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脑脊液胶体金试验

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1 拼音

nǎo jǐ yè jiāo tǐ jīn shì yàn

2 英文参考

cerebrospinal fluid colloidal gold test

3 概述

胶体金试验法,是检验中一种特殊检查方法,用于临床诊断和鉴别诊断。

4 检查名称

脑脊液胶体金试验

5 分类

体液排泄物检查 > 脑脊液检查

6 化验取材

脑脊液

7 脑脊液胶体金试验的原理

脑脊液中抗核抗体抗原片上抗原结合后,再以金标记SPA与抗原片上与抗原结合的抗核抗体IgG Fc部分结合。金标记SPA作为一种催化剂,经对苯二酚等还原剂作用,将银染色液中银离子还原成不溶性金属银沉淀在每个金颗粒的周围。银沉淀在光镜下清楚可见核区有棕黑色颗粒。

8 试剂

(1)pH7.4 0.02mol/L Tris-NaCl缓冲液(TBS)称取Tris 2.42g NaCl 8.75g,牛血白蛋白(BSA)1.0g、NaN3 0.5g溶于双蒸水后,再加双蒸水至1000ml。用浓HCl调pH至7.4,再加Tween20和TritonX-100各0.1ml,混匀。

(2)银染色液:分别取20.0g/L明胶6ml,pH3.5柠檬酸缓冲液(柠檬酸5.1g,柠檬酸钠4.7g加蒸馏水至20ml)1ml,57.0g/L对苯二酚溶液3ml与25.0g/L硝酸银溶液0.2ml,于用前依次混匀。

(3)胶体金溶液:将氯金酸(HAuCl4)用抗坏血酸鞣酸或柠檬酸钠等还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金)。取10.0g/L氯金酸水溶液1ml加于双蒸水99ml中,煮沸后迅速加入2.45ml柠檬酸钠-鞣酸溶液(10.0g/L、柠檬酸钠2.0ml、10.0g/L鞣酸0.45ml)再煮5min,室温冷却后,补足双蒸水至1000ml,即成直径5nm的紫红色的胶体金溶液。

(4)金标记SPA(SPA-G):胶体金标记SPA或抗体等可用于免疫转印技术与免疫组织化学定位。

①确定SPA最适用量:取10支试管各加入1ml胶体金溶液和0.1ml各稀释度的SPA(1.0g/L SPA系列稀释)混匀后放置5min。各管再加0.1ml 100.0g/L NaCl溶液,置室温2h后肉眼观察,使1ml胶体金保持稳定的紫红色不变的最小SPA量即为SPA最适用量(如80mg/L)。实际标记时SPA用量应再增加10%~20%。

②标记:取胶体金100ml调pH6.0,搅拌下加入SPA1.0mg,5min后加BSA使达10.0g/L浓度。装透析袋中埋入变色硅胶中浓缩,经SephadexG-200柱(1.2cm×30cm)层析,用TBS洗脱,收集清澈透明的深红色组分,加等量中性甘油混合后分装,4℃存贮。

9 操作方法

(1)抗原片制备用鼠肝匀浆制抗原片。

(2)免疫金银染色。

①将待测标本用TBS作1∶10稀释,均匀滴加干抗原片上放37℃湿室中30min。

②流水冲洗后再用TBS浸洗5min共3次。

③用16.0g/L BSA封闭15min后,倾去BSA用滤纸吸干。

④均匀滴加最适工作浓度(用方阵法滴定)的SPA-G,于37℃湿室中反应30min后,再重复②③步骤。

⑤均匀滴加银染色液,于室温避光10min,流水冲洗后,晾干,以高倍镜或油镜检查。

10 正常值

0001111000(符号代表;0为玫瑰红色与对照管相同、1为红带蓝色、2为淡紫色或紫色、3为蓝色、4为微蓝色、5为无色)。

11 化验结果临床意义

(1)梅毒型:0123320000或0134321000,见于各种类型的脑梅毒、多发性硬化

(2)麻痹性:5555542100或5554321000,见于麻痹性痴性痴呆脊髓痨、多发性硬化。

(3)脑膜炎型:0001224531或0011232210,见于各种球菌性脑膜炎、结核性脑膜炎

12 附注

(1)此法具有分辨力高,定位精确的优点。

(2)所用玻璃器皿应洁净,所用蒸馏水必须双蒸或三蒸。

(3)配制胶体金溶液时,调整各试剂的比例可获直径不同的金颗粒。

直径>10nm的金粒子不易穿透组织,故作细胞内抗原定位时,以配制直径5nm的金溶胶为宜。

(4)硝酸银、对苯二酚溶液应避光保存并临用时现配。

(5)被检血清中有其他自身抗体,如抗平滑肌抗体抗心肌抗体抗线粒体抗体等其抗原片应根据专门试验的要求制备。

13 相关疾病

梅毒、多发性硬化、麻痹性痴呆、痴呆、结核性脑膜炎

相关文献

开放分类:化验及医学检查体液和排泄物检查脑脊液检查
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  • 评论总管
    2020/11/25 14:20:28 | #0
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本页最后修订于 2013年3月4日 星期一 17:08:03 (GMT+08:00)
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