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基因转染

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1 拼音

jī yīn zhuǎn rǎn

2 英文参考

gene transfection

3 转染的概念

转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。

4 转染方法分类

对外源基因转染方法的要求包括:

转移效率高,不影响细胞正常生理活动,低毒性,容易使用,重复性好,易获得稳定转化子.

根据转染的机制不同可划分为化学转染法和物理转染法两大类.

4.1 化学转染法

1.DEAE-葡聚糖

DEAE葡聚是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一,DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取,用DEAE-葡聚糖转染成功地用用于瞬时表达的研究,但用于稳定转染却不是十分可靠。

2.磷酸钙法

磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法,因为试剂易取得,价格便宜而被广泛用于瞬时转染和稳定转染的研究,先将DNA和氯化钙混合,然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀,最后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上,通过细胞胞膜的内吞作用摄入DNA。磷酸钙似乎还通过抑制血清中和细胞内的核酸酶活性而保护外源DNA 免受降解.

3.人工脂质体

人工脂质体法采用阳离子脂质体,具有较高的转染效率,不但可以转染其他化学方法不易转染的细胞系,而且还能转染从寡核苷酸到人工酵母染色体不同长度的DNA,以及RNA,和蛋白质.此外,脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达,与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA 转入动物和人的体内用于基因治疗.人工合成的阳离子脂质体和带负电荷的核酸结合后形成复合物,当复合物接近细胞膜时被内吞成为内体进入细胞质,随后DNA 复合物被释放进入细胞核内,至于DNA 是如何穿过核膜的,其机理目前还不十分清楚.。

4.2 物理方法

1.显微注射显微注射虽然费力,但是非常有效的将核酸导入细胞或细胞核的方法。

2.电穿孔

这种方法常用来制备转基因动物,但却不适用于需要大量转染细胞的研究。电穿孔法常用来转染如植物园生智体这样的常规方法不容易转染的细胞。电穿孔靠脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。导入的效率与脉冲的强度和持续时间有关系。

3.基因枪法

基因枪依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内,这种方法适用于培养的细胞核在体内的细胞。

相关文献

开放分类:生物学遗传学
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  • 评论总管
    2019/10/15 20:00:15 | #0
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本页最后修订于 2009年9月26日 星期六 23:01:20 (GMT+08:00)
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