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α-HBDH

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1 概述

α-HBDH(α-羟丁酸脱氢酶)与LDH关系十分密切,实际上它是LDH同工酶Ⅰ型,因其对α-酮丁酸亲合力高,所以当以α-酮丁酸作为底物时,所测LDH的活性特称为α-HBDH活性。α-羟丁酸脱氢酶测定方法主要有比色法和连续监测法。

2 α-HBDH的别名

α-羟丁酸脱氢酶

3 α-HBDH的医学检查

3.1 检查名称

α-HBDH

3.2 分类

血液生化检查 > 酶类测定

3.3 化验取材

血液

3.4 α-HBDH的测定原理

(1)比色法:α-羟丁酸脱氢酶作用于过量的α-酮丁酸生成α-羟丁酸,则剩余者与2,4-二硝基苯肼形成α-酮丁酸苯腙,在碱性溶液中呈棕色,其颜色深浅与酶活性成反比。

(2)连续监测法:α-羟丁酸脱氢酶催化α-酮丁酸还原成α-羟丁酸,同时使NADH氧化成NAD,在340nm监测NADH的氧化速率与该酶活性成正比。

3.5 试剂

(1)比色法:

磷酸缓冲液,0.067mol/L,pH 7.4。

A.0.067mol/L Na2HPO4(9.47g/L)。

B.0.067mol/L KH2PO4(9.08g/L)。

取A液80.2ml,加B液19.8ml,4℃保存

②NADH溶液(10mg/ml),临用前以pH7.4磷酸盐缓冲液配制。

③0.4g/L 2,4-二硝基苯肼溶液:称取2,4-二硝基苯肼400mg,加5mol/L HCl 200ml,待溶解后加蒸馏水至1000ml,4℃冰箱保存数周。

④0.4mol/L NaOH。

⑤0.1mol/L α-酮丁酸贮存液:称取α-酮丁酸1.02g,加pH7.4磷酸盐缓冲液约30ml,用饱和NaOH调pH至7.4,再用pH 7.4磷酸盐缓冲液稀释至100ml,分装于试管密塞,冰箱内可保存数月。

⑥1mmol/L α-酮丁酸底物应用液:临用前将α-酮丁酸贮存液用pH 7.4磷酸盐缓冲液稀释100倍。

(2)连续监测法:

①67mmol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2,30℃):9.47g/L Na2HPO4溶液180ml与9.08g/L KH2PO4溶液70ml混合即可。

②71mmol/L α-酮丁酸溶液:称取22mg α-酮丁酸钠盐,溶入25ml磷酸盐缓冲液中,0~4℃可稳定3个月。

③220μmol/L β-NADH溶液:称取NADH钠盐7.6mg,溶于50ml磷酸盐缓冲液中,临用前配制。

3.6 操作方法

(1)比色法:按表1进行操作。

混匀,在10~30min内,以490nm波长,光径1cm,蒸馏水调零比色,以AU-AC之差值,查标准曲线得酶活力单位。

(2)连续监测法:

①取血清0.05ml,加入NADH溶液2ml,37℃水浴10~15min,使NADH非特异性氧化完成。

②加入预温至37℃的α-酮丁酸0.1ml充分混合,立即倒入37℃恒温比色杯内监测。340nm波长,1cm光径,空气调零。

③如△A/min>0.08,用磷酸盐缓冲液稀释血清5或10倍后重测。

3.7 正常值

(1)比色法:61~155U/L(37℃)。

(2)连续监测法:72~182U/L。

3.8 化验结果临床意义

α-羟丁酸脱氢酶的活性与LDH的活性变化一致,但更能反映LDH1的活性变化,其特异性比总LDH活性高。与LDH、ASTCKCK-MB构成心肌酶谱,对诊断心肌梗死更有意义。

(1)心肌梗死时α-羟丁酸脱氢酶活性明显升高,且维持时间较LDH长,LDH/α-羟丁酸脱氢酶比值(0.8~1.2)低于正常对照(1.2~1.6)。

(2)鉴别肝病心脏病。肝病和心脏病时LDH均可升高,但肝病时α-羟丁酸脱氢酶活性变化不大,LDH/α-羟丁酸脱氢酶比值可升高至1.6~2.5,而心脏疾病时α-羟丁酸脱氢酶则明显升高。

(3)营养不良叶酸维生素B12缺乏时,α-羟丁酸脱氢酶活性亦可升高。

3.9 附注

(1)比色法:

①Rosalki及Wilkinson建立的α-羟丁酸脱氢酶测定方法是30℃的连续监测法,以国际单位(U/L)计算。上述方法是37℃比色法,为使各方法间结果有更好的可比性,可转换成30℃连续监测法的相应单位。37℃转换成30℃温度系数为0.87。

②因红细胞内该酶活性高,应在2h内及时分离血清,标本不能溶血。4℃酶活性稳定不少于7天。

③可用EDTA(1mg/ml)、肝素(0.2mg/ml)抗凝血浆,草酸盐枸橼酸钠氟化物抗凝剂抑制该酶活性。

(2)连续监测法:

①此法是1980年由英国临床化学协会(ACB)推荐,其最适底物浓度为15mmol/L(25℃),反应混合物的最终浓度:磷酸盐65.4mmol/L、NADH 0.2mmol/L、α-酮丁酸3.3mmol/L,样品容积组分比0.023。改为37℃测定结果与LDH相关性较好。

②α-酮丁酸钠较稳定,α-酮丁酸长期存放,其缩合物可抑制酶促反应。

③国内商品试剂盒的方法,一般是在操作前将α-酮丁酸与NADH溶液混合,置反应温度条件下数分钟后,作为单一试剂取出一定量加入样品中,延迟时间30s后,监测3min。

相关文献

开放分类:血液生化检查化验及医学检查酶类测定
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  • 评论总管
    2020/12/4 7:20:58 | #0
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本页最后修订于 2013年2月28日 星期四 23:16:56 (GMT+08:00)
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