泪液乳酸脱氢酶

目录

1 拼音

lèi yè rǔ suān tuō qīng méi

2 英文参考

tear fluid lactate dehydrogenase

3 概述

泪液中的LDH(EC1.1.1.27)和MDH(EC1.1.1.37)主要来自眼角膜上皮。它们在泪液中的浓度约为血清中该酶浓度的20倍。泪LDH主要含M亚基,以LDH5和LDH4含量最高。泪液MDH同工酶,用醋纤膜电泳,可分离出MDHs和MDHm,健康人泪液以MDHs为主。

4 泪液乳酸脱氢酶的医学检查

4.1 检查名称

泪液乳酸脱氢酶

4.2 分类

体液和排泄物检查 > 唾液与泪液检查

4.3 泪液乳酸脱氢酶的测定原理

LDH以NAD作氢的受体,催化乳酸脱氢,生成丙酮酸,后者与2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液呈红色,根据颜色深浅求出酶活性。

4.4 试剂

(1)底物缓冲液(含0.3mol/L乳酸锂,pH8.8):取乳酸锂2.88g,二乙醇胺2.1g,加蒸馏水约80ml溶解,以1mol/L HCl调pH8.8,加水至100ml。

(2)11.3mol/L辅酶Ⅰ(NAD)溶液:称氧化型辅酶Ⅰ15mg,溶于20ml蒸馏水中,冰箱保存可用2周。

(3)1mmol/L 2,4-二硝基苯肼(DNPH)溶液:称取DNPH 200mg,加10mol/L HCl 100ml,溶后加水至1000ml,置棕色瓶内室温保存。

(4)0.4mol/L NaOH溶液。

(5)1mmol/L丙酮酸标准液:称取丙酮酸钠(AR级)11.0mg,以底物缓冲液溶解并稀释至100ml,临用前配制。

4.5 操作方法

使用LDH-L比色操作法。

4.6 正常值

LDH:            1.29~9.02U/L

LDH同工酶:LDH10.66±0.51%

MDH活性:       0.25~2.2U/L

MDH同工酶:MDHs 80%~98.1%

以MDHm>20%为异常

LDH/MDH:<69岁者3.96±0.7

>70岁者4.55±0.51

4.7 化验结果临床意义

在细菌性角膜溃疡和角结膜化学伤时,泪LDH和MDH活性下降。凡角结膜上皮损伤,LDH同工酶H/M比值和MDHm均有不同程度升高,但MDHm更能反映角膜组织损害的情况和病变程度。如在角膜溃疡和可疑干性角结膜炎(KCS),MDHm升高而泪LDH的H/M比值却无显著变化。

泪LDH同工酶和LDH/MDH比值的测定有助于沙眼和慢性结膜炎的鉴别诊断。两者泪液LDH的H/M比值均明显下降,但沙眼时,泪液LDH/MDH比值无变化,而且LDH的M亚基升高更显著。

4.8 附注

(1)比色法:

①乳酸钾、乳酸钠也可作为LDH底物,但因其为水溶液,含量不够准确,且保存不当易产生酮酸类物质,抑制酶促反应。而乳酸锂为固体,稳定,易于称量。

②除二乙醇胺缓冲液外,也可用Tris或焦磷酸缓冲液,避免了原金氏法中甘氨酸缓冲液对LDH的抑制作用,提高了阳性检出率。

③比色应在5~15min内完成,否则吸光度降低。

④结果>2500U时,可用生理盐水稀释标本后再测,其结果乘以稀释倍数。

(2)连续监测法:

①标本勿溶血,当溶血达Hb 0.8g/L时,LDH活性可升高58%。

②标本于室温(25℃)保存,2天内酶活性稳定,冰箱保存酶活性降低,-20℃过夜LDH3、LDH4则全部失活。

③用血清或肝素抗凝血浆测定结果满意,草酸盐可抑制LDH活性。

④复溶后溶液变浊或初始吸光度>0.5应弃去。

⑤利用正逆双向反应均可测定乳酸脱氢酶活性,但因反应温度、底物和缓冲液浓度不同,其参考区间也有差异。以乳酸和NAD为底物,在340nm监测吸光度增高速率为正向反应,以LD-L表示;以丙酮酸和NADH为底物,监测340nm吸光度下降速率为逆向反应,以LD-P表示。正逆反应两法相比,LD-L法的主要优点是:A.正向反应底物液的稳定性比逆向反应的稳定性大,前者冰箱可保存6个月以上,而后者仅几天;B.速率反应的线性范围(吸光度对监测时间t作图)较宽;C.重复性比LD-P好。由于逆向反应速度比正向反应速度快,其参考值约为LD-L的2倍。

4.9 相关疾病

沙眼

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