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甲状腺素结合球蛋白

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1 拼音

jiǎ zhuàng xiàn sù jié hé qiú dàn bái

2 英文参考

thyroid binding globulin

TBG

3 概述

甲状腺素结合球蛋白(thyroxine-binding globulin,TBG)是有四个亚基构成的酸性糖蛋白,由肝脏合成,分子量为60kD。TBG是甲状腺激素血液循环中的主要载体蛋白,对甲状腺激素的贮存、运输、代谢以及维持甲状腺激素的浓度和游离甲状腺激素的动态稳定,均具有重要的作用

4 甲状腺素结合球蛋白的医学检查

4.1 检查名称

甲状腺素结合球蛋白

4.2 分类

激素类测定 > 甲状腺激素测定

4.3 甲状腺素结合球蛋白的测定原理

血清中的甲状腺素结合球蛋白(TBG)和Eu3标记TBG共同竞争性的与限量特异抗体结合。以第二抗体IgG包被活化微量滴定条作为固相分离剂。样品中的TBG越高,则特异性抗体和Eu3标记TBG结合就越少。反之,血清TBG降低,则特异性抗体结合Eu3标记TBG的量就增多。故样品孔的荧光强度和待测物浓度呈反比。

4.4 试剂

(1)TBG的提取和纯化:取适量T4溶于少量0.1mol/L KOH液中,即刻滴加到活化琼脂糖珠4B悬液中(2mg T4/ml珠)。放4℃过夜,次晨加20倍体积0.1mol/L NaHCO3液抽滤,除去剩余T4

将正常血清100ml加至烧杯中,加入25ml T4-琼脂糖珠4B混合,室温搅拌反应过夜,静置待4B珠下沉,倾去上清液。用400ml 0.1mol/L NaHCO3洗涤然后装1.5×30cm柱,用NaHCO3平衡柱床至流出液至280nmA值最低时,改用2mmol/L KOH液淋洗。紫外检测,将蛋白峰合并,浓缩。对60mmol/L pH8.6 Tris-NaCl透析48h。将提取物液和适量125I-T4混合加至预先经60mmol/L pH8.6-Tris-NaCl平衡DEAE-Sephadex A-50柱中。用相同缓冲液加NaCl梯度淋洗。收集NaCl浓度为0.2mol/L流出液。用γ计数。合并紫外280nm蛋白峰。经SDS-聚丙烯酰胺圆盘电泳为单一区带。浓缩干燥。即得纯化TBG,供免疫动物标准品和Eu3标记用。

(2)固相第二抗体制备:将羊抗小鼠血清IgG抗体,经盐析DEAE-纤维素层析提取IgG。用50mmol/L pH9.6碳酸盐缓冲液配制成50μg/ml,包被预先用戊二醛处理的微量滴定条。倾出IgG液于清洁瓶中。将条洗涤2次,每孔加10%戊二醛液200μl,室温下放1h,倾出戊二醛液,将滴定条放37℃干燥,重新用原IgG液包被1次,以提高包被固相抗体IgG的量。向每孔加20g/L BSA液200μl,室温放置4~6h,洗涤两次,装入塑料内,密封,放4℃冰箱保存

(3)TBG的Eu3标记:取纯化TBG 2mg溶于0.5ml 0.25mol/L NaHCO3液中,加入Eu3-[对-异硫氰酸苯基]-DTTA螫合剂350μg,用0.25mol/LNaOH液调至pH8.5~9.0,放4℃冰箱反应过夜。次晨将反应液经Sephadex G-50柱分离,紫外280nm检测,收集蛋白峰。测工作液稀释度和标记比活性。加入保护蛋白和防腐剂,分装,放-20℃保存。

(4)试验缓冲液:50mmol/L pH7.6PBS,每1000ml中加白明胶1g,NaN3 0.5g,DTPA8mg,Tween20 0.2g。

(5)抗TBG单克隆抗体:用试验缓冲液按预先所测得的工作液滴度稀释。

(6)标准TBG液:取纯化TBG经高纯度标准品(Pharmacia公司提供)标定。用试验缓冲液配制成2,5,10,20,40,80mg/L。放-20℃保存或冷冻干燥临用前溶解

4.5 操作方法

(1)将固相第二抗体微量滴定条用洗涤液洗2~3次。S0孔加缓冲液25μl,S1~6孔加入相对应不同浓度标准TBG 25μl,样品孔加待测血清25μl,均作双孔。

(2)向每孔加稀释Eu3-TBG液75μl,稀释抗TBG单克隆抗体100μl。室温下置微量滴定板振荡器上反应3h。

(3)倾去反应液,用自动微量滴定板冲洗器(LKB Wallac产品)洗10次。向每孔加增强液200μl。置振荡器上15min。静置15min后在时间分辨荧光计上测量。按预先制的程序,以S0孔的CPS为B0,各S管的CPS为B0所划出的标准曲线是B/B0为纵坐标,标准TBG浓度为横坐标(对数)。并直接打印出待测血清中TBG的浓度。

4.6 正常值

男:17±3.3μg/L;女:17.6±3.9μg/L。

4.7 化验结果临床意义

(1)甲亢患者血清TBG水平明显降低,病情缓解后,TBG可逐渐上升至正常水平。

(2)甲减时,TBG降解速率减慢,血中TBG浓度可明显升高,可随病情的缓解而逐渐下降。

(3)先天性高TBG血症和遗传性TBG缺乏症可出现TBG升高或降低。

(4)严重的肝脏疾病,由于TBG合成和释放增多而出现血中TBG增高。肢端肥大症、严重的糖尿病营养不良等疾病血中TBG多降低。

(5)雌激素糖皮质激素等多种药物均可影响血清TBG的水平,出现TBG升高或降低。

4.8 附注

TBG与T4亲和作用较T3强。

4.9 相关疾病

肢端肥大症、糖尿病

相关文献

开放分类:甲状腺激素测定化验及医学检查激素类测定
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  • 评论总管
    2019/5/22 5:16:43 | #0
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本页最后修订于 2013年2月24日 星期日 17:48:06 (GMT+08:00)
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