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混合淋巴细胞培养

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1 拼音

hún hé lín bā xì bāo péi yǎng

2 概述

混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC)是指将受者和供者的淋巴细胞混合培养数天后,以反应细胞的增殖程度判断两者淋巴细胞相容性的试验[1]。淋巴细胞相容性是组织相容性的指标之一[1]

3 操作名称

混合淋巴细胞培养

4 英文名

mixed lymphocyte culture

5 混合淋巴细胞培养的别名

MLC

6 用品及准备

基本同淋巴细胞毒试验

7 方法及内容

(1) 刺激细胞的处理:有两种方法,一种是将受试细胞悬液用60CoX射线40Gy照射后的细胞直接接种。另一种是使用丝裂霉素处理。向细胞悬液内加入丝裂霉素(终浓度 40mg/ml),置37℃水浴30min,然后用RPM1640培养液洗涤3次。最后将细胞悬浮于1640培养液中计数,调整细胞数至1×106/ml。

(2) 准备微量加样器,用75%酒精无菌双蒸水、无菌生理盐水依次各洗3遍。

(3) 预先准备无菌96孔圆底板,写好标签

(4) 按照双向和单向混合培养的实验设计接种细胞。①双向微量混合淋巴细胞培养 (MLC-D)对照组,AABB每孔加A细胞 100μl或B细胞100μl,实验组:AB每孔加A细胞50μl,B细胞50μl。②单向微量混合淋巴细胞培养(MLC-S)。对照组:AAm、BBm每孔加反应细胞50μl,自身刺激细胞50μl;实验组:ABm、BAm每孔加反应细胞50μl,刺激细胞50μl,每孔总液量为100μl,每种组合 3~4个复管。

(5) 培养板置于37℃、含5%CO2湿润空气环境中培养5d。

(6) 5d后每孔加入2μl(36kBq)3H-TdR,继续37℃培养。

(7) 18h后,用细胞收集器将放射性样品收集于玻璃纤维滤纸上,水洗20s,空吸10s。

(8) 将样品滤纸置于60~80℃烤箱烘干后,移至装有2~3ml闪烁液的测量杯中,待测。

(9) 用β液体闪烁测量仪,测量每份样品的放射性计数(CPM)。

8 结果判读

计算刺激指数SI

因本底CPM值都控制在100以下,故本底CPM值可忽略不计。一般无关个体之间MLC的 SI>10。

9 正常值

形态计数法: 转化率<10% 同位素计数法:比较cpm得出P>0.05 。

10 化验结果意义

移植时,活体供肾者的转化率应<10%;尸体供肾者的转化率应为>10%。只能在同一批实验中选用低反应配组。

11 化验取材

血液

12 验方

细胞免疫测定

13 化验类别

免疫学检查 > 细胞免疫测定

14 参考资料

《新编临床检验与检查手册》、《新编化验员工作手册》

15 参考资料

  1. ^ [1] 中华人民共和国卫生部.WS/T 203—2001 输血医学常用术语[Z].2001-7-20.

相关文献

开放分类:化验及医学检查输血医学人类白细胞抗原分型技术免疫学检查细胞免疫测定
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  • 评论总管
    2019/4/26 8:19:23 | #0
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本页最后修订于 2017年3月17日 星期五 20:26:52 (GMT+08:00)
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