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GB/T 33420—2016 压力蒸汽灭菌生物指示物检验方法

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1 拼音

GB/T 33420—2016 yā lì zhēng qì miè jūn shēng wù zhǐ shì wù jiǎn yàn fāng fǎ

2 英文参考

Evaluation standard of biological for moist heat sterilization processes

3 基本信息

ICS 11.080

C 50

中华人民共和国国家标准 GB/T 33420—2016《压力蒸汽灭菌生物指示物检验方法》(Evaluation standard of biological for moist heat sterilization processes)由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局、中国国家标准化管理委员会于2016年12月30日发布,自2017年07月01日起实施。

4 前言

本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。

本标准由中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会提出并归口。

本标准起草单位:中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所、中国人民解放军疾病预防控制所、山东新华医疗器械股份有限公司、中国医学科学院协和医院、山东利尔康消毒科技股份有限公司、3M中国有限公司、杭州鲁沃夫货物进出口有限公司。

本标准主要起草人:张流波、张剑、姚楚水、张青、王妍彦、沈瑾、黄靖雄、朱晓明、朱汉泉、史绍毅、马玲、班海群。

5 标准正文

压力蒸汽灭菌生物指示物检验方法

5.1 1 范围

本标准规定了压力蒸汽灭菌生物指示物的检验方法。

本标准适用于压力蒸汽灭菌生物指示物的检验。

5.2 2 规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB 18281.1 医疗保健产品灭菌 生物指示物 第1部分:通则

GB/T 24628 医疗保健产品灭菌 生物与化学指示物 测试设备

消毒技术规范(2002年版)卫生部

5.3 3 术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

生物指示物 biological indicator;BI

对指定条件下的特定灭菌程序具有一定抗力,并装在内层包装中可供使用的染菌载体

3.2

载体  carrier

试验微生物的支持物。

3.3

存活时间  survival time;ST

在规定的条件下暴露于杀菌因子,试验的生物指示物中微生物存活的最长时间。

3.4

杀灭时间  killing time;KT

测定生物指示物抗力时,受试样本经杀菌因子作用后,全部无菌生长的最短作用时间。

3.5

D值  D value

设定的暴露条件下,杀灭特定试验微生物总数的90%所需的时间。

3.6

存活曲线  survlvor curve

在固定的灭菌因子作用下,微生物的存活情况与暴露变化的关联曲线。

3.7

生物指示物抗力测试仪  biological indicator evaluator resistometer

产生限定条件下灭菌过程中物理化学变化规定组合,以测量抗力的专用设备。

5.4 4 检验指标与方法

5.4.1 4.1 抗力

5.4.1.1 4.1.1 菌种

用于制作压力蒸汽灭菌生物指示物的菌株为嗜热脂肪杆菌芽孢(Geobacillusstearothermophilus

ATCC7953或SSI K31)或被证明具有本标准所要求的同等性能的微生物。

5.4.1.2 4.1.2 菌量

回收菌量大于等于1×105CFU/片或大于等于1×105CFU/支,对于成品的指示物,载体回收的菌量与说明书上的菌量误差在一50%~+300%之间,悬液回收的菌量与说明书上的菌量误差在±35%。测定菌量时,应最少测试4个样本,具体检测方法参见附录A。

5.4.1.3 4.1.3 D值

测试抗力时应使用生物指示物抗力测试仪,生物指示物抗力测试仪要求见GB/T 24628。在121℃时,D值的要求:D值大于或等于1.5 min,对于成品的指示物,测试的D值应在说明书上的D值±20%的范围内。应至少使用下列2种方法进行测试:

a)存活曲线法测试D值,参见附录B;

b)部分阴性法测试D值,参见附录C;

c)验证法测试D值,将a)或者b)测试出的D值和4.1.2的回收菌量的平均数带入式(1)和式(2),计算出ST值和KT值。参照附录D进行验证:

ST≥(logN0-2)×D值    ………(1)

KT≤(logN0+4)×D值    ………(2)

式中:

N0——每批生物指示物的回收菌量的平均数。

5.4.1.4 4.1.4 存活时间与杀灭时间

在121℃时,ST值的要求:大于或等于4.5 min;KT值的要求:小于或等于24 min。

5.4.2 4.2 载体的要求

符合GB 18281.1的要求。

5.4.3 4.3 恢复培养基的要求

5.4.3.1 4.3.1 恢复培养基应满足下列要求:

a)  使10 CFU~100 CFU的微生物恢复生长;

b) 使损伤的微生物恢复生长;

c)  经过压力蒸汽灭菌后不会产生抑制微生物生长的物质。

5.4.3.2 4.3.2 恢复培养基按以下方法检验:

每个样本的恢复培养基中,接种10 CFU~100 CFU的嗜热脂肪杆菌芽孢(ATCC7953),同时设置阴性对照和阳性对照,培养至规定时间后观察有无嗜热脂肪杆菌芽孢生长(一般观察培养基的颜色变化)。如果恢复培养基有菌生长,并且阴性对照无菌生长和阳性对照有菌生长,判断恢复培养液合格。

5.4.4 4.4  稳定性试验

取包装完好的同批次生物指示物放置于制造商建议的保存条件下,存放至标签和说明书规定的有效期限,取出再次进行评价,生物指示物应符合4.1、4.2和4.3的要求。

6 附录

6.1 附录A(资料性附录)活菌培养计数方法

A.1  取含有10 mL TPS(0.1%胰蛋白胨的生理盐水溶液)的无菌试管,加入适量无菌玻璃珠,将计数菌片投入试管,用电动混合器混合,到菌片被完全打碎,制成菌悬液。

A.2 将试管按需要数量分组排列于试管架上,每管加入4.5 mL TPS。各组由左向右,逐管标上10-1、10-2、10-3……等。

A.3 将菌悬液用电动混匀器混合20 s,或在手掌上用力振打80次,随即吸取0.5 mL加至10-1管内。

A.4 将10-1管依前法用电动混匀器混合20 s,或在手掌上用力振打80次,混匀,再吸取出0.5 mL加入10-2管内。如此类推,直至最后一管。必要时,还可作某稀释度的1:1或1:4稀释。

A.5 选择适宜稀释度试管(以预计生长菌落数每平板为15 CFU~300 CFU者为宜),吸取其中混合均匀的悬液1.0 mL加于无菌平皿内。每一稀释度接种2个平皿。一般需接种2个~3个不同稀释度。

A.6 将40℃~45℃熔化的嗜热脂肪杆菌芽孢恢复培养基参见《消毒技术规范(2002年版)》,倾注于已加入样液的平皿中,每平皿15 mL~20 mI_。

A.7 将平皿盖好,即刻轻轻摇动混匀,平放。待琼脂凝固后,翻转平皿使底向上,置56℃±2℃恒温培养箱内培养。

A.8 培养至72 h,计数菌落数。一般以肉眼观察,必要时用放大镜检查。以每平板菌落数在30 CFU~300 CFU的稀释度为准记录结果。

A.9 根据稀释倍数和接种量计算每毫升菌液巾或每一菌片(染菌载体)上的平均菌落数。 A.10 菌液计数从A.3步骤开始操作。

6.2 附录B(资料性附录)存活曲线法测试D值

B.1 随机抽取50个样本。

B.2 根据不同的暴露温度设置10个暴露时间点,每个时间点测试5个样本,最短的暴露时间可以设定为0 s,最长的暴露时间使菌量减少到小于或等于初始菌量的0.01%。

B.3 测试之前,首先对生物指示物抗力测试仪进行预热。

B.4 按照生物指示物抗力测试仪操作说明书的流程进行操作,分别对10个暴露时间分别处理。

B.5 处理完毕,参照附录A对各组样本随机抽取3个进行活菌计数

B.6 用所得的全部存活菌数的常用对数值,对时间(min)作图,用最小二乘法进行回归分析,确定最佳线性曲线。回归分析时不应包括原先菌落数0.510g范围内的存活数据点。计算所得直线斜率的负倒数值,即等于以分钟表示的指定暴露条件下的D值,同时所得线性曲线相关系数应不小于0.8。

6.3 附录C(资料性附录)部分阴性法计算D值

C.1  随机选取120个样本。分成6组,每组20个样本。

C.2 生物指示物抗力测试仪参数设置:

a)  暴露温度设置121℃;

b) 暴露时间至少为6个时间点,至少1个时间点全部有菌生长,至少2个时间点部分有菌生长,至少2个时间点全部无菌生长。

C.3 对6组样本分别暴露。

C.4 暴露完成后将6组生物指示物在56℃±2℃温度下,按照说明书要求培养到规定时间,记录阴性和阳性结果。当最短暴露时间点全部为阳性,最长暴露时间全部为阴性,并且中间至少2组有部分样本阳性,试验结果有效,带入式(C.1)和式(C.2)计算D值。

C.5  Limited Spearman-Karber法(LSKP),达到无菌生长平均时间的计算见式(C.1):

捕获.PNG

D值的计算见式(C.2):

捕获.PNG

式中:

UHSK——达到无菌生长平均时间,单位为秒(s);

UK——首次显示所有样本无菌生长的暴露时间,单位为秒(s);

d——暴露时间的固定间隔,单位为秒(s);

n——每组的样本量,单位为个;

ri——每次暴露无菌样本数量,单位为个;

N0——回收菌落数,单位为CFU;

0.2507——计算系数。

6.4 附录D(资料性附录)验证法测试D值

6.4.1 D.1 ST值验证

将50个试验样本放入压力蒸汽灭菌生物指示物抗力测试仪中,作用浓度为2.3 mg/L±0.4 mg/L,在50℃±0.5℃时,暴露时间设定为计算出的ST值,暴露完成后,将50个生物指示物样本取出,置于56℃±2℃培养至说明书规定时间。若全部有菌生长,则计算的ST值通过验证;若有样本无菌生长,则计算的ST值没有通过验证。

6.4.2 D.2 KT值验证

将50个试验样本放入压力蒸汽灭菌生物指示物抗力测试仪中,作用浓度为2.3 mg/L±0.4 mg/L,在50℃±0.5℃时,暴露时间设定为计算出的KT值,暴露完成后,将50个生物指示物样本取出,置于56℃±2℃培养至说明书规定时间。若全部无菌生长,则计算的KT值通过验证;若有样本有菌生长,则计算的KT值没有通过验证。

6.4.3 D.3 判定

计算的ST值和KT值都通过验证,则判定测出的D值有效。

相关文献

开放分类:消毒灭菌中华人民共和国国家标准
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  • 评论总管
    2020/5/29 8:29:00 | #0
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本页最后修订于 2017年11月29日 星期三 23:40:46 (GMT+08:00)
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