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抗丁型肝炎病毒IgM抗体

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1 拼音

kàng dīng xíng gān yán bìng dú IgMkàng tǐ

2 英文参考

antihepatitis D virus-IgM

3 概述

HDV为缺陷病毒,依赖HBsAg才能复制,表现为HDV、HBV同时或重叠感染,其传播途径主要是生活接触,也可通过血液制品输血、注射等途径传播。其实验室检查主要是检测抗原抗体

4 抗丁型肝炎病毒IgM抗体的别名

抗-HDV-IgM

5 抗丁型肝炎病毒IgM抗体的医学检查

5.1 检查名称

抗丁型肝炎病毒IgM抗体

5.2 分类

血清学检查 > 病毒的血清学检查

5.3 化验取材

血液

5.4 抗丁型肝炎病毒IgM抗体的测定原理

根据免疫学中抗原,抗体之间的特异性结合的原理,利用抗人免疫球蛋白IgM捕捉待检血清中的IgM,然后加入丁型肝炎病毒抗原(HDAg)使之与血清中IgM抗HDV抗体结合,然后利用酶标记的抗-HDV IgG,它即具有与HDAg相互反应的免疫学特异性,又具有酶的催化,放大活性。当加入相应底物后,酶使底物氧化(HRP)或水解(AKP)从而使无色底物变为有色。利用颜色的深浅或A值的高低确定IgM抗HDV抗体的有无和含量的高低。

5.5 试剂

(1)聚苯乙烯塑料板:40孔或96孔板,进口或国产。

(2)可变微量加样器:20μl,100μ1各1支。

(3)抗人IgM(μ链):鼠抗人IgM单克隆抗体或兔(羊)抗人IgM多克隆抗体

(4)IgM抗HD阴性阳性对照血清。

(5)HDAg:大肠杆菌表达的基因工程抗原粗提液。ELISA滴度:1∶640~1∶1280。

(6)HPR-抗HDV IgG:应用改进的过碘酸钠法标记抗HDV lgG多克隆抗体,使用稀释度1∶400~1∶4000(于10%小牛血清的PBS液中)。

(7)包被液:0.05mol/L pH9.5~9.6的碳酸盐缓冲液Na2CO3 15.9g,NaHCO3 29.3g加水到1000ML,1∶10稀释使用)。

(8)洗液:0.01mol/L pH7.2~7.4 PBS T(内含8.5G/LNaCL,0.5‰Tween 20)。

(9)稀释液:0.01mol/L pH7.2~7.4 PBS。用于稀释和标记抗体。

(10)底物液:用前新配制。4mg邻苯二胺(OPD)+10ml基质液(pH5.0磷酸柠檬酸缓冲液,即Na2HPO4 18.4g、柠檬酸5.1g溶于1000ml离子水中4℃保存备用)待溶化后加3%H2O250μl混合均匀后立即使用。

(11)终止剂:2mol/L H2SO4

5.6 操作方法

(1)用0.05mol/L pH9.5~9.6的碳酸盐缓冲液稀释抗人IgM单克隆抗体,包被聚苯乙烯板,每孔100μl,放4℃过夜。

(2)用PBS T洗3次(中间不停留)拍干。

(3)每孔分别加入100μl1∶1000稀释后的待检血清和阴、阳性对照血清(阴性对照3孔,阳性对照2孔)放37℃1h。

(4)负压下用PBS T洗板3次(方法同上)抽干(将血清和废液抽到消毒瓶内防止污染环境)。

(5)每孔加入50~100μl经适当稀释后的HDAg(2~4个ELISA单位)放45℃1h。

(6)洗3次后,每孔加入50μlHRP-抗-HDV IgG抗体(于含1%小牛血清的PBS中)放42~45℃1h。

(7)洗3次后,加50μl新鲜配制的底物液,放室温暗处显色15~30min,当阳性对照显黄色后,每孔加入1滴(25μl)2mol/L H2SO4终止反应。

5.7 正常值

ELISA法:阴性。

(1)目测法:棕黄色、黄色为阳性,浅黄色可疑,无色阴性。

(2)比色法:测定波长492nm的光吸收值,并计算其S/N值或阈值(cotoff value)凡检测样品的S/N值≥2.1或≥阈值为阳性,反之为阴性。

阈值=阴性对照A492平均值×2.1

5.8 化验结果临床意义

阳性:丁型肝炎近期感染、感染急性期。

凡IgM抗HDV抗体阳性表示近期或HDV感染急性期,如抗体出现波动是慢性HDV感染的一种表现,如配合抗HBc IgM检测还能区别是与HBV合作感染还是重叠感染,故具有重要诊断价值。

5.9 附注

HDV本身不能感染,只能感染HBsAg阳性者。HDVAg抗原性较强,可刺激机体产生IgG、IgM抗体,这些抗体均为非中和抗体,对机体无保护作用

相关文献

开放分类:化验及医学检查血清学检查病毒的血清学检查
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  • 评论总管
    2019/9/19 2:27:42 | #0
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本页最后修订于 2013年2月23日 星期六 20:37:32 (GMT+08:00)
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