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ANCA

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1 概述

ANCA(抗中性粒细胞胞浆抗体)是存在于血液中的一种自身抗体,现已证实该抗体是一组系统坏死血管炎血清标志抗体,对血管炎的诊断、分类、鉴别诊断以及预后评估都具有十分重要的意义。以下介绍间接免疫荧光检测法。

2 ANCA的别名

抗中性粒细胞胞浆抗体

3 ANCA的医学检查

3.1 检查名称

ANCA

3.2 分类

免疫学检查 > 自身抗体测定

3.3 ANCA的测定原理

系统性坏死性血管炎患者的血清中存在一种与中性粒细胞胞浆中的原始颗粒和溶酶体反应的自身抗体,用间接免疫荧光法可以检出。

3.4 试剂

(1)1.5%Dextran-T500生理盐水溶液

(2)羊抗人IgG的F(ab)2'荧光抗体。

(3)复染液:①%溴乙锭:溴乙锭1g加水100ml。②1%伊文斯蓝:伊文斯蓝1g加水100ml。

3.5 操作方法

(1)中性粒细胞的制备:取健康人肝素凝血加等量1.5% Dextran-T500生理盐水液混和,斜置室温46min,吸取上层血浆加在含淋巴细胞分离液的试管内,3000r/min离心10min,取沉淀在底部的中性粒细胞层,用冷蒸馏水溶解残留的红细胞1min后,加等量1.8%氯化钠恢复等渗,并用含0.5%人血清白蛋白的0.01mol/L PBS(pH值7.4)洗涤3次,每次静置10min后再以3000r/min离心5min,最后用同一溶液调中性粒细胞浓度为(4.5~5.5)×104/ml,取该细胞悬液涂成薄片,加无水乙醇置4℃固定5min,待自然干燥后,置-20℃备用。

(2)正式试验

①用0.01mol/L:PBS(pH值7.4)将被检血清作1∶20稀释后,滴加于上述细胞基质片上,并使铺展覆盖全部细胞涂片,放湿盒内置37℃温育30min后,用0.01mol/L PBS(pH值7.4)洗涤8次,每次10min,甩干。

②滴加适度稀释的羊抗人IgG的F(ab)2'荧光抗体,同法温育、洗涤、甩干。

③取1%溴乙锭200μl加于PBS(pH值7.4)100ml中,用以着染细胞核5min后,洗涤1次。

④取1%伊文斯蓝200μl加于PBS(pH值7.4)100ml中,用以复染细胞浆5min后,洗涤1次。

⑤滴加90%甘油-PBS液,加盖玻片封片固定,用荧光显微镜观察结果。

⑥结果判断,因具有抗原性的原始颗粒和溶酶体在中性粒细胞胞浆中有其不同的成分和分布特征,因此可呈现特殊的荧光类型,包括胞浆型(c抗中性粒细胞胞浆抗体),和细胞核周围型(p抗中性粒细胞胞浆抗体)两种。A.胞浆型:中性粒细胞胞浆呈均一弥漫亮绿色荧光,细胞核染暗红色,是为胞浆阳性。B.核周围型:中性粒细胞核周围有亮绿色荧光出现,为核周围型阳性。C.中性粒细胞胞浆呈淡红色,核着暗红色则为阴性

3.6 正常值

正常人血清为:阴性。

3.7 化验结果临床意义

韦格纳肉芽肿(UG)及多血管炎组患者由于病程进展较快易导致呼吸和肾功能衰竭,以往诊断主要靠典型的临床症状组织学特征。1982年Davies等人建立了本法,继而Wonde等又作了分型,从而提高该组疾病的诊断水平,且发现WG和多血管炎组患者该抗体阳性率明显高于其他自身免疫病。该抗体在该组疾病缓解期可呈滴度下降或转阴,故有助于疗效观察。

3.8 附注

凡发现细胞核周围型抗体阳性,应用HEP-2细胞法测定抗核抗体,藉以与抗核抗体周边型相鉴别。

3.9 相关疾病

韦格纳肉芽肿

相关文献

开放分类:化验及医学检查免疫学检查自身抗体测定
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  • 评论总管
    2019/8/25 20:14:36 | #0
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本页最后修订于 2013年3月5日 星期二 22:40:37 (GMT+08:00)
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