热词榜

抗生素微生物检定法

广告
广告
医学百科提醒您不要相信网上药品邮购信息!
特别提示:本文内容仅供初步参考,难免存在疏漏、错误等情况,请您核实后再引用。对于用药、诊疗等医学专业内容,建议您直接咨询医生,以免错误用药或延误病情,本站内容不构成对您的任何建议、指导。本站不出售任何药品、器械,也不为任何药品、器械类厂家提供宣传服务。药品类信息为研究性资料,仅供专业人士参考,请不要依据本站信息自行用药。

1 拼音

kàng shēng sù wēi shēng wù jiǎn dìng fǎ

  本法系利用抗生素琼脂培养基内的扩散作用,采用量反应平行线原理的设计,比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小,以测定供试品效价的一种方法

标准品的品种分子式及理论计算值见表2。

2 培养基及其制备方法

培养基I

胨 5g 琼脂 15~20g 牛肉浸出粉 3g 水 1000ml 磷酸氢二钾 3g

除琼脂外,混合上述成分,调节pH使比最终的pH值略高0.2~0.4,加入琼脂,加热溶化后滤过,调节pH值使灭菌后为7.8~8.0或6.5~6.6,在115℃灭菌30分钟。

培养基Ⅱ

胨 6g 葡萄糖 1g 牛肉浸出粉 1.5g 琼脂 15~20g 酵母浸出粉 6g 水 1000ml

除琼脂和葡萄糖外,混合上述成分,调节pH使比最终的pH值略高0.2~0.4,加入琼脂,加热溶化后滤过,加葡萄糖溶解后,摇匀,调节pH值使灭菌后为7.8~8.0或6.5~6.6,在115℃灭菌30分钟。

培养基Ⅲ

胨 5g 磷酸氢二钾 3.68g 牛肉浸出粉 1.5g 磷酸二氢钾 1.32g 酵母浸出粉 3g 葡萄糖 1g 氯化钠 3.5g 水 1000ml

除葡萄糖外,混合上述成分,加热溶化后滤过,加葡萄糖溶解后,摇匀,调节pH值使灭菌后为7.0~7.2,在115℃灭菌30分钟。

培养基Ⅳ

胨 10g 葡萄糖 10g 氯化钠 10g 琼脂 20~30g 枸橼酸钠 10g 水 1000ml

除琼脂和葡萄糖外,混合上述成分,调节pH使比最终的pH值略高0.2~0.4,加入琼脂,在109℃加热15分钟,于70℃以上保温静置1小时后滤过,加葡萄糖溶解后,摇匀,调节pH值使灭菌后为6.0~6.2,在115℃灭菌30分钟。

培养基Ⅴ

胨 10g 琼脂 15~20g 麦芽糖 40g 水 1000ml

除琼脂和麦芽糖外,混合上述成分,调节pH使比最终的pH值略高 0.2~0.4,加入琼脂,加热溶化后滤过,加麦芽糖溶解后,摇匀, 调节pH值使灭菌后为7.2~7.4,按需要分装,在115℃灭菌30分钟,趁热斜放使凝固成斜面。

培养基Ⅵ

胨 8g 磷酸二氢钾 1g 牛肉浸出粉 3g    葡萄糖 2.5g 酵母浸出粉 5g 琼脂 15~20g 氯化钠 45g 水 1000ml 磷酸氢二钾 3.3g

除琼脂和葡萄糖外,混合上述成分,调节pH使比最终的pH值略高0.2~0.4,加入琼脂,加热溶化后滤过,加葡萄糖溶解后,摇匀,调节pH值使灭菌后为7.2~7.4,在115℃灭菌30分钟。

培养基Ⅶ

胨 5g 枸橼酸钠 10g 牛肉浸出粉 3g 琼脂 15~20g 磷酸氢二钾 7g 水 1000ml 磷酸二氢钾 3g

除琼脂外,混合上述成分,调节pH使比最终的pH值略高0.2~0.4,加入琼脂,加热溶化后滤过,调节pH值使灭菌后为6.5~6.6,在115℃灭菌30分钟。

培养基Ⅷ

酵母浸出粉 1g 琼脂 15~20g 硫酸铵 1g 磷酸缓冲液(pH6.0) 1000ml 葡萄糖 5g

混合上述成分,加热溶化后滤过,在115℃灭菌30分钟。

营养琼脂培养基

10g

琼脂

15~20g

氯化钠

5g

肉浸液

1000ml

除琼脂外,混合上述成分,调节pH使比最终的pH值略高0.2~0.4,加入琼脂,加热溶化后滤过,调节pH值使灭菌后为 7.2~7.4,分装,在115℃灭菌30分钟,趁热斜放使凝固成斜面。

培养基可以采用相同成分的干燥培养基代替,临用时,照使用说明配制和灭菌,备用。

灭菌缓冲液

磷酸盐缓冲液(pH6.0) 取磷酸氢二钾2g与磷酸二氢钾8g,加水使成1000ml,滤过,在115℃灭菌30分钟。

磷酸盐缓冲液(pH7.8) 取磷酸氢二钾5.59g与磷酸二氢钾0.41g,加水使成1000ml,滤过,在115℃灭菌30分钟。

磷酸盐缓冲液(pH10.5) 取磷酸氢二钾35g,加10mol/L氢氧化钾溶液2ml,加水使成1000ml,滤过,在115℃灭菌30分钟。

菌悬液的制备

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)悬液

取枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]的营养琼脂斜面培养物,接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中,在35~37℃培养7日,用革兰氏染色涂片镜检,应有芽孢85%以上。用灭菌水将芽孢洗下,在65℃加热30分钟,备用。

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)悬液 取短小芽孢杆菌[CMCC(B)63202]的营养琼脂斜面培养物,照上述方法制备。

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)悬液

取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在35~37℃培养20~22小时。临用时,用灭菌水或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。

藤黄微球菌(Micrococcus luteus)悬液

取藤黄微球菌[CMCC(B)28001]的营养琼脂斜面培养物,接种于盛有营养琼脂培养基的培养瓶中,在26~27℃培养24小时,或采用适当方法制备的菌斜面,用培养基Ⅲ或0.9%灭菌氯化钠溶液将菌苔洗下,备用。

大肠杆菌(Escherichia coli)悬液

取大肠杆菌[CMCC(B)44103]的营养琼脂斜面培养物,接种于营养琼脂斜面上,在35~37℃培养20~22小时。临用时,用灭菌水将菌苔洗下,备用。

啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)悬液

取啤酒酵母菌(9763)的V号培养基琼脂斜面培养物,接种于Ⅳ号培养基琼脂斜面上。在32~35℃培养24小时,用灭菌水将菌苔洗下置含有灭菌玻璃珠的试管中,振摇均匀,备用。

标准品溶液的制备

标准品的使用和保存,应照标准品说明书的规定。临用时照表1的规定进行稀释。

供试品溶液的制备

精密称(或量)取供试品适量,用各药品项下规定的溶剂溶解后,再按估计效价或标示量照表1的规定稀释至与标准品相当的浓度。

双碟的制备

取直径约90mm、高16~17mm的平底双碟,分别注入加热融化的培养基(照表 1)20ml,使在碟底内均匀摊布,放置水平台上使凝固,作为底层。另取培养基适量加热融化后,放冷至48~50℃(芽孢可至60℃),加入规定的试验菌悬液适量(能得清晰的抑菌圈为度。二剂量法标准品溶液的高浓度所致的抑菌圈直径在18~22mm,三剂量法标准品溶液的中心浓度所致的抑菌圈直径在15~18mm),摇匀,在每1双碟中分别加入5ml,使在底层上均匀摊布,作为菌层。放置水平台上冷却后,在每1双碟中以等距离均匀安置不锈钢小管(内径6.0±0.1mm,高10.0±0.1mm,外径7.8±0.1mm)4个(二剂量法)或6个(三剂量法),用陶瓦圆盖覆盖备用。

3 检定法

二剂量法

取照上述方法制备的双碟不得少于4个,在每1双碟中对角的2个不锈钢小管中分别滴装高浓度及低浓度的标准品溶液,其余2个小管中分别滴装相应的高低两种浓度的供试品溶液;高、低浓度的剂距为2:1或4:1。在规定条件下培养后,测量各个抑菌圈的直径(或面积),照生物检定统计法中的(2.2 )法进行可靠性测验及效价计算。

三剂量法

取照上述方法制备的双碟不得少于6个,在每1双碟中间隔的3个不锈钢小管中分别滴装高浓度(S<[3]>)、中浓度(S<[2]>)及低浓度(S<[1]>)的标准品溶液,其余3个小管分别滴装相应的高、中、低三种浓度的供试品溶液;三种浓度的剂距为1∶0.8。在规定条件下培养后,测量各个抑菌圈的直径(或面积),照生物检定统计法(附录ⅩⅣ)中的(3.3)法进行可靠性测验及效价计算。

本法计算所得效价,如低于估计效价的90%或高于估计效价的110%时,则应调整其估计效价,予以重试。

除另有规定外,本法的可信限率不得大于5%。

                                    表1 抗生素微生物检定试验设计表
━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━━┯━━━┯━━━━━┯━━━━━━━━━━━
       │               │  培 养  基 │ 灭菌 │抗生素浓度│    培养条件
 抗生素类别 │    试  验  菌      ├───┬─────┤缓冲液│ 范 围 ├─────┬─────
       │               │ 编 │  pH值  │pH值 │     │ 温  度│ 时  间
       │               │ 号 │     │   │ 单位/ml │  ℃  │ 小 时
───────┼───────────────┼───┼─────┼───┼─────┼─────┼─────
 链霉素    │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]  │ Ⅰ │ 7.8~8.0 │ 7.8 │ 0.6~1.6 │ 35~37 │ 14~16
 卡那霉素   │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]  │ Ⅰ │ 7.8~8.0 │ 7.8 │ 0.9~4.5 │ 35~37 │ 14~16
 阿米卡星   │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]  │ Ⅰ │ 7.8~8.0 │ 7.8 │ 0.9~4.5 │ 35~37 │ 14~16
  巴龙霉素 │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]  │ Ⅰ │ 7.8~8.0 │ 7.8 │ 0.9~4.5 │ 35~37 │ 14~16
  核糖霉素  │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]  │ Ⅰ │ 7.8~8.0 │ 7.8 │ 2.0~12.0│ 35~37 │ 14~16
 卷曲霉素  │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]  │ Ⅰ │ 7.8~8.0 │ 7.8 │10.0~40.0│ 35~37 │ 14~16
 磺苄西林  │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]  │ Ⅰ │ 6.5~6.6 │ 6.0 │ 5.0~10.0│ 35~37 │ 14~16
 去甲万古霉素│枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]  │ Ⅷ │  6.0  │ 6.0 │ 9.0~43.7│ 35~37 │ 14~16
 头孢噻肟钠 │枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]  │ Ⅶ │ 6.5~6.6 │ 6.0 │ 0.5~2.2 │ 35~37 │ 14~16
 庆大霉素  │短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202]  │ Ⅰ │ 7.8~8.0 │ 7.8 │ 2.0~12.0│ 35~37 │ 14~16
 红霉素   │短小芽孢杆菌[CMCC(B) 63202]  │ Ⅰ │ 7.8~8.0 │ 7.8 │ 5.0~20.0│ 35~37 │ 14~16
 新霉素   │金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26003] │ Ⅱ │ 7.8~8.0 │ 7.8②│ 4.0~25.0│ 35~37 │ 14~16
 四环素   │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]   │ Ⅱ │ 6.5~6.6 │ 6.0 │10.0~40.0│ 35~37 │ 16~18
 土霉素   │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]   │ Ⅱ │ 6.5~6.6 │ 6.0 │10.0~40.0│ 35~37 │ 16~18
 美他环素  │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]   │ Ⅱ │ 6.5~6.6 │ 6.0 │10.0~40.0│ 35~37 │ 16~18
 金霉素   │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]   │ Ⅱ │ 6.5~6.6 │ 6.0 │ 4.0~25.0│ 35~37 │ 16~18
 多西环素  │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]   │ Ⅱ │ 6.5~6.6 │ 6.0 │ 4.0~25.0│ 35~37 │ 16~18
 氯霉素   │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]   │ Ⅱ │ 6.5~6.6 │ 6.0 │30.0~80.0│ 35~37 │ 16~18
 杆菌肽   │藤黄微球菌[CMCC(B) 28001]   │ Ⅱ │ 6.5~6.6 │ 6.0 │ 2.0~12.0│ 35~37 │ 16~18
 粘菌素   │大肠杆菌[CMCC(B) 44103]    │ Ⅵ │ 7.2~7.4 │ 6.0 │ 614~2344│ 35~37 │ 16~18
 两性霉素B ①│啤酒酵母菌 (9763)       │ Ⅳ │ 6.0~6.2 │10.5 │ 0.5~2.0 │ 35~37 │ 24~36
━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━┷━━━━━┷━━━┷━━━━━┷━━━━━┷━━━━━
    ① 两性霉素B双碟的制备,用菌层15ml代替两层。
  ② 含3%氯化钠。
                 表2 抗生素标准品品种与理论值
┏━━━━━━━┯━━━━━━━━━━━━━━━━┯━━━━━━━━┓
┃ 标准品品种 │  标准品分子式或品名     │理论计算值 u/mg ┃
┠───────┼────────────────┼────────┨
┃链霉素    │(C21H39N7O12)2·3H2SO4     │ 798         ┃
┃卡那霉素   │C18H36N4O11·H2SO4       │ 831.6       ┃
┃阿米卡星   │C22H43N5O13            │ 1000         ┃
┃核糖霉素   │C17H34N4O10·nH2SO4(n<2)    │        ┃
┃新霉素    │硫酸新霉素             │        ┃
┃庆大霉素   │硫酸庆大霉素           │        ┃
┃磺苄西林   │C16H16N2Na2O7S2         │         ┃
┃头胞噻肟钠  │C16H16N5NaO7S2         │ 951.85      ┃
┃四环素    │C22H24N2O8·HCl         │ 1000         ┃
┃土霉素    │C22H24N2O9·2H2O        │ 927         ┃
┃美他环素   │C22H22N2O8·HCl         │ 923.86      ┃
┃金霉素    │C22H23ClN2O8·HCl        │ 1000         ┃
┃多西环素   │C22H24N2O8HCl·1/2C2H5OH·1/2H2O│ 866.45      ┃
┃红霉素    │C37H67NO13             │ 1000          ┃
┃氯霉素    │C11H12Cl2N2O5          │ 1000         ┃
┃杆菌肽    │杆肽菌                 │         ┃
┃粘菌素    │硫酸粘菌素             │        ┃
┃去甲万古霉素 │C65H73Cl2N9O24·HCl       │ 975.23      ┃
┃卷曲霉素   │硫酸卷曲霉素           │        ┃
┃两性霉素B   │C47H73NO17             │ 1000         ┃
┗━━━━━━━┷━━━━━━━━━━━━━━━━┷━━━━━━━━┛

相关文献

词条抗生素微生物检定法banlang创建,由sun进行审核
参与评价: ()

相关条目:

参与讨论
  • 评论总管
    2019/9/17 1:24:01 | #0
    欢迎您对抗生素微生物检定法进行讨论。您发表的观点可以包括咨询、探讨、质疑、材料补充等学术性的内容。
    我们不欢迎的内容包括政治话题、广告、垃圾链接等。请您参与讨论时遵守中国相关法律法规。
抱歉,功能升级中,暂停讨论
特别提示:本文内容仅供初步参考,难免存在疏漏、错误等情况,请您核实后再引用。对于用药、诊疗等医学专业内容,建议您直接咨询医生,以免错误用药或延误病情,本站内容不构成对您的任何建议、指导。

本页最后修订于 2009年1月14日 星期三 19:35:15 (GMT+08:00)
关于医学百科 | 隐私政策 | 免责声明
京ICP备13001845号
互联网药品信息服务资格证书:(京)-非经营性-2018-0290号

京公网安备 11011302001366号


链接及网站事务请与Email:联系 编辑QQ群:8511895 (不接受疾病咨询)