尿环磷鸟苷

目录

1 拼音

niào huán lín niǎo gān

2 英文参考

urine cyclic phosphazene guanosine

3 概述

环鸟苷酸是由细胞内鸟苷三磷酸(GTP)经鸟苷酸环化酶催化所产生。目前认为环鸟苷酸和环腺苷酸是相互拮抗的物质,在正常生理状态下,组织或血浆中的环腺苷酸和环鸟苷酸浓度的比值保持相对恒定,在分析中往往同时测定这两种物质的浓度,两者比例失调是某些疾病发病机制的一项客观指标。

4 别名

尿环磷酸鸟苷

5 尿环磷鸟苷的医学检查

5.1 检查名称

尿环磷鸟苷

5.2 分类

体液和排泄物检查 > 尿液检查

5.3 化验取材

尿液

5.4 尿环磷鸟苷的测定原理

[3H]-标记测定法:cGMP是继cAMP之后1963年Price发现的另一种环核苷酸。其结构和cAMP基本相似,由鸟苷、核糖和磷酸所组成。测定原理也与cAMP相似,即样品经预处理,将样品和标准同时进行酰化反应,以改善抗体对待测物的亲和力,提高测定方法的灵敏度。样品和[3H]-ScGMP共同竞争性的与抗体结合,从标准剂量反应曲线计算出样品中cGMP浓度。

5.5 试剂

(1)抗血清:以ScGMP-BSA结合物免疫动物获得。与cAMP交叉反应为零,滴度为1∶12000。

(2)[3H]-cGMP:中国原子能研究院产品,比放射活性814GBq(22Ci)/mmol。4℃冰箱贮存。

(3)50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液:同[3H]-cAMP测定法。

(4)[3H]-ScGMP:取[3H]-cGMP 92.5kBq(2.5μCi)加至带玻璃塞提取管中,加琥珀酸酐5mg,蒸馏水0.1ml。再加三乙胺10μl,即刻用力摇1~2min,加50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液10ml。临用前配制。

(5)标准cGMP液(8nmol/ml):取AR级cGMP少许溶于双蒸馏水中。在紫外分光光度计260nm(1cm比色杯)测A值。按照cGMP260nm的A值除以11.7即得cGMPmmol/L。再以蒸馏水稀释8nmol/ml。

(6)标准cGMP(80pmol/瓶):取标准cGMP液10μl加至5ml瓶中,放37℃干燥,加盖密封放4℃保存。临用前,取标准cGMP一瓶,加2ml 50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液溶解,为S6。另取试管5只各加缓冲液0.5ml,从S6中吸出0.5至S5,依次倍比稀释,此系列标准浓度100μl中含有4,2,1,0.5,0.25,0.125pmol。

(7)闪烁液:同[3H]-标记cAMP测定法。

5.6 操作方法

(1)样品的采集和预处理:同[3H]-标记cAMP测定法。

(2)加液程序:取10mm×100mm玻璃试管,注明NSB、S0、S1~5和测定。按表1程序加入样品和试剂。

(3)加[3H]-ScGMP和抗血清后,混匀,放4℃反应2.5h,每管补加冷50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液1ml,混合匀充。

(4)取硝酸纤维膜(上海化工研究院产品)浸于50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液中2h,然后放置在专用滤器上。将反应液滴加至滤膜上抽滤,再用1ml相同缓冲液洗反应管2次,亦加至滤膜上洗涤和抽滤。

(5)将滤膜放80℃ 30min干燥。另取[3H]-ScGMP50μl滴至另一张干燥滤膜上,作为总计数(T)。

(6)将膜放至预先加5ml闪烁液的瓶中,放2~3h后测放射性。

(7)零标准净计数B0,标准管净计数为B,以B0/B为纵坐标,标准管cGMP的Pmol为横坐标,在普通坐标纸作图,在Y轴截距1处得出一条直线。依样品管B0/B值,在标准剂量反应图上得出相对应cGMP的值。再乘5得nmol/L。

5.7 正常值

0.22~0.68μmol/g·肌酐。

5.8 化验结果临床意义

(1)升高:甲状腺功能亢进、甲状旁腺功能亢进、肝硬化、恶性肿瘤。

(2)降低:甲状腺功能减退、甲状旁腺功能减退。

5.9 附注

(1)目前中国原子能研究院提供的[3H]-cGMP系附着于滤纸条的干燥品,不易直接精确取量,可将纸条浸于50%乙醇中,取一定量测放射性,根据闪烁液及仪器的测量效率由cpm换算成dpm,再由dpm换算成放射剂量。

(2)尿液,胃液和脑脊液样品可按血浆相同方法预处理后测定。

(3)[3H]-标记测定法稳定性好,灵敏度略低于[125I]标记法。

(4)以ScGMP-BSA免疫动物所制备的抗体,其亲和力对ScGMP比cGMP约高两个数量级,故样品,标准和[3H]-标记物要经琥珀酰或乙酰化反应处理。以提高测定方法的灵敏度。

5.10 相关疾病

肝硬化

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