T4/T8比值

目录

1 拼音

T4/T8bǐ zhí

2 英文参考

T4/T8 ratio

3 概述

CD4/CD8细胞在免疫应答过程中起着十分重要的调节作用。临床上检测患者外周血中T淋巴细胞亚群或TH/TS比值,有助于了解机体的免疫状态和某些疾病的发病机制和辅助诊断。

4 T4/T8比值的医学检查

4.1 检查名称

T4/T8比值

4.2 分类

免疫学检查 > 细胞免疫测定

4.3 T4/T8比值的测定原理

人T细胞表面有多种表面抗原标记,分别代表不同的细胞亚群,CD3抗原几乎存在于所有成熟T细胞上,CD4抗原存在于Ti/Th细胞上,CD8抗原存在Ts/Tc细胞上。利用杂交瘤技术得到小鼠抗人T细胞CD4、CD8分子的单克隆抗体,将这些单克隆抗体标记上荧光素(如FITC),直接与人淋巴细胞反应,或将这些单克隆抗体(第一抗体)先与细胞表面相应分子特异性结合,再用荧光素标记的兔或羊抗鼠抗体(第二抗体)和结合在T细胞膜表面的鼠单克隆抗体结合,在荧光显微镜下观察或用流式细胞计分析,即可检测出相应膜分子阳性的细胞。

4.4 试剂

(1)聚蔗糖-泛影葡胺分层液(d=1.077±0.001)。

(2)FITC标记羊或兔抗鼠IgG(FITC-IgG F/P为1~3)。

(3)单克隆抗体:抗CD4、CD8单克隆抗体。

(4)FITC标记单克隆抗体:FITC-CD3、FITC-CD4、FITC-CD8

(5)FITC标记小鼠IgG(FITC-mIgG)。

(6)Hank液(含5%NBS及0.1%NaN3)。

(7)5ml塑料管、荧光显微镜。

(8)荧光抗体保存液。

4.5 操作方法

(1)直接免疫荧光法

①取肝素抗凝外周血,用淋巴细胞分层液获得单个核细胞,Hank液配成(1~2)×106细胞/ml。

②取1ml细胞悬液加入5ml塑料管中,离心2000r/min,2min,弃上清。

③加FITC-CD4、FITC-CD8各20μl,对照管加mIgG-FITC,4℃反应30min。

④Hank液洗2次,2000r/min,2min。

⑤流式细胞计分析。

(2)间接免疫荧光法

①分离PBMC,调至(1~2)×106细胞/ml。

②取1ml细胞悬液于5ml塑料管中,离心2000r/min,2min,弃上清。

③加抗CD4、CD8单克隆抗体各100μl,对照管加抗体稀释液或正常小鼠IgG,4℃反应30min。

④Hank液洗2次,离心2000r/min,2min,弃上清。

⑤各加50μl FITC-IgG,4℃反应30min。

⑥Hank液洗2次,2000r/min,2min。

⑦滴片,荧光显微镜观察或流式细胞计分析。

4.6 正常值

2~3∶1。

4.7 化验结果临床意义

(1)降低:肿瘤、病毒感染、真菌感染、免疫缺陷症。

(2)升高:自身免疫性和变态反应性疾病。

4.8 附注

同B细胞检测。另外,由于间接免疫荧光技术所用的羊或兔抗鼠荧光抗体与部分白细胞表面发生非特异结合,以及Fc受体的非特异细胞反应和多克隆荧光抗体的结合放大效应,从而造成非特异阳性荧光细胞增多。而对FITC直标单克隆抗体来说,抗体成分、性质和结构上完全均一,只要不使蛋白质-FITC复合物上带上过多的电荷,就不会产生非特异吸附。目前国外基本上是用直接免疫荧光法,流式细胞计来分析T细胞亚群的,由于该仪器价格昂贵,国内尚未普及应用。因而对一般临床实验室来说,用免疫荧光显微镜也能开展这项工作。

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