脑脊液单克隆抗体检测癌细胞

目录

1 拼音

nǎo jǐ yè dān kè lóng kàng tǐ jiǎn cè ái xì bāo

2 英文参考

cerebrospinal fluid monoclonal antibodies detect cancer cells

3 概述

一般常规方法制备的抗体往往纯度不高,特异性亦不够强,在免疫学和血清学的检查中一直存在着判定、重复性和标准化等问题,而单克隆抗体技术无疑是免疫学中的一个重要突破。

4 检查名称

脑脊液单克隆抗体检测癌细胞

5 分类

体液和排泄物检查 > 脑脊液检查

6 化验取材

脑脊液

7 脑脊液单克隆抗体检测癌细胞的原理

将新鲜脑脊液标本经1150r/min离心10min,沉渣用白明胶包被于玻片上,然后用苏木素和伊红染色,用磷酸缓冲液冲洗。加适当稀释度的单克隆抗体于玻片上,同时做阳性和阴性对照。置湿盒于室温30min,取出后用PBS冲洗,加入纯化的羊抗鼠IgG荧光素结合物,再置室温30min,干燥后加90%甘油于玻片上于荧光显微镜下观察结果。

8 试剂

(1)荧光标记抗体(或抗原)。

(2)0.01mol/L pH7.2 PBS缓冲液。

(3)组织或细胞基质片。

(4)缓冲甘油(pH7.2)。

(5)荧光显微镜。

(6)湿盒。

9 操作方法

(1)直接荧光抗体法:

①抗原基质片(活检组织冰冻切片,被检物直接涂片,培养物涂片等),经无水乙醇或丙酮、甲醇等(要根据实验要求选择固定剂)固定处理后室温晾干。

②加荧光标记同属类特异性抗体于基质片上,放湿盒置室温或37℃温箱反应30min~1h。

③0.01mol/L pH7.2 PBS缓冲液冲洗15min(换3次PBS)。

④pH7.2或pH7.4缓冲甘油封片。

⑤荧光显微镜镜检。

(2)间接荧光抗体法:

①抗原(或抗体)基质片(各种组织冰冻切片或培养细胞等)基质片从冰箱取出立即风干。使用前经无水乙醇或丙酮、甲醇等固定剂处理(根据实验要求选择固定剂),一般固定3~15min,室温晾干。

②被检物(血清、脑脊液或其他渗出物等),根据需要用PBS适当稀释(1∶5或1∶10)滴于抗原基质片上,置室温或37℃温箱反应30min~1h。

③0.01mol/L pH7.2 PBS冲洗15min(更换PBS 3次)。

④加荧光标记抗体,置室温或37℃温箱30min~1h。

⑤PBS冲洗同③。

⑥缓冲甘油(pH7.2)封片,荧光显微镜镜检。

(3)补体法:

①抗原基质片(组织冰冻切片或培养细胞),从冰箱取出立即风干,经无水乙醇或丙酮、甲醇固定3~15min,室温晾干。

②被检物(血清或其他),实验前置56℃水浴中30min灭活,冷却后用PBS根据实验要求适当稀释(1∶5或1∶10)。

③将上述灭活稀释被检物与新鲜豚鼠血清(生理盐水1∶10稀释)或新鲜正常人血清进行等量混合,滴加在基质片上。置室温或37℃温箱反应30min。

④PBS冲洗同(2)-③。

⑤滴加荧光标记抗补体抗体于基质片上置室温或37℃温箱反应30min。

⑥PBS冲洗同④。

⑦缓冲甘油封片,镜检同(2)-⑥。

(4)双层法、加层法、混合法、补体法,可根据原理示意图,用上述基本法操作即可。

(5)双重染色法:用于同时示踪两种抗体或抗原,其操作方法同上,只是荧光标记物用两种荧光素标记,一般用异硫氰酸荧光黄(FITC)发黄绿色荧光,另一种是罗丹明B200(RB200)发橙红色荧光,两种标记物可混合应用,也可先后分别应用,在紫外光下可同时被激发,在同一部位发出各自特异标记荧光。

(6)反衬染色法:在上述荧光染色镜检中,为加强特异荧光与背景的对比度。常用反衬染色的方法,来消除背景荧光,突出特异荧光。常用于反衬染色试剂。有RB200、FITC分别做特异的和非特异的标记,二者混合间接荧光染色法染色以达到特异和非特异反衬目的。另一种试剂是伊文思蓝(Evan blue)它发射与RB200类似的橙红色荧光。使用方法可将FITC荧光染色的标本片,浸入1∶1 000~1∶10000稀释的伊文思蓝溶液中2~5min,取出后用PBS冲洗10min,封片镜检。也可将伊文思蓝以适当的比例与荧光标记抗体溶液混合染色,镜检中可观察到明显衬出FITC黄绿色特异荧光。

10 正常值

阴性。

11 化验结果临床意义

脑脊液中恶性细胞有癌细胞、神经外胚层瘤细胞和淋巴瘤细胞。其检测阳性率可达60%。单克隆抗体技术可鉴定恶性细胞的组织来源,有助于癌性脑膜病的早期诊断。

12 附注

MCAb具有单一性好,特异性强,纯度高和重复性好等特点。

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