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• RAPD操作要点

  一、材料　　　　不同来源的DNA(50ng/ul)。　　二、设备　　PCR仪，PCR管或硅化的0.5mleppendorf管，电泳装置。　　三、试剂　　1、随机引物(10mer)(5umol/L)：购买成品。　　2、Taq酶：购买成品。　　3、10xPCR缓冲液：配方见第八章。　　4、MgCl2：25mmol/L。　　5、dNTP：每种2.5mmol/L。　　四、操作步骤：　　1.在25ul反应体

• PhosphateAssay

  ,and80.Usethescrewtopglasstubes.2.Drythesamplesandstandardsundernitrogenevaporator(Rm209),andadd150ul70%perchloricacid.Oxidizethesamplesandstandardsinaheatingblock(180C,Rm218)overnightorfor1houriftheh

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• 石蜡DNA提取

  甲苯。重复3-4次，观察管壁是否光滑。若有蜡质残存，需继续脱蜡。　　2.剃度酒精水化：100%1ML，室温30分钟，10000×3分钟，去上清；95%；75%；50%。　　3.消化：1×SSC500UL，洗涤沉淀，12000×3M离心。干燥沉淀后加石蜡消化液400UL，20mg/ml的PK20ul；55度消化120小时，至第四天，补加PK10ul。　　4.消化后见液体清亮，肉眼见组织较少。将其转入

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• 病毒RNA提取

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• 气相色谱法检测食用油溶剂残留

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• GC检测食用油溶剂残留

  0℃柱温箱温度：85℃（1min）20℃/min130℃(2min)2、试剂：N-N-二甲基乙酰胺（DMA）：吸取1毫升放入100毫升洗好干燥的带胶塞的玻璃瓶中，在50摄氏度放置30分钟，取液上气1ul注入气相色谱仪在10分钟内无干扰即可使用。如有干扰用超声波处理30分钟。3、六号溶剂标准溶液：称取洗净干燥的10毫升气化瓶的质量为A，瓶中放入比气化瓶体积少0.5毫升的DMA密塞后称量为B（M5），

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• RNA提取实验方法流程

  清（小心别丢了沉淀），75%乙醇1.0ml洗涤（用DEPC水新配制）后，7500rpm，5min，4℃离心。　　5）、去上清，点离，用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10分钟，DEPC处理水20-30ul加入，中枪打匀，55-60℃水浴10分钟溶解总RNA，测OD值。　　6）、电泳。　　3.2从总RNA中分离mRNA（OligotexmRNAMiniKit,Cat.no.：70022,QIAGEN）

• 外周血DNA提取技术

  小心挑取云絮状的DNA，转入另一1.5ml离心管中，加70%乙醇0.2ml，5000g离心5min洗涤DNA，弃上清，去除残留的盐。重复一次。室温挥发残留的乙醇，但不要让DNA完全干燥。加TE液20ul溶解DNA,置于摇床平台缓慢摇动，DNA完全溶解通常需12-24小时。　　5.DNA的浓度测定及纯度判定：取DNA溶液用TE液做适量稀释，以TE液作空白对照，在紫外分光光度计上读取A260和A280

• GC法检测食用油溶剂残留

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• 单纯疱疹病毒疫苗研究进展

  有害。HSV-R7020病毒株具有复制能力,被最先用于临床试验。该病毒在动物体内具有复制能力,并有较弱的神经潜伏性。第二代产品RAV-9395株敲除了γ34.5(与干扰素抵抗和神经毒性相关的基因)和UL55、UL56基因,但仍有微弱的潜伏感染能力。AD-472株又敲除了US10、US12和UL43.5基因,不再具有潜伏能力。另一种具有复制能力的HSV-2病毒株着重于增强免疫原性,除敲除γ34.5基

• 用基因芯片技术检测拉米夫定相关性HBV变异

  481)；下游引物5‘-CCTTGACATACTTTCCAATCAATA-3‘(nt997～974)。引物由申友公司合成。2血清HBVDNA的提取：分别取治疗后12个月、21个月的血清标本100ul，加入300ulTES(含10mMTris-Hcl；10mMEDTA，0.1%SDS；200ug/ml蛋白酶K)65℃冰浴3小时，酚/氯仿抽提，取上清，加入1/10体积5M的NaAC(PH52)，

• 小鼠组织切片免疫组化实验

  苯，酒精（100％，95％），EDTA抗原修复工作液（pH8.0，稀释50倍使用），0.5MTris-NaCl(TBS)pH7.4（稀释10倍使用）,DAB显色液（临用前配制：试剂盒A、B、C各50ul，于1ml水中混匀）。方法1.石蜡切片置60℃烘箱中烘烤过夜2.二甲苯中脱蜡，梯度酒精入水(无水乙醇，95％酒精)，浸泡于蒸馏水中待用3.抗原修复取500mlEDTA抗原修复工作液于1000ml烧杯

• 用高效液相色谱法分析植物组织中多胺含量技术的探讨

  ml/min，柱温30℃，Breeze色谱工作软件。2.3材料处理1.0~2.0g，加入4ml预冷的5%高氯酸（v/v）冰浴研磨，冰浴浸提1小时后离心（15，000g，30分钟，4℃）。取上清500ul加入10ml带盖塑料离心管，加入7ul苯甲酰氯，再加入1ml2MNaOH，涡漩20s后在37℃水浴反应20min。加入2ml饱和NaCl溶液，混匀后用2ml乙醚萃取，取1ml醚相真空干燥，用100u

• 感受态细胞的制备

  1、受体菌的培养从平板上挑取新的活化后的E.coliTG1单菌落，接种于5mlLB液体培养基中，37℃下振荡培养12小时左右，取50ul培养液转入5mlLB中，37℃振荡培养1~1．5小时至对数生长期OD600=0．5左右。2、感受态细胞的制备⑴、将培养液1．5ml转入离心管中，冰上放置20分钟。⑵、置于4℃，5000rpm离心5分钟，倒尽上清。⑶、添加一半菌液体积（750ul）预冷的50mM的C

• 液相色谱仪-进样阀的清洗

  动相充分冲洗样品定量管，这样可以保证有较高的精确度，而且不用另外再冲洗样品定量管。这种有色谱仪器控制的冲洗显然要比手动冲洗的更好些。注意：冲洗需要的流动相体积至少为所进样品的10倍。例如，如果取20ul样品至100ul的定量管中，而流动相此时的流速为1ml/min，则需要在进样位置上至少保持12s，即：20ul×10/1000ul·min-1＝0.2min＝112s。当样品定量管经过充分的冲洗后，

• 乌司他丁和抑肽酶影响体外循环小儿炎性反应及心肌损伤

  （CABG）及心脏移植等情况。中华麻醉学杂志三月第三期刊登一项研究，研究者选择拟行CPB的先天性心脏病患儿90例，随机分成6组，每组15例：对照组（C组，不使用乌司他丁及抑肽酶）、小剂量乌司他丁组（UL组，乌司他丁1万U/kg）、大剂量乌司他丁组（UH组，乌司他丁2万U/kg）、小剂量抑肽酶组（AL组，抑肽酶7．5万KIU/kg）、大剂量抑肽酶组（AH组，抑肽酶15万KIU/kg）、小剂量乌司他丁

• 乌司他丁和抑肽酶对小儿炎性反应及心肌损伤的影响

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• 第二节　CMV基因组结构

  -76nm，其分子量为150-160×103KDa，不同种属的CMvDNA分子量基本相同。各毒株DNA有80%同源序列，通过限制性酶谱可区分不同毒株。CMV与其他疱疹病毒一样，具有1个长的单一序列（UL）及1个短的单一序列（US）。UL和US的相连处及两端均为DNA重复序列。UL约115×103KDa，约占16%。UL两端的两个反向重复序列约占90%；US两端的两个反向重复序列约占2%。由于UL及

• 自动进样器的技术原理

  led-andPartial-LoopInjection)一般的六通进样阀都可以用完全装液或部分装液的方式进样。使用完全装液法时进样体积取决于样品环的体积，图2a是这种方法的示意。例如，阀上装了20ul的样品环，样品被注入环中直到多余的样品从废液口排出，当转子转到inject位置时样品环中的样品就进入柱子。由于流体动力学的原因，分析者至少需要注入两倍于样品环体积的样品才能得到均匀的填充。如果要改变

• 聚合酶链反应检测汉坦病毒感染的实验研究及临床应用

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• 嗅鞘细胞移植部位与剂量的选择对陈旧性脊髓损伤患者60例神经恢复的影响

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• 色谱网址精选

  站，链接很多有用的网址，包括屯子杂志，数据库等等)12http://www.cde.psu.edu/chromatography/default．html(气相色谱培训班)13http://www.ul1.chemistry.uakon.edu/chensep(各种分离技术)14http://www.u11.chemistry.uakron.edu／chemsep/chromtheory(色谱理论

• 气相色谱在使用时应注意哪些

  手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡（吸样时要慢、快速排出再慢吸，反复几次，10ul注射器金属针头部分体积0.6ul，有气泡也看不到，多吸1-2ul把注射器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡，（指10ul注射器，带芯子注射器平感觉）进样速度要快（但不易特快），每次进样保持相同速度，针尖到汽化室中部开始注射样品。安装色谱柱1.安装拆卸色谱柱必须在常温下。2.填充柱有卡套密封和垫片密封，

• 分子生物学试验方法探讨四－PCR常见问题

  Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。　　　　反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。　　　　物理原因：变性对PCR

• 气相色谱检测溶剂残留

  酰胺（DMA）做为稀释剂，也是一种屏蔽剂。溶液浓度Cmg/ml。　　3、空白实验以压榨毛油做为空白测定。　　标准曲线称取25g油样（压榨油）6个，分别加入标准溶液，0，20，40，60，80，100ul每个进三针取平均值绘制曲线计算线形范围。将标样的浓度从2ul，1ul，0.5，0.2ul.依次降低，测定最后无法检测到的溶剂可计算最低检出限.在已知样品中注入六号溶剂油标样，依次做五个测定回收率。　

• 临床基因扩增检验实验室基本设置标准

  如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。　　二、工作区域仪器设备配置标准　　（一）试剂储存和准备区　　1、2-8C和-15C冰箱　　2、混匀器　　3、微量加样器（覆盖1-1000ul）　　4、移动紫外灯（近工作台面）　　5、消耗品：一次性手套、一次性吸水纸、耐高压处理的离心管和加样器吸头（带滤心）　　6、专用工作服和工作鞋　　7、专用办公用品　　（二）标本制备区　　1、2-8C

• 气相色谱使用时应该注意的部分事项

  手不要拿注射器的针头和有样品部位、不要有气泡（吸样时要慢、快速排出再慢吸，反复几次，10ul注射器金属针头部分体积0.6ul，有气泡也看不到，多吸1-2ul把注射器针尖朝上气泡上走到顶部再推动针杆排除气泡，（指10ul注射器，带芯子注射器平感觉）进样速度要快（但不易特快），每次进样保持相同速度，针尖到汽化室中部开始注射样品。安装色谱柱1.安装拆卸色谱柱必须在常温下。2.填充柱有卡套密封和垫片密封，

• 转移电泳技术

  .00g甲叉双丙烯酰胺0.40g0.37Mol/LTris—HCl（pH8.3）50ml此为丙烯酰胺母液，过滤后4℃保存备用。丙烯酰胺母液8.30mlN、N、N、N—四甲基乙二胺（DEMED）250ul10％SDS0.25ml0.375Mol/LpH8.8Tris－HCl16.45ml混合即为10％分离胶。丙烯酰胺母液1.30mlTEMED15.00ul10％SDS0.10ml0.125Mol/L

• 气相色谱-串联质谱法测定血液中乙基葡萄糖醛酸苷

  G溶液：将100ug/ml的EtG标准甲醇溶液用甲醇稀释得20.0ug/ml的EtG工作液。内标EtG-d5工作液。　　　　1.3样品前处理：　　　　取血液0.10ml置于1.5ml离心管中，加入5ul内标EtG-d5工作液和0.90ml乙腈，涡旋混合，以离子半径6cm，10000r/min，离心5min，转移上清液至另一离心管中，6cm，10000r/min，离心5min，转移上清液至另一离心管

• NorthernBlots技术

  胶和紫外交联后的膜，在紫外灯下检测转移效率。(避免太长的紫外曝光时间)　　12．将膜在-20℃保存。　　7.探针的制备　　1．在1.5ml离心管中配制以下反应液：　　模板DNA(25ng)　　　　1ul　　RandomPrimer2ul　　灭菌水11ul　　总体积：14ul　　2．95°C加热3分钟后，迅速放置于冰冷却5min。　　3．在离心管中按下列顺序加入以下溶液：　　10×Buffer2.5

• NorthernBlot技术

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• 分子生物学实验常用试剂配置

  分的用量0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L贮液,100mmol/LMgCl2:1ml1mol/L贮液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L贮液,2mmol/LATP:200ul100mmol/L贮液,5mmol/L盐酸亚精胺（可选）:50ul1mmol/L贮液,0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）:0.5ml10mg/mL贮液,水:2.25ml将配制好的缓冲液分装成小

• 双波长薄层扫描法测定乌灵胶囊中多糖的含量

  取多糖，针对其含量我们采用双波长薄层色谱扫描法对其进行测定，现报道如下。　　1仪器与试剂　　仪器：CS930型双波长飞点式薄层扫描仪（日本岛津）；旋转蒸发仪RE52A型（上海亚荣生化仪器厂）；5ul微量进样器（上海医用激光仪器厂）。　　试剂：无水葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所）；乌灵胶囊0.33mg/粒批号（20040212，20050414，20050617，浙江佐力药业股份有限公司）

• RFLP和RAPD技术

  胶与膜之间有气泡发生,加盖滤时也不应有气泡发生。　　　　4、有时用一种限制性内切酶不能发现RFLP的差异，这时应该试用另一种酶。　　第三节RAPD技术　　　　一、材料　　不同来源的DNA(50ng/ul)。　　二、设备　　PCR仪，PCR管或硅化的0.5mleppendorf管，电泳装置。　　三、试剂　　1、随机引物(10mer)(5umol/L)：购买成品。　　2、Taq酶：购买成品。　　3、1

• Broadlytargetedhumancytomegalovirus-specificCD4+andCD8+Tcellsdominatethememorycompartmentsofexposedsubjects

  Vseropositivecohort.Notethat40ORFs(19%)wererecognizedbyCD4+Tcellsinatleast4/33subjects,andfiveORFs(UL55,UL83,UL86,UL99,andUL122)wererecognizedbymorethanhalfofthestudysubjects.ForCD8+Tcells,33ORFs(15.5

• 盐酸洛美沙星注射液

  的噔明液体。　　鉴别：（1）取.作为供试品溶液；另取盐酸洛美沙星对照品适量，用水制成每1ml中含5mg的溶液，作为对照品溶液、照薄层包谱法（中国药1995年版二部附录VB）试验，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷一无水甲醇一浓氯溶液一乙腈（4∶4∶2∶1）为展开剂，展开后晾干，置紫外光灯（365nm）下检视，供试品溶液所显主斑点的颜色与位置应与对照品溶液的主斑点相同。

• 硫酸长春地辛

  l溶解后，溶液应澄清。其他生物碱取本品，加水溶解成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加水稀释成每1ml中含0.05mg的溶液，作为预试溶液。照含量测定项下的方法，取预试溶液10ul，注入液相色谱议，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20～25%；再取供试溶液10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的两倍，量取各杂质峰面积的和，不得大于总峰面积的5%，

• HAART开始后早期病毒学控制影响HIV患者后果

  2046例患者之后得出该结论。根据在开始HAART后头6至18个月中可检测到的病毒负荷的时间比例，将这些患者分成3组。在72个月中，无可检测到的病毒负荷的患者的平均CD4+细胞计数每月增加3.3个/ul。可检测到的病毒负荷在1%至99%范围内的那些患者，相应的CD4+细胞计数增加2.9个/ul，从未有过未检测到的病毒负荷的患者，该数字为2.6个/ul。在72个月时，这3组患者HIVRNA水平低于4

• Lowry–ProteinDetermination

  rozenat-20°C.Preparestandardsbydilutingthestocksolutionwithdistilledwaterasfollows:stocksolut.,ul01.252.56.2512.52562.5125250water,ul500499498494488475438375250Prot.conc.,ug/ml01020501002005001000

• 气相色谱法测定水中苯、甲苯、二甲苯和硝基苯分析方法

  色谱仪使用FID检测器，6201涂山梨醇色谱填充柱对苯和硝基苯能够进行分离定性和定量分析。　　1、部分　　1.1仪器与试剂　　仪器为气相色谱仪，配置FID检测器，手动进样，配置工作站，注射器：0.5uL、1uL、5uL、10uL。　　标准物：苯（色谱纯）　　甲苯（色谱纯）　　二甲苯（色谱纯）　　硝基苯（色谱纯）　　水：蒸馏水　　1.2原理：苯、甲苯、二甲苯和硝基苯混合物通过色谱柱的分离，用氢火焰离

• 环境检测（TVOC）检测方法

  色谱分析，以保留时间定性，以峰面积定量。2．仪器设备2.1Tenax-TA管(内含0.1g、0.2g或0.4gTenax-TA)；2.2QC-2A大气采样仪或TMP1500电子控时采样器；2.310uL微量注射器；2.4HL800型二次热解吸仪；2.5GC9800型气相色谱仪(内含长50m，内径0.53mm，涂覆二甲基聚硅氧烷的毛细管柱，液膜厚度3.00μm，氢火焰离子化FID检测器，外接HL-3

• 缅甸佤帮北部萨尔温江流域5例三日疟病例报告

  现：有效线显示有效、恶性疟位置显示阴性,非恶性疟位置显示阳性。经涂制的厚薄血片带回实验室用吉氏染液染色根据其形态特征镜检后，确诊为三日疟原虫。患者体温及疟原虫无性体密度分别为37.8℃、2100个/ul血。　　病例2，叶某，女性，年龄45岁；2007年11月15日在巡诊时用疟疾快速诊断卡(美卡)检测被发现；有效线显示有效；恶性疟位置显示阴性,非恶性疟位置显示阳性。经涂制的厚薄血片带回实验室用吉氏染

• 饲料中盐酸克伦特罗（β-兴奋剂）的测定

  液。4.7HPLC专用试剂4.7.1.1贮备液，200μg/mL：1000mg盐酸克伦特罗溶于0.02mol/L盐酸溶液并定容至50mL。4.7.1.2工作液，200：用微量移液器移取贮备注液500uL以002盐酸溶液稀翻滚释至50。4.7.1.3标准系列：用微量移液器移取工作液25、50、100、500、1000uL，以0.02盐酸溶液稀释至2，该标准系列的相应浓度为：0.025、0.050、0

• 饲料中盐酸克伦特罗（β-兴奋剂）的测定

  液。4.7HPLC专用试剂4.7.1.1贮备液，200μg/mL：1000mg盐酸克伦特罗溶于0.02mol/L盐酸溶液并定容至50mL。4.7.1.2工作液，200：用微量移液器移取贮备注液500uL以002盐酸溶液稀翻滚释至50。4.7.1.3标准系列：用微量移液器移取工作液25、50、100、500、1000uL，以0.02盐酸溶液稀释至2，该标准系列的相应浓度为：0.025、0.050、0

• 常见实验用溶液的配制方法

  gCl2100mmol/LDTT2mmol/LATP5mmol/L盐酸亚精胺（可选）0.5mg/mlBSA（组分V）（可选）水5ml1mol/L贮液1ml1mol/L贮液1ml1mol/L贮液200ul100mmol/L贮液50ul1mmol/L贮液0.5ml10mg/mL贮液2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20℃。100mmol/LdNTP溶液（dNTPsolutions）可以购

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