浊度试浊度试验结果随温度的改变而有所变化。一般是温度高,浊度低;温度低,浊度高。为了克服这一误差,可以从表1上将不同温度下的浊度结果换算成25℃的结果以便于比较

使用说明:以6u一行为例,在10℃时测定的6u,实际上在25℃时为4.7u。在30℃时测定的6u,在25℃时为7.2u。余类推。

(6)配制硫酸钡标准比浊管时注意以下几点:①硫酸试剂的浓度硫酸在反应中虽然是过量的,但当浓度小于0.1mol/L,形成的硫酸钡浊度低;浓度大于0.1mol/L浊度增高。因此,硫酸试剂须严格校正至0.1mol/L。②反应温度:10℃时形成的硫酸钡颗粒细,浊度较高,结果重复性好。25℃、30℃、37℃时形成的颗粒较粗,浊度较低,重复性不易控制。③操作手法:混和方法不同,形成的硫酸钡颗粒大小不同,结果相差很大。所以,每次按规定操作可提高精密度

(7)麝香草酚缓冲液易变质,但如保存于冰箱中,可因结晶逐渐析出而降低敏感度,故平时使用时,仍应置室温中,如显混浊,即不能用。

(8)麝香草酚应为洁白晶体,如带黄色,须重结晶处理。可按下法重结晶精制:取麝香草酚100g,溶于100ml 95%乙醇中,以吸滤漏斗过滤。滤液中加入于100ml冷蒸馏水,混匀。静置20min后吸滤,用冷蒸馏水洗结晶两次,可得到洁白的结晶,置干燥器内待完全干燥后使用。

(9)用巴比妥配制的试剂不能久置,超过2周后,TTT结果有增高趋势,一个月后明显偏高。一般认为此试剂不稳定与巴比妥有关,因为久置后,巴比妥试剂的红外线吸收曲线已有明显变化。本文所介绍麝香草酚-Tris-HCl缓冲液,具有稳定性高,所配TTT试剂放室温至少可保存3个月,且浊度结果受室温变化的影响小。

(10)光电比浊法与光电比色法有所不同,比浊法混浊液除了吸收一部分入射光以外,悬浮的颗粒还能使一部分入射光反射折射,因此光电池所感受的光除了经过吸收以后的出射光外,还有折射的光,后者不是平行光束,混和液和光电池之间距离越大,则折射光的影响越小。所以在采用72型分光光度计比浊时,比色杯的位置应放在比色杯座的远光电池的一边,可以提高准确度

(11)麝香草酚缓冲液中麝香草酚含量是影响结果的重要因素之一。浊度单位高低和麝香草酚含量成正比,要求使用25℃的麝香草酚饱和溶液

缓冲液中麝香草酚含量测定法:麝香草酚标准液(1ml含0.1mg):准确称取试剂规格麝香草酚100mg,加水溶解后加水至1L。

取待测麝香草酚缓冲液1ml,用水稀释至10ml,以后按表2进行测定。

混匀37℃水浴放置15min,750nm比色,以空白管校正吸光度至零,读取各管吸光度,按下式计算:

13 相关疾病

黄疸、肝硬化、脂肪肝、转移性肝癌、原发性肝癌、疟疾、多发性骨髓瘤

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开放分类:血液生化检查化验及医学检查蛋白质测定
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  • 评论总管
    2019/8/25 13:20:16 | #0
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本页最后修订于 2013年3月4日 星期一 10:10:59 (GMT+08:00)
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