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不稳定血红蛋白

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1 拼音

bú wěn dìng xuè hóng dàn bái

2 英文参考

UHb

unstable hemoglobin

3 概述

不稳定血红蛋白是血红蛋白病的一种类型。国内已发现的不稳定血红蛋白有十余种。目前常用于鉴别不稳定血红蛋白的方法有三种。

4 不稳定血红蛋白的医学检查

4.1 检查名称

不稳定血红蛋白

4.2 分类

临床血液检查 > 红细胞

4.3 化验取材

血液

4.4 不稳定血红蛋白的测定原理

(1)热不稳定试验:不稳定Hb在体外经加热后加速变性沉淀。由加温后血红蛋白溶液浓度的减低可以计算出被沉淀的不稳定Hb含量。

(2)异丙醇试验:异丙醇是一种非极性化合物,可使血红蛋白内部非极性的氢键结合减弱,从而血红蛋白的稳定性减低。正常血红蛋白加入异丙醇孵育于37℃ 40min以后才出现沉淀,而不稳定血红蛋白孵育5min即出现沉淀,故可用以鉴定不稳定血红蛋白。

(3)红细胞变性珠蛋白小体检查:不稳定血红蛋白与氧化还原染料煌焦油蓝共同孵育后,可形成变性的珠蛋白小体(Heinz小体)贴于红细胞膜附近,又称为红细胞包涵体

4.5 试剂

(1)热不稳定试验:

①0.1mol/L Tris缓冲液:(配制方法见异丙醇试验)。

②氰化高铁血红蛋白稀释液,取NaHCO30.1g,KCN 5mg及高铁氰化钾20mg溶于100ml蒸馏水中。

(2)异丙醇试验:

①0.1mol/L Tris缓冲液(pH7.4):取三羟甲基氨基甲烷1.21g溶于20ml蒸馏水中。以0.1mol/LHCl校正pH达7.4(约需0.1mol/LHCl 70~80ml),加蒸馏水到100ml,密封冰箱保存

②17%(V/V)异丙醇溶液:取异丙醇17ml于100ml容量瓶中,再加pH7.4 Tris缓冲液至刻度。加盖密封,冰箱可存1周。

(3)红细胞变性珠蛋白小体检查:10g/L煌焦油蓝:煌焦油蓝1g,柠檬酸钠0.4g溶解于100ml生理盐水中,过滤,冰箱中可保存2个月。

4.6 操作方法

(1)热不稳定试验:

①取新鲜制备的溶血液0.5ml,加入0.1mol/LTris缓冲液2.5ml中,混匀后,取1.5ml于另1试管中。

②将两试管均加塞,其一放于冰箱做对照,另一放于50℃水浴中,为测定管,计时。

③2h后同时取出两管,将加热管用自来水冲冷后,两管同时离心。3000r/min,10min。

④取试管3支分别标明空白、对照、测定。各加入5ml氰化高铁血红蛋白稀释液。然后于空白管加入Tris缓冲液0.1ml,对照,测定管分别加入离心

后的相应溶血液0.1ml,室温放置20min。

⑤以空白调零,分别在540nm测两管吸光。

⑥计算:

沉淀血红蛋白%=

(2)异丙醇试验:

①将放于37℃水浴中预热5min的装有17%异丙醇溶液1ml的小试管取出,立即加入0.1ml血红蛋白液,混匀后再放入水浴中,立即计时,于5、10、20、30、40min分别观察沉淀产生。

②结果判断

(++++)5min出现沉淀,20min出现大块沉淀。

(+++) 5min出现混浊。到40min出现粗颗粒。

(++) 10min出现混浊,到40min出现细颗粒。

(+) 20min出现混浊,40min出现极细颗粒。

(-) 温育40min后仍透明或稍混浊而无颗粒。

(3)红细胞变性珠蛋白小体检查:

①取煌焦油蓝试剂0.5ml置小试管内,加新鲜血3~4滴,混匀,加塞,置37℃温箱中孵育。

②在10min,1h,24h各取出一滴制成薄血片,立即风干,油镜下观察。

③在油镜下计数500个红细胞,记录出现蓝色颗粒状折光小体的红细胞数目,求出阳性百分率。

4.7 正常值

加热法:<5%。

异丙醇法:阴性

红细胞变性球蛋白小体法:<1%。

4.8 化验结果临床意义

升高(或阳性):不稳定血红蛋白病

4.9 附注

(1)热不稳定试验:

①被检Hb要新鲜制备。陈旧Hb可转变为高铁Hb。会出现假阳性

②保温时间要准确,温度要恒定以免出现假阳性。

(2)异丙醇试验:

①17%异丙醇溶液配制后放置不宜过久,否则易出现假阴性

②血红蛋白液须新鲜。如保存较久,出现高铁血红蛋白,可形成假阳性。

③试剂要预热,严格控制温度以防假阳性。

④高HbF及G-6-PD缺乏的标本亦可出现阳性。

(3)红细胞变性珠蛋白小体检查:

①本试验亦可用静脉凝血做。

②孵育时间与不稳定血红蛋白性质有关。一般1~2h即可出现明显的蓝色球形折光小体,但也有的不稳定血红蛋白需更长时间的孵育。才出现典型的变性珠蛋白小体。

③制片后应及时计数,存放过久,则红细胞内变性珠蛋白小体消失。如不能及时计数,可存放于干燥器或37℃温箱。

④煌焦油蓝染色后不能用伊红-美蓝染色液复染,复染后可减少计数结果。

⑤变性珠蛋白小体需与网织红细胞鉴别。前者包涵体呈较大圆形,均匀,弥散沉淀,整个红细胞基质消失,而且需培育10min以上才逐渐清晰。而网织红细胞在血液与煌焦油蓝混合后数分钟内显示出网状沉淀,红细胞基质完整。

4.10 相关疾病

不稳定血红蛋白病

相关文献

开放分类:化验及医学检查临床血液检查红细胞
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参与讨论
  • 评论总管
    2019/4/22 20:45:48 | #0
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本页最后修订于 2013年2月27日 星期三 0:04:48 (GMT+08:00)
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