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1 概述

胆红素血红蛋白肌红蛋白等含铁卟啉化合物在体内的代谢产物,其来源有三条途径:①80%~90%来自衰老死亡的红细胞;②15%~20%来自骨髓合成血红蛋白过程中的副产品;③其余来自肌红蛋白及其他非血红蛋白正铁血红素。血清中胆红素有两类,即未结合胆红素(又称游离胆红素或间接胆红素)和结合胆红素(又称直接胆红素),在肝脏作用下,胆红素与葡萄糖醛酸结合成水溶性的胆红素单葡萄糖苷酸和胆红素二葡萄糖苷酸。当肝细胞损伤、胆管阻塞、红细胞破坏增加或寿命缩短时,胆红素代谢常发生异常,临床上即出现黄疸。胆红素代谢检查主要用于了解有无黄疸、程度,并鉴定其类型。

2 TBIL的别名

红细胞血清总胆红素

3 TBIL医学检查

3.1 检查名称

TBIL

3.2 分类

血液生化检查 > 色素测定

3.3 化验取材

血液

3.4 TBIL的测定原理

(1)改良咖啡因(J-G)法:血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应,产生偶氮胆红素;在同样条件下,游离胆红素需有加速剂使胆红素氢键破坏后与重氮试剂反应。咖啡因、苯甲酸钠为加速剂,醋酸钠维持pH同时兼有加速作用。抗坏血酸(或叠氮钠)破坏剩余重氮反应,终止结合胆红素测定管的偶氮反应,防止游离胆红素的缓慢反应。加入碱性酒石酸钠使最大吸光度由530nm转移到598nm,非胆红素的黄色色素及其他红与棕色色素产生的吸光度降至可略而不计,使灵敏度特异性增加。最后形成的绿色是由蓝色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。

(2)胆红素氧化酶法:胆红素氧化酶(BOD)催化胆红素氧化,生成胆绿素,后者进一步氧化生成淡紫色化合物,在450nm波长比色,吸光度的下降值(△A)与血清胆红素浓度呈正比。

3.5 试剂

(1)改良咖啡因(J-G)法:

①咖啡因-苯甲酸钠试剂:称取无水醋酸钠41.0g(或CH3COONa·3H2O 63.0g),苯甲酸钠38.0g,乙二胺四乙酸二钠(EDT-ANa2)0.5g,溶于约500ml蒸馏水中,再加入咖啡因25.0g,搅拌使溶解(加入咖啡因后不能加热溶解),用蒸馏水补足至1000ml,混匀。用滤纸过滤,置棕色瓶,室温保存

②碱性酒石酸钠溶液:称取氢氧化钠75.0g,酒石酸钠(Na2 C4H4O6·H2O)263.0g,用蒸馏水溶解并补足至1000ml,混匀。置塑料瓶中,室温保存。

③5.0g/L亚硝酸钠溶液:称取亚硝酸钠(NaNO2)5.0g,用蒸馏水溶解并稀释到100ml,混匀,置棕色瓶中,冰箱保存,稳定不少于3个月。作10倍稀释成0.5g/L,贮冰箱稳定不少于2周。

④5.0g/L对氨基笨磺酸溶液:称取对氨基苯磺酸(NH2C6H4SO3H·H2O)5.0g/L,溶于800ml蒸馏水中,加入浓盐酸15ml,用蒸馏水补足至1000ml。

⑤重氮试剂:临用前取5.0g/L亚硝酸钠溶液0.5ml和5.0g/L对氨基苯磺酸溶液20ml混合。

⑥5.0g/L叠氮钠溶液:称取叠氮钠0.5g,以蒸馏水溶解并稀释至100ml。

⑦胆红素标准液

A.一般用游离(非结合)胆红素配制标准液,因此配制标准液的稀释剂需含白蛋白。可用牛血清白蛋白(40g/L)或人血清代替人血清白蛋白。后者方法如下:收集无溶血、无黄疸、无脂浊的新鲜血清,混合,必要时可用滤菌器过滤。取过滤后的血清1ml,加入24ml新鲜生理盐水,混合。在414nm波长,1cm光径,以生理盐水调零点,其吸光度应小于0.100;在460nm的吸光度应小于0.04。

B.配制标准液的胆红素须符合下列标准:纯胆红素的氯仿溶液,在25℃条件下,光径10±0.01mm,波长453mm,摩尔吸光系数应在60700±1600范围内;改良J-G法偶氮胆红素的摩尔吸光系数应在74380±866。

C.胆红素贮存标准液,171μmol/L(10mg/dl):准确称取符合要求的胆红素10mg,加入1ml二甲亚砜,用玻璃棒搅拌,使成混悬液。加入0.05mol/L碳酸钠溶液2ml,使胆红素完全溶解,移入100ml容量瓶中,以稀释用血清洗涤数次并入容量瓶中,缓慢加入0.1mol/L盐酸2ml,边加边摇(勿用力,以免产生气泡)。最后以稀释用血清补足至100ml。配制过程中应尽量避光,贮存容器用黑纸包裹。置4℃冰箱3天内有效,但要求配后尽快作标准曲线。

(2)胆红素氧化酶法:

①0.1mol/L Tris-HCl缓冲液(pH 8.2:称取Tris 1.211g,胆酸钠172.3mg,SDS432.6mg,溶于90ml蒸馏水中,在室温(25~30℃)用1mol/L盐酸调节pH至8.2(约用6ml),再加蒸馏水至100ml,置冰箱保存。此液含4mmol/L胆酸钠、150mmol/L SDS

②BOD溶液:如系冻干品,按说明书要求复溶,但复溶后冰箱保存不宜过长(约可保存1周)。如系液体(可能含有甘油),置冰箱或冰室可保存较长时间,BOD贮存液的酶活性一般在数千至1~2万U/L,BOD工作液的酶活性可按反应液中BOD终浓度达0.3~1.0U/ml计算。

③胆红素标准液:342μmol/L:按胆红素测定J-G法配制,或市售合乎要求的标准液。

3.6 操作方法

(1)改良咖啡因(J-G)法:按表1操作。

充分混匀后,波长600nm,对照管调零,读取各管吸光度;或用蒸馏水调零,读取测定管及对照管吸光度,用测定管吸光度与对照管吸光度之差(AU-AC),在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。

(2)胆红素氧化酶法:按表2进行操作。

加入BOD溶液后立即混匀,置37℃水浴5min,用分光光度计,在450或460nm波长,蒸馏水调零,读各管吸光度。用于对照管的比色杯与非对照管的比色杯不得混用。

3.7 正常值

血清总胆红素:2~20μmol/L(0.1~1.2mg/dl)。

胆红素氧化酶法、改良J-G法(重氮法) 脐带早产儿:<34μmol/L (<2.0mg/dl) 足月儿:<34μmol/L (<2.0mg/dl) 0~1天:早产儿:<137μmol/L (<8.0mg/dl) 足月儿:<103μmol/L (<6.0mg/dl) 3~5天:早产儿:<274μmol/L (<16.0mg/dl) 足月儿:<205μmol/L (<12.0mg/dl) 其后:早产儿:<34μmol/L (<2.0mg/dl) 足月儿:3.4~17.1μmol/L (0.2~1.0mg/dl) 成人:1.7~17.1μmol/L (0.1~1.0mg/dl)

3.8 化验结果临床意义

(1)判断有无黄疸及其程度:STB17.1~34.2μmol/L为隐性黄疸;34.2~171μmol/L为轻度黄疸;171~342μmol/L为中度黄疸;>342μmol/L为重度黄疸。

(2)判断黄疸的性质:完全阻塞性黄疸为342~513μmol/L,不完全阻塞为171~266.8μmol/L,肝细胞性黄疸为17.1~119.7μmol/L,溶血性黄疸为<85.5μmol/L。

(3)胆红素分类鉴别黄疸类型:总胆红素和非结合胆红素增高,见于溶血性黄疸、血型不合的输血反应恶性疟疾及新生儿黄疸等,以非结合胆红素增高为主;总胆红素和结合胆红素增高为阻塞性黄疸,如胆石症肝癌、胰头癌等,以结合胆红素增高为主;总胆红素、结合胆红素、非结合胆红素均增高为肝细胞性黄疸,如急性黄疸性肝炎慢性活动性肝炎肝硬化和急性黄色肝坏死等。

(4)用于肝细胞损害程度和预后判断:在肝脏疾病中,胆红素浓度明显升高,常反映肝细胞损伤严重,预后不良。但少数亚急性肝炎可无黄疸出现。胆汁淤积性肝炎,血清胆红素甚高,而肝细胞受损程度较轻。

(5)有助于了解新生儿溶血症的严重程度,制定合理的治疗方案。

(6)再生障碍性贫血慢性肾炎贫血患者STB减低。

3.9 附注

(1)改良咖啡因(J-G)法:

①本法测定血清总胆红素,在10~37℃条件下不受温度变化的影响。呈色在2h内非常稳定。

②本法灵敏度高(摩尔吸光系数为74380±866 L·mol-1·cm-1)。

③轻度溶血对本法无影响,但严重溶血时可使测定结果偏低。其原因是血红蛋白与重氮试剂反应形成的产物可破坏偶氮胆红素,还可被亚硝酸氧化为高铁血红蛋白干扰吸光度测定。

④叠氮钠能破坏重氮试剂,终止偶氮反应。凡用叠氮钠作防腐剂质控血清,可引起偶氮反应不完全,甚至不呈色。

⑤胆红素对光敏感,标准及标本均应尽量避光。

⑥脂血及色素对测定有干扰,应尽量取空腹血。

⑦标本对照管的吸光度一般很接近,若遇标本量很少时可不作标本对照管,参照其他标本对照管的吸光度。

⑧胆红素大于171μmol/L的标本可减少标本用量,或用生理盐水稀释血清后重做。

⑨结合胆红素测定,至今无候选参考方法,国内也无推荐方法。方法不同,反应时间不同,结果相差很大。时间短,非结合胆红素参与反应少,结合胆红素反应也不完全;时间长,结合胆红素反应较完全,但一部分非结合胆红素也参与反应。这是一个很难权衡的问题,在没有结合胆红素标准液的情况下,问题更复杂。

Doumas参照Michaelsson及Gambino的方法,在血清中先加入50mmol/L盐酸,再加入重氮试剂,反应10min,即防止非结合胆红素反应,又使结合胆红素反应较完全。

Doumas采用的方法:50mmol/L盐酸0.8ml,血清0.2ml,混匀。再加重氮试剂0.4ml,混匀,室温置10min,加入32g/L抗坏血酸0.1ml(或20g/L NaN2 0.1ml),混匀。最后依次加入碱性酒石酸钠溶液1.2ml及咖啡因试剂1.6ml。用非结合胆红素作标准液时,标准管操作顺序同J-G法总胆红素测定,但在重氮试剂反应后要加入抗坏血酸,最后也要加50mmnl/L盐酸。

(2)胆红素氧化酶法:

①BOD浓度可根据所用制品在测定高胆红素血清标本或342μmol/L标准的反应速度,即能否在5min反应完全而确定,文献报道BOD在反应液中终浓度为0.18~1.14U/ml。

②在反应体系中存在足够活力的BOD前提下,反应时间均为5min(37℃),也即反应5min时△A达最大值。建议根据所用的试剂盒用高浓度的血清标本或342μmol/L标准液进行反应时间试验确定之。

③溶血标本可使测定结果偏低,其程度与Hb含量及胆红素有关,Hb<1.0g/L,影响不大,Hb>1.5g/L时,胆红素测定结果明显偏低。

④本法在pH 7.3~9.0之间酶活力的pH曲线变化幅度不大,但最适pH为8.0~8.2。

⑤本法操作简单、特异性高,线性范围大,至少在513μmol/L以下呈线性。

3.10 相关疾病

黄疸、疟疾、胆石症、肝硬化、再生障碍性贫血

相关文献

开放分类:血液生化检查化验及医学检查色素测定
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  • 评论总管
    2020/10/29 18:59:02 | #0
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本页最后修订于 2013年2月25日 星期一 9:31:19 (GMT+08:00)
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