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淋巴细胞毒试验

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1 拼音

lín bā xì bāo dú shì yàn

2 英文参考

Lymphocytotoxicity test

3 概述

当特异的效应T淋巴细胞在体外与靶细胞接触时,可表现出破坏和溶解靶细胞的特性,称为淋巴细胞毒作用(cytotoxicity)。靶细胞可以是肿瘤细胞或其它组织细胞。淋巴细胞杀伤靶细胞的方式可通过直接杀伤或产生淋巴因子破坏靶细胞。

本试验方法有形态检查法和同位素释放法两种。前者不需特殊设备,只需用显微镜计数靶细胞的存活数,操作比较方便。后者则是用125I-脱氧脲嘧啶核苷51Cr标记靶细胞,以放射性同位素的释放作为靶细胞受损伤的指标。此法需要特殊设备如液闪仪等,但可自动测量,结果重复性好。

4 淋巴细胞毒试验的别名

淋巴细胞细胞毒试验

5 检查名称

淋巴细胞毒试验

6 分类

免疫学检查 > 细胞免疫测定

7 淋巴细胞毒试验的原理

各种贴壁生长的靶细胞,当被致敏的T淋巴细胞杀伤后可失去贴壁能力,故可从贴壁靶细胞数目的减少情况判断淋巴细胞杀伤靶细胞的能力。

8 试剂

同形态检查法和同位素释放法。

9 操作方法

(1)靶细胞的接种:选用能贴壁生长的肿瘤细胞,用Hank液洗涤后经2.5g/L胰酶消化2~3min,倒去胰酶液(细胞仍贴在瓶壁),用Hank液轻洗细胞3次,倒去Hank液。用含10%~20%小牛血清的RPMI 1640液将贴壁细胞冲洗下来,用100目滤网过滤除去细胞团块,制备成1×106/ml单个肿瘤细胞悬液,用滴管吸取细胞悬液滴入40孔培养板中,每孔1滴(约含100~150个细胞),置培养板于37℃含5% CO2孵箱中20h。取出培养板甩去其中培养液,瑞氏染色后计数每10孔中平均贴壁的肿瘤细胞数,如果两组平均数相差>1/3,表明误差太大不能使用,如果误差不大其它各培养板可进行正式试验。

(2)分离淋巴细胞:取受检者肝素凝血3ml,用聚蔗糖-泛影葡胺分层液分离淋巴细胞后再用Hank液洗3次,然后用RPMI 1640液配成(2~3)×105/ml细胞悬液。

(3)细胞毒试验:淋巴细胞和靶细胞按200∶1比例混合,每孔中加入(2~3)×104个淋巴细胞(0.1ml体积中)约每孔再加入含20%小牛血清的RPMI 1640液0.1ml,置培养板于37℃ 5%CO2孵箱中40h。取出培养板甩去培养液,瑞氏染色后于显微镜下计数培养板底部残留的靶细胞数。

10 正常值

形态学检查法:比较受检组与对照组,P<0.05。

125I或51Cr法:P>0.05。

11 化验结果临床意义

本试验可以作为体外测定肿瘤患者细胞免疫的指标;也可以通过测定机体免疫活性细胞杀伤肿瘤细胞的能力,来判断肿瘤患者的预后;还可以鉴定淋巴细胞的功能性亚群。

12 附注

(1)在测定受检者淋巴细胞攻击肿瘤细胞的能力时,实验组中加入肿瘤细胞和受检者淋巴细胞,对照组中加入肿瘤靶细胞和培养液。若检测其它样品肿瘤抗原免疫原、治疗药物等与细胞免疫的关系,则应增设第3组,在此试验组中先使淋巴细胞与待测样品作用,继经洗涤后再观察此“致敏淋巴细胞”对肿瘤靶细胞的杀伤作用。此时前两组成为对照组。

(2)靶细胞与淋巴细胞的活率要处于最佳状态,一般要>90%。

(3)加入培养液中的小牛血清须先作毒性试验

(4)接种靶细胞和淋巴细胞的计数要准确。

(5)实验组和对照组应安排在同一块板上以减少误差。

(6)培养液的pH以6.8~7.2最为适宜。

相关文献

开放分类:化验及医学检查免疫学检查细胞免疫测定
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  • 评论总管
    2019/8/21 4:56:36 | #0
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本页最后修订于 2013年3月4日 星期一 22:59:37 (GMT+08:00)
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