1 拼音
GB 8270—2014 shí pǐn ān quán guó jiā biāo zhǔn shí pǐn tiān jiā jì tián jú táng gān
中华人民共和国国家标准 GB 8270—2014《食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷》由中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会于2015年01月28日发布，自2015年07月28日起实施，代替GB 8270—1999《食品添加剂 甜菊糖甙》。
2 前言
本标准代替GB 8270—1999《食品添加剂 甜菊糖甙》。
本标准与GB 8270—1999相比，主要变化如下：
——标准名称修改为“食品安全国家标准 食品添加剂 甜菊糖苷”；
——修改了标准结构；
——修改了结构式、分子式和相对分子质量等相关内容；
——取消了理化指标中的等级要求，统一指标；
——修改了鉴别试验；
——修改了理化指标中甜菊糖苷含量、灼烧残渣和干燥减量指标；
——删除了理化指标中甜度、比旋光度、比吸光度和重金属指标；
——增加了铅、甲醇和乙醇指标。
食品安全国家标准
食品添加剂 甜菊糖苷
3 1 范围
本标准适用于以甜叶菊（Stevia Rebaudiana Bertoni）干叶为原料，经提取、精制而得的食品添加剂甜菊糖苷。主要糖苷为甜菊苷和瑞鲍迪苷A，其他已知糖苷包括瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷及甜菊双糖苷。
4 2 分子式、结构式和相对分子质量
4.1 2.1 主要糖苷的分子式
甜菊苷：C38H60O18
瑞鲍迪苷A：C44H70O23
4.2 2.2 9种糖苷的结构式
9种糖苷的压合物名称、R1位取代基和R2位取代基见表1。
表1 9种糖苷的压合物名称、R1位取代基和R2位取代基
化合物名称 | |||
中文名称 | 英文名称 | R1位取代基 | R2位取代基 |
甜菊苷 | stcvioside | β-Glc | β-Glc-β-Glc（2→1） |
瑞鲍迪苷A | rebaudioside A | β-Glc | β-Glc-β-Glc（2→1） β-Glc（3→1） |
瑞鲍迪苷B | rcbaudioside B | H | β-Glc-β-Glc（2→1） β-Glc（3→1） |
瑞鲍迪苷C | rebaudioside C | β-Glc | β-Glc-α-Rha（2→1） β-Glc（3→1） |
瑞鲍迪苷D | rcbaudioside D | β-Glc-β-Glc（2→1） | β-Glc-β-Glc（2→1） β-Glc（3→1） |
瑞鲍迪苷F | rcbaudioside F | β-Glc | β-Glc-β-Xyl（2→1） β-Glc（3→1） |
表1（续）
化合物名称 | |||
中文名称 | 英文名称 | R1位取代基 | R2位取代基 |
杜克苷A | dulcoside A | β-Glc | β-Glc-α-Rha（2→1） |
甜茶苷 | rubusoside | β-Glc | β-Glc |
甜菊双糖苷 | stcviolbioside | H | β-Glc-β-Glc（2→1） |
4.3 2.3 主要糖苷的相对分子质量
甜菊苷：804.88（按2007年国际相对原子质量）
瑞鲍迪苷A:967.03（按2007年国际相对原子质量）
5 3 技术要求
5.1 3.1 感官要求
应符合表2的规定。
表2 感官要求
项目 | 要求 | 检验方法 |
色泽 | 白色至浅黄色 | 取适量试样置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自 |
状态 | 粉末或晶体 | 然光线下观察其色泽和状态 |
5.2 3.2 理化指标
应符合表3的规定。
表3理化指标
项目 | 指标 | 检验方法 |
甜菊糖苷含量（以干基计，w）/% ≥ | 85 | 附录A中A.4 |
灼烧残渣（w）／% ≤ | 1 | GB 5009.4 |
干燥减量（w）／% ≤ | 6 | GB 5009.3直接干燥法a |
铅（Pb）/（mg/kg） | 1 | GB 5009.12 |
总砷（以As计）／（mg/kg） ≤ | 1 | GB 5009.11 |
甲醇／（mg/kg） ≤ | 200 | |
乙醇／（mg/kg） ≤ | 5000 | A.4 |
a 干燥温度和时间分别为105℃±2℃和2h。 | ||
注：商品化的甜菊糖苷产品应以符合本标准的甜菊糖苷为原料，可添加用于标准化日的的淀粉等食品原料。 | ||
6 附录A 检验方法
6.1 A.1 一般规定
本标准所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682中规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602、GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。
6.2 A.2 鉴别试验
A.2.1 甜菊苷和瑞鲍迪苷A试验
在甜菊糖苷含量试验中，试样溶液的液相色谱图中甜菊苷和瑞鲍迪苷A两个主峰应与混合标准溶液的色谱图相对应。
A.2.2 试样溶液的pH
称取1g试样，溶于100 mL水中，用酸度计测定试样溶液的pH在4.5～7.0。
6.3 A.3 甜菊糖苷含量的测定
6.3.1 A.3.1 方法一
A.3.1.1 试剂和材料
A.3.1.1.1 乙腈：色谱纯。
A.3.1.1.2 磷酸二氢钠：色谱纯。
A.3.1.1.3 磷酸：色谱纯。
A.3.1.1.4 水：GB/T 6682—2008中规定的一级水。
A.3.1.1.5 乙腈水溶液：乙腈和水的体积比为30：70。
A.3.1.1.6 磷酸钠缓冲液（pH 2.6）：称取1.20 g磷酸二氢钠（NaH2PO4），溶于800 mL水中，用磷酸调节pH至2.6。
A.3.1.1.7 甜菊苷标准品：甜菊苷含量（质量分数，以干基计）≥99.0%。
A.3.1.1.8 瑞鲍迪苷A标准品：瑞鲍迪苷A含量（质量分数，以干基计）≥99.0%。
A.3.1.1.9 其他7种糖苷标准品：瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷。
6.3.1.1 A.3.1.2 仪器和设备
高效液相色谱仪：配备紫外检测器，或其他等效的检测器。
6.3.1.2 A.3.1.3 参考色谱条件
A.3.1.3.1 色谱柱：C18反相色谱柱，250 mm×4.6 mm，粒径5μm；或其他等效的色谱柱。
A.3.1.3.2 流动相：乙腈：磷酸钠缓冲液=32：68。
A.3.1.3.3 流动相流速：1.0 mL/min。
A.3.1.3.4 检测波长：210 nm。
A.3.1.3.5 进样量：2μL～10μL。
A.3.1.3.6 柱温：40℃。
6.3.1.3 A.3.1.4 分析步骤
A.3.1.4.1 混合标准品溶液的制备
分别称取适量甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷标准品，置于同一个容量瓶中，用乙腈水溶液完全溶解后定容，得到混合标准品溶液。混合标准品溶液用于确定9种糖苷的相对保留时间。
A.3.1.4.2 标准溶液的制备
分别称取0.05 g甜菊苷标准品和瑞鲍迪苷A标准品，精确至0.001 g，分别置于50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到甜菊苷标准溶液和瑞鲍迪苷A标准溶液。
A.3.1.4.3 试样溶液的制备
称取0.05 g～0.1 g试样，精确至0.001 g，置于50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到试样溶液。
6.3.1.4 A.3.1.5 测定
在A.3.1.3参考色谱条件下，分别对混合标准品溶液、标准溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图相比较，以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷的峰面积及标准溶液色谱图中甜菊苷和瑞鲍迪苷A的峰面积。
6.3.1.5 A.3.1.6 结果计算
瑞鲍迪苷A含量（以干基计）的质量分数wa按式（A.1）计算：
式中：
mR——瑞鲍迪苷A标准溶液中瑞鲍迪苷A的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；
m——试样溶液中试样的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；
Aa——试样溶液色谱图中瑞鲍迪苷A的峰面积值；
AR——瑞鲍迪苷A标准溶液色谱图中瑞鲍迪苷A的峰面积值。
其他8种糖苷含量（以干基计）的质量分数wi按式（A.2）计算：
式中：
i——s、b、c、d、f、da、ru、sb，分别对应甜菊苷、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷；
ms——甜菊苷标准溶液中甜菊苷的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；
m——试样溶液中试样的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；
fi——i组分与甜菊苷的式量比值：1.00（甜菊苷）、1.00（瑞鲍迪苷B）、1.18（瑞鲍迪苷C）、1.40（瑞鲍迪苷D）、1.16（瑞鲍迪苷F）、0.98（杜克苷A）、0.80（甜茶苷）、0.80（甜菊双糖苷）；
Ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值；
As——甜菊苷标准溶液色谱图中甜菊苷的峰面积值。
由式（A.1）和式（A.2）计算得到9种组分的含量wa、ws、wb、wc、wd、wf、wda、wru和wsb，取各组分含量之和即为试样中甜菊糖苷含量。
6.3.2 A.3.2 方法二
6.3.2.1 A.3.2.1 试剂和材料
A.3.2.1.1 乙腈：色谱纯。
A.3.2.1.2 磷酸二氢钠：色谱纯。
A.3.2.1.3 磷酸：色谱纯。
A.3.2.1.4 水：GB/T 6682—2008中规定的一级水。
A.3.2.1.5 乙腈水溶液：乙腈和水的体积比为30：70。
A.3.2.1.6 磷酸钠缓冲液（pH 2.6）：称取1.20 g磷酸二氢钠（NaH2PO4），溶于800 mL水中，用磷酸调节pH至2.6，用水稀释至1000 mL。
A.3.2.1.7 甜菊苷标准品：甜菊苷含量（质量分数，以干基计）≥99.0%。
A.3.2.1.8 其他8种糖苷标准品：瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷和甜菊双糖苷。
6.3.2.2 A.3.2.2 仪器和设备
同A.3.1.2。
6.3.2.3 A.3.2.3 参考色谱条件
同A.3.1.3。
6.3.2.4 A.3.2.4 分析步骤
A.3.2.4.1 混合标准品溶液的制备
分别称取适量甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷标准品，置于同一个容量瓶中，用乙腈水溶液完全溶解后定容，得到混合标准品溶液。混合标准品溶液用于确定9种糖苷的相对保留时间。
A.3.2.4.2 标准溶液的制备
称取0.05 g甜菊苷标准品，精确至0.001 g，置于50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到甜菊苷标准溶液。A.3.2.4.3 试样溶液的制备称取0.05 g～0.1 g试样，精确至0.001 g，置于50 mL的容量瓶中，用乙腈水溶液溶解后稀释至刻度，得到试样溶液。
6.3.2.5 A.3.2.5 测定
在A.3.2.3参考色谱条件下，分别对混合标准品溶液、标准溶液和试样溶液进行色谱分析。将试样溶液的色谱图与混合标准品溶液的色谱图相比较，以确定试样溶液色谱图中各组分对应的峰。记录试样溶液色谱图中甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷的峰面积及标准溶液色谱图中甜菊苷的峰面积。
6.3.2.6 A.3.2.6 结果计算
9种糖苷含量（以干基计）的质量分数wi按式（A.3）计算：
式中：
i——s、a、b、c、d、f、da、ru、sb，分别对应甜菊苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、杜克苷A、甜茶苷、甜菊双糖苷；
ms——甜菊苷标准溶液中甜菊苷的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；
m——试样溶液中试样的质量（以干基计），单位为毫克（mg）；
fi——i组分与甜菊苷的式量比值：1.00（甜菊苷）、1.20（瑞鲍迪苷A）、1.00（瑞鲍迪苷B）、1.18（瑞鲍迪苷C）、1.40（瑞鲍迪苷D）、1.16（瑞鲍迪苷F）、0.98（杜克苷A）、0.80（甜茶苷）、0.80（甜菊双糖苷）；
Ai——试样溶液色谱图中i组分的峰面积值；
As——甜菊苷标准溶液色谱图中甜菊苷的峰面积值。
由式（A.3）计算得到9种组分的含量训ws、wa、wb、wc、wd、wf、wda、wru和wsb，取各组分含量之和即为试样中甜菊糖苷含量。
6.4 A.4 甲醇和乙醇的测定
6.4.1 A.4.1 试剂和材料
A.4.1.1 甲醇：色谱纯。
A.4.1.2 乙醇：色谱纯。
A.4.1.3 水：一级水。
6.4.2 A.4.2 仪器和设备
气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID）和顶空进样器。
6.4.3 A.4.3 参考色谱条件
A.4.3.1 色谱柱：键合聚乙二醇熔融石英毛细管柱（柱长为30 m，柱内径为0.25 mm，膜厚度为0.25 μm），或其他等效的色谱柱。
A.4.3.2 载气：氮气（纯度≥99.99%）。
A.4.3.3 载气流量：5.0 mL/min。
A.4.3.4 柱温：40℃保持5 min，以10℃/min升温至120℃，保持2 min，最后以16℃/min升温至200℃，保持5 min。
A.4.3.5 进样口温度：200℃。
A.4.3.6 检测器温度：250℃。
A.4.3.7 进样体积：1 mL。
A.4.3.8 分流比：1：50。
6.4.4 A.4.4 参考顶空条件
A.4.4.1 顶空瓶温度：80℃。
A.4.4.2 顶空瓶平衡时间：30 min。
6.4.5 A.4.5 分析步骤
6.4.5.1 A.4.5.1 空白溶液的制备
移取2 mL水，置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
6.4.5.2 A.4.5.2 标准溶液的制备
A.4.5.2.1 甲醇标准溶液的制备
称取0.1 g甲醇，精确至0.001 g，用水稀释后转移至一个1000 mL的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得100 mg/L的甲醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为50 mg/L、20 mg/L、10 mg/L、5 mg/L和2.5 mg/L的甲醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2 mL，分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
A.4.5.2.2 乙醇标准溶液的制备
称取0.1 g乙醇，精确至0.001 g，用水稀释后转移至一个100 mL的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得1000 mg/L的乙醇标准储备溶液。将该溶液配制成一系列浓度为750 mg/L、500 mg/L、200 mg/L、100 mg/L和50 mg/L的乙醇标准溶液。移取上述系列浓度溶液各2 mL，分别置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
6.4.5.3 A.4.5.3 试样溶液的制备
称取1.0 g试样，精确至0.001 g，用水溶解后转移至一个10 mL的容量瓶中，在室温下超声处理约3 min，加水稀释至刻度，摇匀。移取该溶液2 mL置于顶空瓶中，迅速压紧瓶盖，备用。
6.4.6 A.4.6 测定
在参考操作条件（A.4.3和A.4.4）下，分别对空白溶液、标准系列溶液和试样溶液进行测定，记录甲醇或乙醇的峰面积值。以标准系列溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值为y轴，以对应溶剂浓度（mg/L）为X轴，绘制标准曲线，得到甲醇标准曲线或乙醇标准曲线。根据试样溶液色谱图中甲醇或乙醇的峰面积值，从标准曲线求得试样溶液中甲醇或乙醇的浓度（mg/L）。
6.4.7 A.4.7 结果计算
甲醇或乙醇含量w以毫克每千克（mg/kg）计，按式（A.4）计算：
式中：
c——从标准曲线求得的试样溶液中甲醇或乙醇的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；
V——试样溶液的体积，单位为毫升（mL）；
m——试样的质量，单位为克（g）。
7 附录B 混合标准品溶液的参考色谱图
混合标准品溶液的参考色谱图见图B.1。
注：所测混合标准品溶液中，瑞鲍迪苷F的浓度约为0.1 mg/mL，其余组分的浓度为0.5 mg/mL。
图B.1 混合标准品溶液参考色谱示意图