脑脊液载脂蛋白

目录

1 拼音

nǎo jǐ yè zǎi zhī dàn bái

2 英文参考

apolipoprotein in cerebrospinal fluid

3 概述

组成脂蛋白的特殊蛋白称为Apo。Apo是决定脂蛋白性质的主要蛋白成分。在不同的脂蛋白中,Apo的种类、含量和功能也不同。Apo的主要功能有:①构成脂蛋白,使血浆脂质成为可溶性。②激活或抑制脂蛋白代谢有关的酶。③识别脂蛋白受体,与特异性脂蛋白受体结合。④结合和转运脂质,稳定脂蛋白结构等。

4 脑脊液载脂蛋白的医学检查

4.1 检查名称

脑脊液载脂蛋白

4.2 分类

体液和排泄物检查 > 脑脊液检查

4.3 化验取材

脑脊液

4.4 脑脊液载脂蛋白的测定原理

用聚苯乙烯微量反应板为固相载体,以apo(a)单克隆抗体(McAb)包被,加入待测标本,使其中的apo(a)与固相化的McAb结合,洗涤除去未结合的标本中其他蛋白质,再加入酶标记的apo(a)McAb,与结合到固相抗体上的apo(a)作用,洗涤除去未结合的酶标记物。加入酶的相应底物产生颜色反应,显色的程度决定于结合在固相载体的apo(a)量。

McAb应用杂交瘤技术制备,以超速离心结合层析法纯化的LP(a)为抗原。所制备的McAb应与apoB及纤溶酶原(PMG)无交叉反应。混合数株识别apo(a)上不同抗原位点的McAb,用于建立血清LP(a)双抗体夹心法。

4.5 试剂

(1)包被缓冲液:0.02mol/L碳酸盐缓冲液pH9.5;

(2)包被抗体与酶标抗体:用McAb混合液,以(NH4)2SO4沉淀法制备抗人apo(a)-IgG,部分作包被用,部分以过碘酸盐法交联辣根过氧化物酶(RZ≥3)得酶标抗体,-20℃保存可稳定数月;

(3)稀释/封闭液:pH7.4缓冲液含磷酸盐0.01mol/L及氯化钠0.15mol/L,临用前取适量缓冲液,加入适量小牛血清及吐温-20;

(4)底物溶液:0.1mol/L枸橼酸及0.2mol/L Na2HPO4缓冲液,pH5.0,临用前每100ml缓冲液中加入邻苯二胺0.1g及30%H2O20.1ml;

(5)终止液:2mol/L H2SO4

(6)洗涤液:0.15mol/L NaCl,每升含吐温-20 0.5ml;

(7)参考血清:目前尚无公认的定值血清,可暂用商品(如BM公司产品,1410962)。

4.6 操作方法

(1)单向免疫扩散法。

(2)火箭免疫电泳法。

(3)ELISA法。

4.7 正常值

(1)单向免疫扩散法:未测出ApoB100、C,而ApoC含量极微;ApoA1为0.01±0.0054g/L,ApoE为0.0069±0.0016g/L与22.2%。

(2)火箭免疫电泳法:ApoA10.04±0.01g/L。

(3)ELISA法:ApoE 0.008±0.001g/L。。

4.8 化验结果临床意义

脑脊液中载脂蛋白含量远低于血液水平,免疫组化试验证明大脑额叶的星形胶质细胞及某些神经元能合成ApoE,而CSF中的ApoA1与ApoC可能从血中渗入。但当患神经系统疾病时,可致血脑屏障功能受到损害。使其通透性增高,血液中ApoA1可更多渗入CSF中,ApoA1含量增加;因ApoB100分子量大不能透过,故脑膜炎、脑血管病,脑囊虫患者ApoA1、ApoE在CSF中的水平均升高。载脂蛋白的测定可为诊断某些神经系统病提供有价值的信息。

4.9 附注

(1)LP(a)颗粒中apo(a)与apoB以二硫键相联结;apo(a)的氨基酸组成与PMG有高度同源性,故用LP(a)给动物免疫所得抗血清(多克隆抗体)中同时有抗apoB与PMG抗体,通常用亲和层析法纯化,不易获得纯apo(a)抗体。但用杂交瘤技术制备的McAb可以避免与apoB及PMG的交叉反应。

(2)为了避免孔间差异,减少误差,同一标本最好平行做2~3份,取平均值。

(3)应严格掌握稀释的精密度,由于血清LP(a)水平可小于10mg/L或高达1000mg/L以上,对过高过低的标本应调整稀释倍数后重新测定。

(4)包被抗体与酶标抗体不可反复冰冻融化,稀释/封闭液及底物液应新鲜配制。空白吸光度增高可能由于底物溶液陈旧或封闭不充分。

(5)本法批内CV<5%,批间CV<9%。实验误差来源有板间差、孔间差、稀释及加样误差、试剂质量及孵育时间等。

大家还对以下内容感兴趣:

用户收藏:

特别提示:本站内容仅供初步参考,难免存在疏漏、错误等情况,请您核实后再引用。对于用药、诊疗等医学专业内容,建议您直接咨询医生,以免错误用药或延误病情,本站内容不构成对您的任何建议、指导。