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SmIg

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1 概述

体液免疫功能检测是实验室估评个体体液免疫功能的一类检验。体液免疫功能检测根据体液免疫的基本过程,包括B淋巴细胞检测、Ig检测以及抗体产生功能的检测等。

2 SmIg的别名

B淋巴细胞表面标志

3 SmIg医学检查

3.1 检查名称

SmIg

3.2 分类

免疫学检查 > 细胞免疫测定

3.3 化验取材

血液

3.4 SmIg的测定原理

人类B细胞表面带B淋巴细胞表面标志,每一个B细胞表面带有不同类的Ig,即IgMIgDIgGIgA、或IgE。如用荧光法标记的抗人IgM、IgD、IgG、IgA及IgE抗体,分别同标记的荧光抗体染色,则荧光抗体与B细胞表面相应的B淋巴细胞表面标志结合,在荧光显微镜下观察,凡与荧光标记抗体结合的细胞细胞膜呈现荧光,为B淋巴细胞表面标志阳性细胞,即B细胞,同时用普通光源照明,计数该视野淋巴细胞总数,根据发荧光和不发荧光细胞的计数,可求得带各类B淋巴细胞表面标志细胞的百分数。把这些数相加为血液中B细胞的百分数。

3.5 试剂

(1)异硫氰荧光素(FITC)标记的兔抗人IgG,兔抗人IgM抗体,F/P在分子比值为1~2。

(2)Hank液(含1.0g/L。NaN3),调pH至7.4。

(3)聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分层液(比重1.077)。

(4)50%PBS缓冲甘油

3.6 操作方法

(1)取肝素凝血2ml,加等量Hank液混匀,重层于分层液上,2000r/min,离心20min。取出淋巴细胞层,加Hank液,洗3次,1200r/min,离心10min,调整淋巴细胞浓度为1×107/ml,取0.1ml分装两管。

(2)将淋巴细胞悬液再用Hank液洗1次,弃去上清,用滤纸吸去管内壁剩余液体,分别加兔抗人IgG及抗人IgM荧光抗体2滴(约0.08ml),轻摇后,放37℃温箱30min。

(3)从温箱取出用Hank液洗两次,1000r/min离心10min,小心吸去全部上清,将管底沉淀的细胞加入50% PBS缓冲甘油1滴,混匀后取1滴加入载玻片上,覆以盖玻片,置荧光显微镜下观察。

3.7 正常值

IgM均值11.2±6.0%;IgG均值7.5±3.3%。

3.8 化验结果临床意义

B细胞数量的降低与体液免疫缺陷有关,B细胞数升高则与B细胞恶性增生等有关。

3.9 附注

(1)荧光抗体试剂中存在凝聚IgG的影响,凝聚IgG可以和B细胞表面Fc受体结合出现假阳性,因此,为避免出现凝聚IgG须注意

①不能使用F/P克分子比值过高的荧光抗体,一般以1~3为宜。

②含低浓度蛋白的荧光抗体低温保存稳定,一般不应低于2mg/ml。

③低温保存的荧光抗体不可反复冻融,使用前150000r/min离心30min,除去凝聚物。

(2)活的淋巴细胞作免疫荧光染色时,在全部试剂中(标记抗体、Hank液等)均需加NaN3,以限制细胞膜的流动性。否则会出现帽状荧光和吞噬现象,荧光细胞实际数下降。

(3)用抗IgG荧光抗体染色时,可由于标本中含有抗原一抗体(IgG型)免疫复合物与B细胞表面Fc受体结合,表现为荧光阳性。为此,有人建议用荧光标记抗F(ab)2抗体染色,以排除Fc受体被着染。

(4)如果当天不能观察标本,则将细胞悬于荧光抗体保存液中,4℃存放,次日计数。

近年来由于抗B细胞表面特异分子(CD19、CD20等)单克隆抗体的问世,因而人们开始倾向于应用荧光素标记的抗CD19或CD20的单克隆抗体直接与外周血淋巴细胞反应;或用抗CD19和CD20的单克隆抗体(第一抗体)先与淋巴细胞反应,再与荧光素标记的兔或羊抗鼠IgG(第二抗体)结合,荧光显微镜下计数或流式细胞术来计数外周血B淋巴细胞。

相关文献

开放分类:化验及医学检查免疫学检查细胞免疫测定
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  • 评论总管
    2019/10/16 11:03:26 | #0
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