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β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶

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1 拼音

β-N-yǐ xiān ān jī pú táo táng gān méi

2 英文参考

β-N-acetyl glucosaminidase

3 概述

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)可水解β-N-乙酰氨基葡萄糖苷,也能水解β-N-乙酰氨基半乳糖苷。该酶广泛存在于各种组织器官体液血细胞中,是溶酶体中的一种酸性水解酶。其测定方法比色法荧光光度法。

4 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的医学检查

4.1 检查名称

β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶

4.2 分类

血液生化检查 > 酶类测定

4.3 β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的测定原理

(1)对硝基酚比色法:NAG可使底物对硝基酚-N-乙酰-β-D氨基葡萄糖水解,释放出游离的对硝基酚,在碱性溶液中显色,其颜色深浅与酶活力有关。

(2)荧光光度法:NAG可使荧光底物4-甲基伞形酮N-乙酰β-D-氨基葡萄糖苷水解,释放出游离的4-甲基伞形酮(4-MU),后者在碱性条件下变构,受激发产生荧光,其荧光强度可反

4.4 试剂

(1)对硝基酚比色法:

①50mmol/L枸橼酸缓冲液(pH4.6):称枸橼酸(C6H3O7·H2O)5.4g,枸橼酸三钠Na3C6H5O7·2H2O)10g,用蒸馏水溶解后稀释至1000ml。

②10mmol/L底物缓冲液:称对硝基苯N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷342.3mg,用上述缓冲液稀释至100ml,混匀,4℃冰箱可保存10天。

③50mmol/L硼砂-氢氧化钠缓冲液(pH9.8):称硼砂(Na2B407·H2O)4.77g,用蒸馏水溶解,加0.2mmol/L NaOH 170ml,再用蒸馏水稀释至1000ml。

④3mmol/L对硝基酚标准液:取纯化的对硝基酚41.7mg,用蒸馏水溶解并稀释至100ml,混匀后置冰箱保存。

(2)荧光光度法:

①枸橼酸-磷酸盐缓冲液(pH4.5):12.6g/L枸橼酸· H2O(60mmol/L)和13.5g/L无水碳酸氢钠(95mmol/L)各50ml,混合测pH应为4.5。取已配好的上述缓冲液(枸橼酸30mmol/L,磷酸盐47.5mmol/L)50ml,加叠氮钠10mg,牛血白蛋白50mg,溶解,4℃冰箱可稳定数周,混浊应弃去,此为含牛血清白蛋白的缓冲液。

②2mmol/L底物缓冲液:称4-甲基伞形酮-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MW:

379.4)7.6mg,溶入10ml含牛血清白蛋白缓冲液中,分装于具塞试管内,-20℃可保存数月,忌反复冻融。

③酶反应终止液(pH10.4):称甘氨酸37.5g,溶于1000ml蒸馏水中,加入920ml 0.5mol/L NaOH,用0.5mol/L NaOH调pH至10.4。

④300μmol/L 4-MU标准液:称4-MU 11mg,用终止液溶解并稀释至250ml,此为贮存液。置棕色瓶4℃保存,至多稳定10天。

4.5 操作方法

(1)对硝基酚比色法:按表1操作。

混合,在405nm波长,1cm光径,蒸馏水调零,读取各管吸光度,用(AU-AC)之差查标准曲线。

基质对硝基酚应纯化,配制前置50℃烘24h。用10mmol/L NaOH配成0.04mmol/L浓度,用窄带宽分光光度计扫描吸收曲线,λmax=401nm,根据IFCC标准,Aλmax=0.7316~0.7388,Eλmax=18380±90(25℃)。根据对硝基酚的摩尔吸光系数,计算NAG活性单位的公式为:

以上公式是根据IFCC的标准E值计算的,各实验室应根据具体仪器条件测定E值,建立计算式。

②底物溶解度小,配制时应先用适量pH 4.6缓冲液调成糊状,再逐渐加缓冲液至所需量。

③测定结果超线性范围时,应将标本生理盐水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。

④尿酶浓度受尿量影响较大,应留取24h尿量。若以NAG/g肌酐比值计算酶排出率,即不受尿浓缩或稀释的影响,又不需留24h尿。

(2)荧光光度法:先将血清或尿用不含牛血清白蛋白(BSA)的缓冲液作20倍稀释,按表2操作。

混匀,激发波长364nm,发射波长448nm,以终止液调零,6μmol/L 4-MU管调荧光强度至100后,分别测空白管及测定管的荧光强度。

①荧光法测NAG已有国产试剂盒,其敏感度高,不受尿色干扰

②也可用上海第三分析仪器厂产930荧光光度计,激发滤光片360,发射滤光片用(400+450)复合,效果满意。

③本法酶反应液中各成分浓度为:底物1.33mmol/L,枸橼酸20mmol/L,Na2HPO432mmol/L。

④配试剂所用溶剂应用重蒸馏水,底物应无游离4-MU,BSA中应无该酶或用50℃加热2h灭活

⑤血清中NAG于4℃稳定数小时至数天,-20℃可稳定数月。尿标本4℃稳定1周,也可用枸橼酸盐抗凝血浆。

⑥β-N-乙酰氨基葡萄糖苷可被二种酶催化水解,一种是β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(EC 3.2.1.30),另一种是β-N-乙酰已糖苷酶(EC 3.2.1.52),只有对提纯的酶才能限定EC 3.2.1.30或EC 3.2.1.52。目前国内文献中常称的NAG,严格地说是按所用底物命名的,而不是指酶对底物的特异性。所以目前国外文献常泛称β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶。

4.6 正常值

(1)对硝基酚比色法:血清NAG:21.54±6.4U/L,尿液NAG呈正态分布,中位数为9.13U/g肌酐,第95百分位数上限为16.10U/g肌酐。

(2)荧光光度法:

成人血清9.94±2.O7U/L。

人尿液6.39±3.19U/L Cre。

4.7 化验结果临床意义

血、尿NAG活性测定对反映肾实质病变,尤其是急性损伤活动期病变更

敏感,主要用于早期肾损伤监测和病情观察。

(1)肾小管疾病:重金属(汞、铅、镉等)及药物性肾损伤、缺血、缺氧、失血休克等均可引起NAG活性增加。

(2)肾病综合征:尿NAG常明显增加,缓解期下降,复发时迅速回升,故可作为临床观察指征。肾小球肾炎急性期变化较大,但与肾小管损伤相比,变化幅度较小。

(3)尿路感染的定位诊断:急、慢性肾盂肾炎尿NAG上升,能与单纯性膀胱炎区别。可用于早期上尿路感染的诊断。

(4)肾移植排斥反应的监测:肾移植排斥反应早期NAG即可升高,比尿蛋白血肌酐肌酐清除率更敏感。

(5)糖尿病肾痛早期诊断:糖尿病肾肾病尿NAG升高,用于本病的早期诊断优于尿白白及β2-微球蛋白

4.8 附注

(1)对硝基酚比色法:

①基质对硝基酚应纯化,配制前置50℃烘24h。用10mmol/L NaOH配成0.04mmol/L浓度,用窄带宽分光光度计扫描吸收曲线,λmax=401nm,根据IFCC标准,Aλmax=0.7316~0.7388,Eλmax=18380±90(25℃)。根据对硝基酚的摩尔吸光系数,计算NAG活性单位的公式为:

以上公式是根据IFCC的标准E值计算的,各实验室应根据具体仪器条件测定E值,建立计算式。

②底物溶解度小,配制时应先用适量pH 4.6缓冲液调成糊状,再逐渐加缓冲液至所需量。

③测定结果超线性范围时,应将标本用生理盐水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。

④尿酶浓度受尿量影响较大,应留取24h尿量。若以NAG/g肌酐比值计算酶排出率,即不受尿浓缩或稀释的影响,又不需留24h尿。

(2)荧光光度法:

①荧光法测NAG已有国产试剂盒,其敏感度高,不受尿色干扰。

②也可用上海第三分析仪器厂产930荧光光度计,激发滤光片360,发射滤光片用(400+450)复合,效果满意。

③本法酶反应液中各成分浓度为:底物1.33mmol/L,枸橼酸20mmol/L,Na2HPO432mmol/L。

④配试剂所用溶剂应用重蒸馏水,底物应无游离4-MU,BSA中应无该酶或用50℃加热2h灭活。

⑤血清中NAG于4℃稳定数小时至数天,-20℃可稳定数月。尿标本4℃稳定1周,也可用枸橼酸盐抗凝血浆。

⑥β-N-乙酰氨基葡萄糖苷可被二种酶催化水解,一种是β-N-乙酰氨基葡萄糖苷苷酶(EC 3.2.1.30),另一种是β-N-乙酰已糖苷酶(EC 3.2.1.52),只有对提纯的酶才能限定EC 3.2.1.30或EC 3.2.1.52。目前国内文献中常称的NAG,严格地说是按所用底物命名的,而不是指酶对底物的特异性。所以目前国外文献常泛称β-N-乙酰氨基葡萄糖苷苷酶。

4.9 相关疾病

肾损伤、肾病综合征、尿路感染、慢性肾盂肾炎、糖尿病

相关文献

开放分类:血液生化检查化验及医学检查酶类测定
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  • 评论总管
    2021/1/19 14:44:13 | #0
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本页最后修订于 2013年2月28日 星期四 23:06:52 (GMT+08:00)
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