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尿6-酮-前列素F1a

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1 拼音

niào 6-tóng -qián liè sù F1a

2 英文参考

Urine 6 - keto - Prostaglandin F1a

3 概述

前列腺素是一组由20个碳原子组成的不饱和脂肪酸,最早发现于精液中,故名为前列腺素(prostaglandin,PG)。PG由一个五碳环结构和两条侧链构成。其结构分为A,B,C,D,E,F,G,H,I等类型,字母右下角的阿拉伯数字表示PG分子侧链所含双键数目,如PGE1和PGE2。凡PG五碳环上的取代基在环平面以下者标以α,如PGF1α,若在环平面以上则标以β,如PGF2β。不同类型的PG,其生物学作用亦不同。目前研究较多的有PGE1,PGE2,PGF2α,PGA2,PGI2,TXA2和TXB2,其中尤以前列环素(PGI2)和血栓素(TXA2)的研究最为广泛。

PG广泛存在于哺乳动物及人的各种重要组织体液中。在血管壁、血小板、肺、肾、胃肠、脑和生殖系统等部位含量较丰富。PG的半衰期仅1~5min。6-酮-PGF1α是PGI2稳定代谢产物。PG是在局部产生而又在局部起作用的一类激素。PG的生理作用极为广泛复杂,各型PG对不同组织和细胞呈现完全不同的作用。PG与心血管、生殖、中枢神经、呼吸、消化、泌尿系、血小板功能炎症反应免疫调节,以及肿瘤转移等均有一定的关系。PGI2能扩张血管,降低周围血管阻力,增加器官血流量,并有排钠利尿作用,从而使血压降低。

4 尿6-酮-前列素F1a的医学检查

4.1 检查名称

尿6-酮-前列素F1a

4.2 分类

体液和排泄物检查 > 尿液检查

4.3 化验取材

尿液

4.4 尿6-酮-前列素F1a的测定原理

(1)[3H]-标记测定法:1976年Moncada发现一种由内皮细胞释放具有强烈抗血小板聚集和舒张血管的类前列腺素物质,称之为前列环素(prostacyclin PGI2)。正常生理状态下,PGI2和TXA2血浆中的浓度保持相对恒定。平衡失调与心、脑血管疾病发病关系密切。PGI2很不稳定,生物半衰期约2~3min。迅速转化为6-酮前列腺素F1a。故测定6-酮前列素F1a完全可以代表PGI2的水平。生物样品中的6-酮前列腺素F1a经提取和纯化,和[3H]-标记物共同竞争性的与特异抗体结合,根据竞争抑制基本理论,从标准曲线上查出样品中的浓度。

(2)[125I]-标记测定法:6-酮-前列腺素F1a经偶联剂反应和TME结合,再以氯胺T法标记125I。样品中的待测物和标记物共同竞争性的与特异性抗体结合,从标准竞争抑制剂量反应曲线上得出样品中的浓度。

4.5 试剂

(1)[3H]-标记测定法:

抗血清:以6-酮前列腺素F1a-BSA结合物为免疫原,注射家兔得到抗血清。滴度为1∶12500临用前用PBS稀释。

②[3H]-6-酮前列腺素F1a:英国Amersham公司产品,高比放射活性5.55TBq(150Ci)/mmol。放-20℃保存。临用取37kBq(1μCi)加至10.5ml PBS中。

③标准6-酮前列腺素F1a(400ng/ml)用90%乙腈配制,分装每安瓶50μl,放-20℃保存。

④标准6-酮前列腺素F1a工作液  取上标准液10μl(4ng)于10mm×100mm管中,氮气吹干。加1ml PBS溶解。另取试管6只,各加PBS 0.5ml,依次作倍比稀释。此系列标准液200μl含12.5~800pg,临用前配制。

分离剂、闪烁液和PBS的配制同[3H]-TXB2标记测定法。

(2)[125I]-标记测定法:

①6-酮-前列腺素F1a-TME的合成:取6-酮-前列腺素F1a 1mg溶于200μl二甲基甲酰胺中,加三正丁胺2μl为A液。另取二甲基甲酰胺100μl,加氯甲酸异丁酯2μl为B液。再取TME 1.3mg溶于200μl二甲基甲酰胺中,加三正丁胺1μl为C液,将A、B液混合放冰浴中15min,再加入C液,在室温下反应2~3h。氮气吹干。残渣溶于少量甲醇中,点在硅胶G板上,展开液为正庚烷乙酸乙酯甲酸∶水(5∶11∶2∶1)。将Rf值为0.06处区带刮下,用无水乙醇提取两次。分装每瓶约含2.5μg,氮气吹干,放-20℃保存。

②6-酮-前列腺素F1a-TME 125I标记:碘化标记技术同TXB2法,反应液点在硅胶G板上,展开液为乙酸乙酯∶冰醋酸∶正庚烷∶水(22∶4∶10∶20)。将Rf值0.24处刮下,经无水乙醇提取,放-20℃保存。临用前用PBS稀释至100μl约10000cpm。

③抗血清:同[3H]标记测定法。

④标准液:同[3H]标记测定法。

⑤PR分离剂:取Tris-NaN3-PEG液(含MW6000PEG140g/L)20ml,加蒸馏水70ml,混合后再加羊抗兔IgG血清3~4ml,正常兔血清0.5ml,加水至100ml。

4.6 操作方法

(1)[3H]-标记测定法:

①样品的采集,提取同TXB2测定法。

②取8mm×70mm玻璃试管,T管加PBS0.4ml,NSB管加PBS 0.3ml,S0管加PBS 0.2ml。S1~7标准工作液0.2ml,测定管加待测样品0.2ml。

③除T管和NSB管外,其余各管加抗血清0.1ml,放4℃ 8~12h。

④所有各管均加[3H]-标记物0.1ml。放4℃ 8~12h。

⑤除T管外,各加分离剂0.1ml,快速混匀1min,放4℃ 15min,离心3500r/min(4℃)15min。

⑥将上清液全部倾出至预先加有12ml闪烁液的计数瓶中,混匀,放12h后在液体闪烁测量仪上按预先编制的程序测量,直接划出标准曲线、有关参数和样品管的6-酮-前列腺素F1a值。然后再换算成ng/L

(2)[125I]-标记测定法:

①取10mm×100mm塑料管,按表1加入样品和试剂。

②加入PR试剂后,充分混合,放4℃ 30min,离心(3500r/min)15min。减压吸去全部上清液。在γ免疫计数器上测量各管放射性。

③以B/B0 logit为纵坐标,标准管浓度为横坐标,经直线回归处理在Logit对数坐标纸上绘制标准曲线。依样品管的B/B0 Logit值,从标准曲线上查得样品管相对应浓度。再换算成浓度ng/L。

4.7 正常值

(1)[3H]-标记测定法:

尿液641.5±234.6pg/min尿

(2)[125I]-标记测定法:健康成人17名,均经查体无心、脑和肾脏疾病,测定结果为146.94±11.78ng/L。同时和[3H]标记法进行对照测定。两法结果经统计学处理,无显著性差异。

4.8 化验结果临床意义

6-酮-PGF1α水平变化见于:①心血管系:动脉粥样硬化患者血浆6-酮-PGF1α下降,TXB2增加,糖尿病高脂血症有类似变化。TXA2/PGI2比值升高易于导致血小板聚集,血栓形成,促进动脉硬化冠心病。由出血损伤内毒素引起的休克动物血浆中6-酮-PGF1α水平增高。②慢性肾衰患者尿中TXB2和6-酮-PGF1α下降。肾内PG对调节肾血流有重要意义,肾血管性高血压肾病综合征和Batter征患者尿中有显著变化。③PG对生殖系特别是与排卵过程、黄体转归、甾体合成,子宫活动,以及卵子精子的运行有密切关系。孕妇PGI浓度升高,并对血管紧张素Ⅱ的加压效应敏感性减弱可能与胎盘PGI合成增多有关。④炎症反应:如接触性皮炎患者皮肤洗出液中PGE和PGF的含量比无炎症皮肤高10倍。炎症渗出液中也含有PGI2和TXB2。注入外源性PGE和PGI2等表现出强烈的红、肿、热痛等炎症反应。PG合成酶抑制剂有良好的抗炎效果、亦说明PG类物质在炎症发生中起着重要作用。⑤肿瘤转移,恶性肿瘤患者动脉组织中PGI2良性肿瘤患者少,半衰期变短。PGI2和TXB2的产生,可能阻止肿瘤细胞侵袭血小板进而黏附在血管表面。抑制血小板TXA2生成和增加血管内皮细胞PGI2生成的因素有肿瘤转移作用。

4.9 附注

(1)本法使用高比放射活性[3H]-标记物,采用免疫结合非平衡法,灵敏度较高,最小检出值6.25~12.5pg/管。

(2)向正常血浆中加6-酮-前列腺素F1a 100,500pg/ml,回收率88.5%~98.5%,批内CV5.5%~10.5%,批间CV 10.5%~15.1%。

4.10 相关疾病

糖尿病、高脂血症、血栓形成、肾血管性高血压、肾病综合征、接触性皮炎

相关文献

开放分类:化验及医学检查体液和排泄物检查尿液检查
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  • 评论总管
    2019/10/15 3:12:25 | #0
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本页最后修订于 2013年3月3日 星期日 0:31:42 (GMT+08:00)
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2019/10/15 3:12:25