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脑脊液环磷腺苷

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1 拼音

nǎo jǐ yè huán lín xiàn gān

2 英文参考

cerebrospinal fluid cyclic adenosine monophosphate

3 概述

环磷酸腺苷是体内一种具有广泛生物效应的物质,在脑组织脑脊液中含量更高。因此当脑和脑膜疾患时,由于细胞代谢紊乱可导致脑脊液中cAMP含量的改变,检测cAMP可能较蛋白质葡萄糖和细胞计数等指标更敏感

4 脑脊液环磷腺苷的别名

脑脊液环磷酸腺苷

5 脑脊液环磷腺苷的医学检查

5.1 检查名称

脑脊液环磷腺苷

5.2 分类

体液排泄物检查 > 脑脊液检查

5.3 化验取材

脑脊液

5.4 脑脊液环磷腺苷的测定原理

cAMP是一种小分半抗原,其特异性抗体是以人工合成的2'-O-ScAMP-BSA结合物免疫动物所获得。抗体对2'-O-位有取代基的cAMP的亲和力较无取代基的cAMP约大100倍。为提高测定方法灵敏度,测定时应将[3H]标记cAMP,样品和标准同时进行琥珀酰化反应然后和抗体反应。从标准曲线查出样品中的浓度。

5.5 试剂

(1)抗血清

①ScAMP的合成:取cAMP20mg,琥珀酸酐100mg至反应瓶中,加去离子水2ml,三乙胺0.2ml,磁力搅拌反应30min。置真空干燥内减压除去三乙胺。加水20ml,放24h,用1mol/L NH4OH调至pH7.0。即刻用强碱型聚苯乙烯离子交换柱层析。0.3mol/L甲酸淋洗,收集258nm流出液。合并,冷冻干燥,产物为ScAMP。

②取SCAMP:经偶联剂作用和BSA结合,作为免疫原,注射山羊或家兔,制备抗血清。

(2)[3H]-SCAMP:取[3H]-cAMP(中国原子能研究院产品)92.5kBq(2.5μCi)至瓶中,加琥珀酸酐5mg,去离子水0.1ml,三乙胺10μl,即刻混合,用力摇45s,加50mmol/L pH6.2醋酸缓冲液至10ml,临用前配制。

(3)50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液:取AR级无水醋酸钠4.1g于800ml蒸馏水中,加茶硷1.44g,溶解后用2mol/L醋酸调至pH6.2,加蒸馏水至1000ml,4℃保存

(4)标准cAMP液(320nmol/L):取纯化cAMP1.11mg,加50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液10ml,微温至溶,放-20℃可长期保存。

(5)标准cAMP(320pmol/瓶) 取标准cAMP液0.2ml至10ml容量瓶中,加去离子水至10ml刻度。取5ml带塞瓶,每瓶加50μl,放37℃干燥,4℃水箱可保存3年内稳定

(6)酰化试剂:取200mg/ml琥珀酸酐丙酮液2.5ml,三乙胺0.9ml混合,临用前新配。

(7)闪烁液:取PPO4g,POPOP 100mg,加AR级二甲苯1000ml。

5.6 操作方法

(1)脑脊液采集:取脑脊液3ml,即刻加至预先放有0.25mol/L EDTA Na2 50μl的冷试管中,迅速混匀,离心(3500r/min)10min,放-20℃保存。

取脑脊液1ml至提取管中,加无水乙醇3ml,置快速混匀器上1min,离心,上清液倾至15ml蒸发皿中,向沉淀物中加75%乙醇3ml重复提取一次。上清液合并,置55℃水浴上吹干。残渣溶于0.5ml 50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液。

(2)组织样品处理:活组织取得后即刻置氮气中,快速称取30~50mg于研磨器中,加50mmol/LpH6.2醋酸盐缓冲液1ml,制成匀浆后即刻放沸水浴中3~5min。离心,取上清液放-20℃保存。

(3)标准工作液:取标准cAMP一瓶,加50mmol/L pH6.2醋酸盐缓冲液1ml。另取试管7只,各加50mmol/L pH6.2醋酸缓冲液0.5ml,从标准液中吸出0.5ml至第一管,依次作倍比稀释。此系列标准液50μl中含有0.125~8pmol。临用前稀释。

(4)10mm×100mm玻璃试管,NSB管加缓冲液150μl,S0管加缓冲液50μl,S1~7管加不同浓度标准液50μl,测定管加待测样品50μl。

(5)向每管加酰化试剂10μl,即刻用力摇5~10s。各管加[3H]-SCAMP液50μl。

(6)除NSB管外,各加抗血清100μl。混匀,放4℃反应2.5h。向每管加冷缓冲液1ml。

(7)将反应液滴加至联接抽气泵的微孔滤膜上抽滤,再加2ml冷缓冲液洗涤反应管,亦加至膜上抽滤。取下滤膜,放80℃30min。

(8)将滤膜放至预先加有5ml闪烁液的计数瓶中,放2h后在自动液体闪烁测量仪上测放射性。

(9)以B0/B为纵坐标,标准管浓度为横坐标,在普通方格纸上作图,可得y轴截距为1的直线。依样品管的B0/B值,从标准曲线上得至相对应的浓度。再乘10得cAMPnmol/L。

5.7 正常值

(8.7±3.3)pmol/L。

5.8 化验结果临床意义

(1)增高:见于细菌性脑膜炎脑出血蛛网膜下腔出血脑梗死髓母细胞瘤脑囊虫病脊髓压迫症产生实质性损害时。

(2)减低:见于脑萎缩或陈旧性脑损伤

脑脊液中cAMP变化较比血液中cAMP变化更具有特异性。

5.9 附注

cAMPT和cGMP参与多种生理功能物质代谢过程,很多生物性物质如激素神经递质药物毒素等,在体内作用过程中,均使细胞内cAMP与cGMP的水平发生变化。

5.10 相关疾病

脑出血、蛛网膜下腔出血、脑梗死、髓母细胞瘤、囊虫病、脊髓压迫症

相关文献

开放分类:化验及医学检查体液和排泄物检查脑脊液检查
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  • 评论总管
    2020/1/24 4:31:42 | #0
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本页最后修订于 2013年3月4日 星期一 17:10:33 (GMT+08:00)
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