1 拼音
huà zhuāng pǐn zhōng 32zhǒng jìn xiàn yòng rǎn liào chéng fēn de jiǎn cè fāng fǎ
《化妆品中32种禁限用染料成分的检测方法》由国家食品药品监督管理局于2012年1月18日国食药监保化[2012]13号发布。
化妆品中32种禁限用染料成分的检测方法
2 1 适用范围
本方法规定了测定染发类化妆品中32种禁限用染料成分（见附录A）的高效液相色谱法。
本方法适用于染发类化妆品中32种禁限用染料成分的含量测定。化妆品中的染料成分以多种形式存在，如硫酸盐、盐酸盐等，当各种形式同时存在时，应以其中的一种形式表示。
3 2 方法提要
用无水乙醇+水=1+1的混合溶液提取染发类化妆品中的32中禁限用染料成分，用高效液相色谱仪进行分析，以保留时间和紫外吸收光谱定性，峰面积定量。本方法中32种禁限用染料成分的检出限、定量下限及取0.5g样品时的检出浓度及最低定量浓度见表1。
表1 32种禁限用染料成分的检出限、检出浓度、定量下限、最低定量浓度
序号 | 物质名称 | 检出限/ μg | 检出浓度/（μg/g） | 定量下限/ μg | 最低定量浓度/（μg/g） |
1 | p-苯二胺 | 1.2′10-2 | 48 | 3.5′10-2 | 140 |
2 | p-氨基苯酚 | 6.5′10-3 | 26 | 2.0′10-2 | 80 |
3 | 甲苯-2,5-二胺硫酸盐 | 2.0′10-2 | 80 | 6.0′10-2 | 240 |
4 | m-氨基苯酚 | 6.5′10-3 | 26 | 2.0′10-2 | 80 |
5 | o-苯二胺 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 |
6 | 2-氯-p-苯二胺硫酸盐 | 1.5′10-2 | 60 | 5.0′10-2 | 200 |
7 | o-氨基苯酚 | 6.5′10-3 | 26 | 2.0′10-2 | 80 |
8 | 间苯二酚 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 |
9 | 2-硝基-p-苯二胺 | 5.0′10-3 | 20 | 1.5′10-2 | 60 |
10 | 甲苯-3,4-二胺 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 |
11 | 4-氨基-2-羟基甲苯 | 6.5′10-3 | 26 | 2.0′10-2 | 80 |
12 | 2-甲基雷琐辛 | 1.3′10-2 | 52 | 4.0′10-2 | 160 |
13 | 6-氨基-m-甲酚 | 1.0′10-2 | 40 | 3.0′10-2 | 120 |
14 | 苯基甲基吡唑啉酮 | 2.0′10-2 | 80 | 6.0′10-2 | 240 |
15 | N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺hcl | 2.0′10-2 | 80 | 6.0′10-2 | 240 |
16 | 4-氨基-3-硝基苯酚 | 6.5′10-3 | 26 | 2.0′10-2 | 80 |
17 | m-苯二胺 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 |
18 | 2,4-二氨基苯氧基乙醇HCl | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 |
19 | 氢醌 | 3.0′10-3 | 12 | 1.0′10-2 | 40 |
20 | 4-氨基-m-甲酚 | 8.0′10-3 | 32 | 2.5′10-2 | 100 |
21 | 2-氨基-3-羟基吡啶 | 1.3′10-2 | 52 | 4.0′10-2 | 160 |
22 | N,N-双（2-羟乙基）-p-苯二胺硫酸盐 | 2.5′10-2 | 100 | 7.5′10-2 | 300 |
23 | p-甲基氨基苯酚硫酸盐 | 1.0′10-2 | 40 | 3.0′10-2 | 120 |
24 | 4-硝基-o-苯二胺 | 1.5′10-2 | 60 | 5.0′10-2 | 200 |
25 | 2,6-二氨基吡啶 | 1.5′10-2 | 60 | 5.0′10-2 | 200 |
26 | N,N-二乙基-p-苯二胺硫酸盐 | 2.5′10-2 | 100 | 7.5′10-2 | 300 |
27 | 6-羟基吲哚 | 3.0′10-3 | 12 | 1.0′10-2 | 40 |
28 | 4-氯雷琐辛 | 5.0′10-3 | 20 | 1.5′10-2 | 60 |
29 | 2,7-萘二酚 | 3.0′10-3 | 12 | 1.0′10-2 | 40 |
30 | N-苯基-p-苯二胺 | 2.5′10-3 | 10 | 8.0′10-3 | 32 |
31 | 1,5-萘二酚 | 5.0′10-3 | 20 | 1.5′10-2 | 60 |
32 | 1-萘酚 | 3.0′10-3 | 12 | 1.0′10-2 | 40 |
4 3 试剂和材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。
3.1 无水乙醇。
3.2 甲醇，色谱纯。
3.3 乙腈，色谱纯。
3.4 亚硫酸氢钠。
3.5 磷酸溶液（1+9）：吸取磷酸（ρ20=1.69g/mL）10mL，加水90mL。
3.6 磷酸盐混合溶液：称取十二水合磷酸氢二钠1.8g、磷酸二氢钾2.8g和庚烷磺酸钠（C7H15SO3Na）1.0g，用水稀释至1L，混匀，配制成含庚烷磺酸钠（1g/L）的磷酸盐缓冲液，加入磷酸溶液（3.5），调节pH至6，0.45μm微孔滤膜过滤。
3.7 染料类化合物标准储备溶液（ρ（染料成分）=10g/L）：称取染料对照品约100mg（精确至0.1mg）于10mL容量瓶中，以2g/L亚硫酸氢钠水溶液 + 无水乙醇（3.1）=1+1的混合溶液定容至10mL，配成约10g/L的单标溶液。以下几种物质在上述溶剂中的溶解性较差，分别采取如下措施：甲苯-2,5-二胺硫酸盐和2-氯-p-苯二胺硫酸盐2种物质直接用2g/L亚硫酸氢钠水溶液溶解并定容；甲苯-3,4-二胺直接用无水乙醇（3.1）定容；2-硝基-p-苯二胺和4-硝基-o-苯二胺需将称样量减至25mg，再用无水乙醇（3.1）定容，配成约2.5g/L的单标溶液。储备液保存于0℃～4℃冰箱中，最多使用2天。
5 4 仪器
4.1 高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器。
4.2 分析天平，感量为0.0001g。
4.3 分析天平，感量为0.001g。
4.4 精密pH计，精度0.01。
4.5 超声波清洗器。
4.6 离心机。
4.7 涡旋混合仪。
6 5 测定步骤
5.1 样品处理
称取样品约0.5g（精确至0.001g）于10mL具塞比色管中，加无水乙醇（3.1）+ 水=1+1的混合溶液至刻度，涡旋1min，冰浴超声提取15min。浑浊溶液可取适量5000rpm离心5min，取上清液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液作为待测溶液，并尽快测定。
5.2 测定
5.2.1 色谱参考条件
色谱柱：RP-AMIDEC16柱（250mm×4.6mm，5μm）或等同柱；
色谱保护柱：RP-AMIDEC16保护柱（20mm×4.0mm，5μm）或等同柱；
流动相1：乙腈（3.3）+ 磷酸盐混合溶液（3.6）=10 + 90；
流动相2：甲醇（3.2）+ 磷酸盐混合溶液（3.6）=10 + 90；
流动相3：乙腈（3.3）+ 磷酸盐混合溶液（3.6）=40 + 60；
流量：1.0mL/min；
检测器：二极管阵列检测器；
检测波长：280nm；
柱温：25℃。
5.2.2 校准曲线的制备
参照色谱图1~色谱图3，对32种禁限用染料成分进行分组，并根据分组情况，分别移取适量染料类化合物标准储备溶液（3.7）于10mL容量瓶中，用无水乙醇（3.1）稀释至刻度，配成500mg/L的混合标准溶液。各取混合标准溶液适量，用无水乙醇（3.1）稀释，配成10mg/L、25mg/L、50mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L共6个浓度的混合标准系列。标准系列应于使用前配制。
取各标准系列5μL注入高效液相色谱仪，分别采用3种流动相进行分析，记录各色谱峰面积，绘制校准曲线。32种禁限用染料成分在流动相1和流动相2中的保留时间参考附录B。
5.2.3 样品测定
在设定色谱条件下，取待测溶液5μL注入高效液相色谱仪，分别采用3种流动相体系进行分析。色谱图检出的物质，经与该物质对照品的保留时间和紫外光谱图比较确证后，根据峰面积，从校准曲线上查得相应组分的质量浓度。若待测溶液中染料成分的质量浓度超过了校准曲线线性范围的上限，需对待测溶液进行适当稀释。
注：实际操作过程中，可参考附录B中32种禁限用染料成分在流动相1和流动相2中的保留时间，并结合色谱分离情况和样品中染料成分的不同，对32种染料成分进行合理分组，使各染料成分获得完全分离。若染料成分间不能达到基线分离，可对色谱条件进行适当调整，如降低流速或降低有机相比例等。
7 6 平行实验
按以上步骤，做两份样品的平行测定。在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的10%。
8 7 结果计算
式中：w（染料成分）—— 染发类化妆品中染料成分的质量分数，%；
r—— 从校准曲线上查得的待测样液中染料成分的质量浓度，mg/L；
V—— 样品定容体积，mL；
m—— 样品取样量，g；
D—— 稀释倍数（不稀释则取1）。
9 8 回收率和精密度
32种禁限用染料成分的提取回收率在82%～115%之间，方法回收率在86%~ 114%之间，相对标准偏差在1.1%～9.9%之间。
10 9 色谱图
图1 第一组染料混合标准溶液色谱图，流动相1
1.p-苯二胺；2.p-氨基苯酚；3. 甲苯-2,5-二胺硫酸盐；4.m-氨基苯酚；5.o-苯二胺；6. 2-氯-p-苯二胺硫酸盐；7. o-氨基苯酚；8. 间苯二酚；9. 2-硝基-p-苯二胺；10. 甲苯-3,4-二胺；11. 4-氨基-2-羟基甲苯；12. 2-甲基雷琐辛；13. 6-氨基-m-甲酚；14. 苯基甲基吡唑啉酮；15. N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺HCl；16. 4-氨基-3-硝基苯酚
图2 第二组染料混合标准溶液色谱图，流动相2
1.m-苯二胺；2. 2,4-二氨基苯氧基乙醇HCl；3. 氢醌；4. 4-氨基-m-甲酚；5. 2-氨基-3-羟基吡啶；6. N,N-双（2-羟乙基）-p-苯二胺硫酸盐；7.p-甲基氨基苯酚硫酸盐；8. 4-硝基-o-苯二胺；9. 2,6-二氨基吡啶；10. N,N-二乙基-p-苯二胺硫酸盐
图3 第三组染料混合标准溶液色谱图，流动相3
1. N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺HCl；2. 苯基甲基吡唑啉酮；3. 6-羟基吲哚；4. 4-氯雷琐辛；5. 2,7-萘二酚；6.N-苯基-p-苯二胺；7. 1,5-萘二酚；8. 1-萘酚
11 10 说明
32种禁限用染料成分信息表见附录A， 32种禁限用染料成分保留时间参考数据见附录B。
12 附录A
32种禁限用染料成分信息表
序号 | INCI名 | 中文名称 | 纯度/% |
1 | p-Phenylenediamine | p-苯二胺 | ≥95 |
2 | p-Aminophenol | p-氨基苯酚 | ≥97 |
3 | Toluene-2,5-diamine sulfate | 甲苯-2,5-二胺硫酸盐 | ≥98 |
4 | m-Aminophenol | m-氨基苯酚 | ≥98 |
5 | o-Phenylenediamine | o-苯二胺 | ≥98 |
6 | 2-Chloro-p-phenylenediamine sulfate | 2-氯-p-苯二胺硫酸盐 | ≥97 |
7 | o-Aminophenol | o-氨基苯酚 | ≥98 |
8 | Resorcinol | 间苯二酚 | ≥98 |
9 | 2-Nitro-p-phenylenediamine | 2-硝基-p-苯二胺 | ≥95 |
10 | Toluene-3,4-diamine | 甲苯-3,4-二胺 | ≥97 |
11 | 4-Amino-2-hydroxytoluene | 4-氨基-2-羟基甲苯 | ≥98 |
12 | 2-Methylresorcinol | 2-甲基雷琐辛 | ≥98 |
13 | 6-Amino-m-cresol | 6-氨基-m-甲酚 | ≥98 |
14 | Phenyl methyl pyrazolone | 苯基甲基吡唑啉酮 | ≥98 |
15 | N,n-Diethyltoluene-2,5-diamine HCl | N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺HCl | ≥97 |
16 | 4-Amino-3-nitrophenol | 4-氨基-3-硝基苯酚 | ≥98 |
17 | m-Phenylenediamine | m-苯二胺 | ≥95 |
18 | 2,4-Diaminophenoxyethanol HCl | 2,4-二氨基苯氧基乙醇HCl | ≥95 |
19 | Hydroquinone | 氢醌 | ≥99 |
20 | 4-Amino-m-cresol | 4-氨基-m-甲酚 | ≥98 |
21 | 2-amino-3-hydroxypyridine | 2-氨基-3-羟基吡啶 | ≥97 |
22 | N,N-Bis（2-hydroxyethyl）-p- phenylenediamine sulfate | N,N-双（2-羟乙基）-p-苯二胺硫酸盐 | ≥97 |
23 | p-Methylaminophenol sulfate | p-甲基氨基苯酚硫酸盐 | ≥99 |
24 | 4-Nitro-o-phenylenediamine | 4-硝基-o-苯二胺 | ≥98 |
25 | 2,6-diaminopyridine | 2,6-二氨基吡啶 | ≥98 |
26 | N,n-Diethyl-p-phenylenediamine sulfate | N,N-二乙基-p-苯二胺硫酸盐 | ≥99 |
27 | 6-Hydroxyindole | 6-羟基吲哚 | ≥98 |
28 | 4-Chlororesorcinol | 4-氯雷琐辛 | ≥98 |
29 | 2,7-Naphthalenediol | 2,7-萘二酚 | ≥98 |
30 | N-Phenyl-p-phenylenediamine | N-苯基-p-苯二胺 | ≥98 |
31 | 1,5-Naphthalenediol | 1,5-萘二酚 | ≥95 |
32 | 1-Naphthol | 1-萘酚 | ≥99 |